用双向琼脂扩散实验检测甲胎蛋白的安全模拟方法

王美惠，李 岩

（辽宁卫生职业技术学院，辽宁 沈阳 110101）

用双向琼脂扩散实验检测甲胎蛋白的安全模拟方法

王美惠，李 岩

（辽宁卫生职业技术学院，辽宁 沈阳 110101）

双向琼脂；扩散实验；甲胎蛋白

双向琼脂扩散实验是将抗原和抗体分别加到琼脂板相对应的孔中，两者各自向四周扩散，若二者相对应，在比例合适处形成白色沉淀线。若同时含有多种抗原抗体系统，因其扩散速度不同，可在琼脂层中形成多条沉淀线。这项实验可用于多种抗原成分的分析和鉴定，如检测甲胎蛋白。用双向琼脂扩散实验检测甲胎蛋白需要肝癌患者的血清和健康人血清，为避免学生和实验教师接触患者血液标本，我们用模拟方法做这个实验。

1 材料

（1）1%琼脂（生理盐水配制）。（2）阳性血清。（3）甲胎蛋白诊断学清。（4）待检血清。（5）阴性对照血清。（6）载玻片、打孔器等。

2 模拟方法

（1）阳性血清——人免疫球蛋白IgG代替；

（2）甲胎蛋白诊断血清——羊抗人IgG免疫血清代替；

（3）待检血清（肝癌患者的血清）——人免疫球蛋白IgG代替；

（4）阴性对照血清——生理盐水代替。

用生理盐水将人免疫球蛋白IgG稀释一定浓度来代替肝癌患者血清（IgG代替肝癌患者血清中的甲胎蛋白），用生理盐水将羊抗人IgG免疫血清稀释一定浓度来代替甲胎蛋白诊断血清（IgG抗体代替甲胎蛋白抗体），抗原IgG和IgG抗体在比例合适处形成白色沉淀线。在做实验之前先做预实验，找出抗原IgG和IgG抗体能形成白色沉淀线的最佳浓度。

3 实验方法

（1）用1%琼脂（生理盐水配制）铺板。

（2）用打孔器打梅花孔（见图1）。

（3）1、4孔加入阳性血清，2、6 孔加入待检学清，3、5孔加入阴性对照血清，中心孔加入甲胎蛋白诊断血清。

（4）将加好样品的琼脂板放于湿盒内，置37℃温箱24小时，观察并记录结果。

4 结果判断

若待检血清标本产生沉淀线，并与阳性对照所产生的沉淀线吻接成一线，则表示阳性。如无沉淀线，则表示阴性。

5 优点

此模拟方法安全，实验效果非常好。

G424.31

B

1671-1246（2011）01-0132-01