高效液相色谱法测定十五味龙胆花丸中原儿茶酸含量

程 民

(安徽省淮北市食品药品检验所，安徽 淮北 235000)

十五味龙胆花丸是由白花龙胆、檀香、广枣、肉豆蔻、沉香等15味药组方，具有清热理肺、止咳化痰的功效，临床用于支气管炎和肺气肿、咳嗽气喘、声嘶音哑[1]。原标准中只有丸剂的常规检验项目。为全面控制质量，笔者参考相关文献[2－5]，建立了测定方中主药广枣中原儿茶酸含量的高效液相色谱(HPLC)法，报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100 Serise高效液相色谱仪，VWD紫外可变检测器，Agilent 1100自动进样器，Agilent液相色谱工作站;日本岛津UV－2401PC型紫外可见分光光度计;Mettler AE－240型电子分析天平(0.01 mg)。原儿茶酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110809－200604);十五味龙胆花丸(青海金诃藏药药业股份有限公司，批号分别为20080203，20080209，20080318);甲醇为色谱纯，水纯化水，冰乙酸为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent Technologies Eclipse XDB C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇 －0.1% 冰乙酸(10 ∶90);检测波长:260 nm;柱温:25 ℃;流速:1.0 mL/min;进样量:20 μL。

2.2 溶液制备

精密称取原儿茶酸对照品19.51 mg，置100 mL量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，制成质量浓度为195.1 μg/mL的对照品贮备液。取本品约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇30 mL，称定质量，浸渍过夜，超声处理30 min，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得供试品溶液。另按处方比例和供试品溶液制备方法制成不含广枣的阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:取2.2项下3种溶液，在选定条件下，测得原儿茶酸对照品的保留时间约16.1min;供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上有相同的色谱峰，且原儿茶酸与杂质分离度大于1.5;理论板数按原儿茶酸峰计算应不小于3 000;阴性对照无干扰。色谱图见图1。

线性关系考察:精密吸取质量浓度为 195.1 μg/mL 的对照品 贮 备 液 1.0，2.0，3.0，5.0，8.0，10.0 mL，分别置 100 mL 量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取20 μL注入液相色谱仪，按上述条件测定，记录峰面积。以质量浓度(X)为横坐标、峰面积(Y)为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为 Y=78.131 7 X －1.965 1，r=0.999 9(n=6)。结果表明，原儿茶酸质量浓度在1.95～19.51 μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。

图1 高效液相色谱图

精密度试验:取对照品溶液，重复进样8次，记录峰面积。结果的 RSD为1.3%(n=8)。表明方法精密度好，符合含量测定要求。

稳定性试验:取同一供试品(批号为20080203)溶液，分别于0，1，2，4，6，8，10，12 h 时进样，记录峰面积。结果的 RSD 为 1.36(n=8)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

重复性试验:取同一批号(批号为20080203)样品6份，每份约2 g，精密称定，依法制备供试品溶液并测定含量。结果平均含量为0.095 4 mg/g，RSD=0.13%(n=6)，表明方法重复性好。

加样回收试验:取已知含量样品(批号为20080203)6份，每份约1 g，精密称定，精密加入原儿茶酸对照品溶液(质量浓度分别为3.00，3.75，4.50 μg/mL)，置具塞锥形瓶中，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 原儿茶酸加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取3批样品，每批约2 g，精密称定，依法测定。结果批号为20080203，20080209，20080318的样品中原儿茶酸平均含量分别为0.095 4，0.096 4，0.097 6 mg/g。

3 讨论

在供试品溶液制备时，比较了回流1 h与浸泡24 h后再超声处理30 min，结果浸泡后再超声，含量较回流法高，且方法简便、含量测定结果准确、重复性好、回收率高。

本法试验了不同的流动相，通过比较不同体系流动相的色谱行为，如甲醇 － 水(35∶65)、乙腈 － 水 －0.05%磷酸(15∶85∶1)、乙腈 －0.05 mol/L 磷酸二氢钾(40∶60)、甲醇 －0.1%冰乙酸(10∶90)，并调整各流动相比例及流速，最后选择峰形好、分离度符合要求的甲醇－0.1%冰乙酸(10∶90)为流动相。

[1]WS－58(Z－125)－2002，中华人民共和国卫生部药品标准·藏药(第一册 )[S].

[2]赵志军，刘铁刚.血尿胶囊薄层鉴别及原儿茶酸含量测定方法的研究[J].中成药，2006，28(4):604 － 606.

[3]陈 勇，方翠芬，向智敏，等.RP－HPLC测定勒马回胶囊中原儿茶酸的含量[J].中成药，2007，29(12):1 867 －1 869.

[4]陈树和，孙丽娟，刘红兵，等.不同产地牛至药材中原儿茶酸的含量分析[J].中国医院药学杂志，2008，28(3):179 －181.

[5]邓 华，赖海容.妇血康颗粒中原儿茶酸含量测定方法改进[J].中国药业，2008，17(20):36.