HPLC 法测定亮叶杨桐叶中槲皮苷的含量

2011-09-26宋志钊李文琪

中国民族民间医药 2011年5期

关键词：槲皮苷刻度乙腈

宋志钊刘元李文琪

广西中医药研究院，广西南宁 530022

HPLC 法测定亮叶杨桐叶中槲皮苷的含量

宋志钊刘元李文琪

广西中医药研究院，广西南宁 530022

目的：建立亮叶杨桐叶中槲皮苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，以TC－C18色谱柱为分离柱，以乙腈－0.1%磷酸 (20：80)为流动相，254nm为检测波长，柱温为室温。结果：槲皮苷在0.05～1.60μg范围内，峰面积与其浓度呈良好线性关系 (r=0.9992)，平均回收率为97.4%，RSD为1.00%(n=6)。结论：该方法简便、准确、重复性好，可作为该药材含量测定方法。

亮叶杨桐叶;槲皮苷;HPLC

Abstract：Objective：to assay the content of Quercitr in Adinandra Nitida by HPLC．Method：The TC－C18(4．6 mm× 250mm，5μm)column was used，the mobile phase consisted of acetonitrile－0．1%phosphoric acid(20：80)，the detection wave length was 254nm and the column temperature was room temperature．Resuilts：Linearity of Quercitr was good at 0.05～1.60μg(r= 0.9992)．The average recovery of buddleodide was 97.4%with RSD less than 1.00% (n=6)．Conclution：The method is simple，accurate and repeatable，which can be applied in determination of Quercitr in Adinandra Nitida．

Key words：Adinandra Nitida;Quercitr;HPLC

亮叶杨桐叶，别名：石芽茶、亮叶红淡、亮叶黄瑞木、石崖茶，系山茶科植物亮叶杨桐 Adinandra nitida Merr.ex Li的干燥叶。主要分布于我国广东、广西和贵州等省区，资源丰富。民间制作、饮用及服用该种绿茶已有悠久历史，具有较突出的消炎、解毒、止血和降压等功效［1］，是一种保健和药用价值很高的野生植物。亮叶杨桐叶中主要含有黄酮类、茶多酚类和咖啡因三类活性成分，其中总黄酮含量为28.4%，还含有20.9%的茶多酚，咖啡因的含量较低。其总黄酮主要有：芹菜素、山茶苷A、山茶苷B、槲皮苷和长梗冬青苷［2、3］。因此摸索亮叶杨桐叶中槲皮苷的含量测定方法，可作为控制本品质量标准的指标之一。现参考《中国药典》2005年版一部和相关文献［4～6］，测定亮叶杨桐叶中槲皮苷的含量。

1 仪器与试药

日本岛津LC－10ATVP高效液相色谱仪，SPD－10AVP紫外检测仪;威玛龙色谱工作站;TC－C18柱 (4.6mm× 250mm，5μm);KQ－100VDB双频数控超声清洗仪。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余所用试剂均为分析纯。槲皮苷对照品 (中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号111538－200403;亮叶杨桐叶药材10批，由本院黄云峰同志采集，赖茂祥研究员鉴定，金秀4批，批号为：090204、090605、090802、091221;马山 2批，批号：090712、091118;昭平2批，批号为：090711、091210;上思2批，批号为：090711、091215。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：TC－C18色谱柱 (4.6mm× 250mm，5mm);检测波长为270nm;流动相：乙腈－0.1%磷酸 (20：80);流速：1.0 mL·min－1;柱温为室温。理论塔板数按槲皮苷峰计算不低于3000。

2.2 对照品溶液的制备精密称取槲皮苷对照品10.0mg，置25ml量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成400μg/ml对照品溶液，备用。精密吸取上述对照品溶液0.25mL，置10mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得 (10.0μg·mL－1)。

2.3 供试品溶液的制备取本品药材粉末 (过80目筛) 0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足缺失的重量，摇匀，滤过，即得。加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.4 标准曲线及线性范围考察精密称取槲皮苷对照品10.0mg，置25ml量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成400μg/ml对照品溶液，备用。精密吸取12.5ml置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成200μg/ml对照品溶液，分别精密吸取200μg/ml槲皮苷对照品溶液0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样10ul，测定。以槲皮苷对照品进样量μg为横坐标 (X)，峰面积积分值为纵坐标(Y)绘制标准曲线，得回归方程为：Y=2.61×106X+ 4.52×103，r=0.9992。结果表明：槲皮苷进样量在0.05～1.60μg之间与峰面积积分值呈线性关系。

2.5 精密度试验分别吸取同一供试品溶液，进样5次，依次测定，即得。测得供试品RSD为0.77%。

2.6 重复性试验取同一批号 (090204)样品，按供试品溶液制备方法制备6份，分别进样，测定，即得。结果测得槲皮苷含量为0.535%，RSD=1.28%(n=6)。表明该方法重复性良好。

2.7 稳定性试验取同一供试品溶液分别于0，4，8，12，16h进行测定，即得。结果供试品中槲皮苷含量的RSD为1.42%，表明供试品溶液在16h内保持稳定。

2.8 加样回收试验取已测知含量 (0.535%，批号090204)的供试品0.1g，精密称定，精密加入槲皮苷对照品溶液 (400μg·mL－1)1.4mL，按供试液制备项下的方法制备。结果槲皮苷平均回收率为97.4%，RSD为1.00%(n =6)，结果见表1。

表1 加样回收试验测量结果 (n=6)

2.9 样品测定按供试液的制备及检测方法，测定10批亮叶杨桐叶药材中槲皮苷含量，结果见表2。槲皮苷含量(%)在0.314～1.08之间。

表2 10批石崖茶药材中槲皮苷测量结果

3 讨论

3.1 对槲皮苷对照品溶液进行紫外扫描，结果其在254nm处有最大吸收，故确定检测波长为254nm。参照《中国药典》2005年版一部里有关槲皮苷含量测定方法，以乙腈－0.1%磷酸为流动相，考察多个比例，最后确定乙腈－0.1%磷酸 (20：80)的比例较为适合。

3.2 采用超声处理30min、加热回流1h、索氏提取2h进行提取方法考察，超声提取含量测定结果较低，加热回流与索氏提取结果相差不大，但加热回流更简便、快捷，故采用加热回流法。采用甲醇、水、50%甲醇作提取溶剂进行考察，用50%甲醇提取所得含量比高，且杂质较少，故采用50%甲醇作为提取溶剂。以加热回流30min、1h、2h，进行提取时间考察，加热回流30min，测得结果较低，加热回流1h、2h，两者无明显差别，故加热回流时间定为1h。