白及不同提取部位对小鼠止血活性实验

吴久健，孟岳良，邹俪华,邱 彦

(1.解放军第37医院，四川 雅安 625000；2.成都军区联勤部卫生部，四川 成都 610015；3.总参管理保障部保健处，北京 100034；4.第二军医大学药学院，上海 200433)

·药理学·

白及不同提取部位对小鼠止血活性实验

吴久健1，孟岳良2，邹俪华3,邱 彦4

(1.解放军第37医院，四川 雅安 625000；2.成都军区联勤部卫生部，四川 成都 610015；3.总参管理保障部保健处，北京 100034；4.第二军医大学药学院，上海 200433)

目的确定白及的止血活性部位，为其止血活性成分的筛选提供线索和依据。方法用70%乙醇(EtOH)对白及原药材进行渗漉提取，然后，依次用石油醚(Pet)、乙酸乙酯(EtOAc)、正丁醇(n-BuOH)对醇浸膏进行萃取，分别制得Pet部分、EtOAc部分、n-BuOH部分和H2O部分，通过测定小鼠凝血时间和出血时间，考察其活性部位。结果n-BuOH部分和H2O部分具有止血作用，而EtOAc部分具有延长凝血、出血时间作用。结论白及中具有止血作用的活性成分主要存在于n-BuOH部分和H2O部分，而EtOAc部分具有活血作用。

白及；出血；止血；小鼠；活性

中药白及系兰科植物白及Bletillastriata(Thunb.) Reichb. f. 的干燥块茎，多年生草本，是历版《中国药典》收载的常用中药之一。临床上广泛用于治疗咳血、吐血、外伤出血、疮疡肿毒、皮肤皲裂、肺结核吐血、溃疡病出血等病症，疗效显著。化学研究表明，白及主要含有联苄类、二氢菲类、联菲类、苷类及白及多糖等多种化合物，但是对白及止血作用的活性成分未见报道。笔者对白及进行了提取并研究了其石油醚部分、乙酸乙酯部分、正丁醇部分和水部分对小鼠止血作用的实验，为进一步研究其止血活性成分提供指导。现将方法和结果报道如下。

1 材料与方法

1．1药品 白及药材购于贵州独山县药材公司，经第二军医大学药学院生药学教研室张汉明教授鉴定为Bletillastriata(Thunb.) Reichb. f.的干燥块茎；云南白药胶囊为云南白药集团股份有限公司产品。

1．2动物 昆明种小鼠，体重18～22 g，雌雄各半，第二军医大学动物实验中心提供，动物合格证号：SCXK(沪)2002-0006。

1．3样品液制备 白及1 000 g，70%乙醇渗漉提取制成浸膏，依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取，回收有机溶剂，真空干燥(60 ℃)，制成干浸膏，并称定各提取物，计算各部分得率。临用前，用0.1%-CMC配成适宜浓度的溶液。

1．4对小鼠凝血时间的影响(毛细玻管法) 小鼠100只，共分空白对照组(等体积的0.1%-CMC溶液)、云南白药组(即阳性对照组，0.33 g/kg)和石油醚组、乙酸乙酯组、正丁醇组及水提物组4个给药组，每个给药组分高、低两个剂量组(50 g生药/kg， 25 g生药/kg)，试验小鼠每个剂量组10只，雌雄各半。每日灌胃给药1次，连续10 d。末次给药后 30 min，用内径1 mm、长10 cm的毛细玻管插入小鼠内毗球后静脉丛取血，深约4～5 mm，轻轻转动再缩回。自血流入管内开始记时，每隔30 s折断毛细玻管一小截，检查有无血凝丝出现。记录从毛细玻管采血到出现血凝丝的时间，此即为凝血时间。

1．5对小鼠凝血时间的影响(玻片法) 分组及给药情况同1.4，末次给药后 30min，用眼科弯镊迅速摘去一侧眼球即有血液流出，于载玻片上滴1滴血，血滴直径约5 mm，立即记时，每隔30s用清洁大头针自血滴边缘向里轻轻挑动1次，并观察有无血丝挑起。从采血开始至挑起血丝止，所历时间即为凝血时间。

1．6对小鼠出血时间的影响 分组及给药情况同1.5，末次给药后 30 min，将小鼠固定，露鼠尾于外，用手术刀片切割左侧尾静脉1/2处(严格控制切割深度)，待血液自行溢出开始计时，每隔30 s用滤纸吸去血滴一次，直至血流自然停止(滤纸吸时无血)为止，即为出血时间。

1．7统计处理 利用SPSS10.0软件进行ANOVA分析差异的显著性。

2 结果

2．1毛细玻管法测定对小鼠凝血时间的影响 白及正丁醇部位高剂量显著缩短小鼠凝血时间，水溶性部位高剂量也能缩短小鼠凝血时间，石油醚部位对小鼠凝血时间无明显影响，而乙酸乙酯部位高剂量可以显著延长凝血时间。结果见表1。

表1 白及各提取部位对小鼠凝血时间的影响

注：1)P<0.05，2)P<0.01，与空白对照组比较。

2．2玻片法测定对小鼠凝血时间的影响 白及正丁醇部位低剂量、高剂量均显著缩短小鼠凝血时间，水溶性部位高剂量显著缩短小鼠凝血时间，石油醚部位对小鼠凝血时间无明显影响，而乙酸乙酯部位高剂量可以显著延长凝血时间。结果见表1。

2．3对小鼠出血时间的影响 白及正丁醇部位高剂量显著缩短小鼠出血时间，水溶性部位高剂量可以缩短小鼠出血时间，石油醚部位对小鼠凝血时间无明显影响，而乙酸乙酯部位高剂量可以延长凝血时间。结果见表2。

表2 白及各提取部位对小鼠出血时间的影响

注：1)P<0.01，与空白对照组比较。

3 讨论

中药白及为兰科多年生草本植物的地下块茎，是一种常用中药。白及性涩微寒，味甘辛微苦，有收敛止血，消肿生肌的功效。颐庆平等用白及治疗烧伤创面，发现其止血效果优于立血止、凝血酶、立止血、医用生物蛋白胶，并能促进创面愈合[4]。药理研究证实，白及可缩短凝血时间，但对其作用机制及有效成分研究较少。国外主要是日本对白及的化学成分作了一些研究，但活性成分的报道较少，尚未明确其发挥药理作用的物质基础。

笔者利用现代中药化学的方法对白及进行了提取、分离，得到了不同的极性部位；研究了各极性部位对小鼠凝血功能的影响，结果发现白及水溶性部位和正丁醇部位可显著缩短小鼠凝血时间和出血时间，石油醚部位对小鼠凝血时间和出血时间无明显影响，而乙酸乙酯部位可显著抑制小鼠凝血时间和出血时间。陆波等[5]报道了白及正丁醇提取部位和水溶性部位可显著升高腺苷二磷酸(ADP) 诱导的家兔血小板最大聚集率,而乙酸乙酯提取部位可显著抑制ADP 诱导的血小板聚集,而石油醚提取部位无显著影响。本研究结果与陆波等[5]的一致，进一步说明白及水溶性部位和正丁醇部位是其止血作用的主要有效部位，而乙酸乙酯部位表现出活血活性。《医林慕要·药性》中记载白及“敛肺散淤，降逆气”，《福建药物志》中记载白及“补肺生肌，化淤止血”，白及的药性是止血活血药，本研究结果也证白及是一味止血活血药。三个部位具体有效成分及作用机制还有待于进一步深入研究。

[1] 刘松敏,张晓霞,安治勋.白及粉治疗上消化道出血30例[J].中医药学报,2000,28(1):27.

[2] 蔡春浩.中药白芨胶减少胃、十二指肠溃疡再出血临床观察[J].浙江医学,1996,18(4):225.

[3] 吴震西.白及止血生肌效著[J].中医杂志,1997,38(7):389.

[4] 姬庆平,周明德,刘 芳.烧伤供皮区创面应用白芨粉止血效果观察[J].新疆医科大学学报,1999,17(6):359.

[5] 陆 波,徐亚敏,张汉明，等.白及不同提取部位对家兔血小板聚集的影响[J]. 解放军药学学报,2005, 21(5):330.

2010-12-12

[修回日期] 2011-03-16

EffectsofdiferentextractsfromBletillacolloidonhemostasisactivityinmice

WU Jiu-jian1，MENG Yue-liang2，ZOU Li-hua3,QU Yan4

(1. 37th Hospital of PLA, Ya'an 625000,China ；2.The Health Ministry of Chengdu Military Command, Chengdu 610015，China；3. Health Care Department of Management and Logistic Support Department, General Staff Headquarter of PLA, Beijing 100082,China;4.School of Pharmacy, Second Militany Medical Unversity, Shanghai 200433,China)

ObjectiveTo determine the active position ofBletillacolloidand offer references to the seleciton of its active composition.MethondsThe crudeBletillacolloidwas extracted by 70% ethanol permeating , then the petroleum ether extract,ethyl acetate exctract ,n-butyl alcohol extract and water extract were exctracted from alcohol extract in turn by petroleum,ethyl acetate,n-butyl alcohol extraction. The active position was determined by measuring the time of mice blood coagulation and hemorrhage.ResultsN-butanol extract and water extract fromBletillacolloidhad hemostasis effect，ethyl acetate extract had the effect of prolonging the time of blood coagulation and hemorrhage.ConclusionN-butanol extract and water extract fromBletillacolloidwas major active extracts played a part in hemostasis, ethyl acetate extract had the effect of invigoration the circulation of blood.

Bletillacolloid；hemorrhage；hemostasis；mouse

吴久健(1971-)，男，副主任药师.E-mail:clwsb@163.com.

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1006-0111(2011)03-0206-03