用高效液相法测定肾特康胶囊中盐酸小檗碱的含量

袁常青邢亮 李长富 朱玲玲白斌

(1京东中美医院，河北 三河 101601；2中美华医（河北）制药有限公司，065201)

肾特康胶囊是我院自制复方中药制剂，由黄芪、黄连、地黄、人参、水蛭等十味药组成，具有温肾健脾，活血化瘀功能，用于慢性肾炎、肾功能不全、肾功能衰竭证属脾肾阳虚、瘀血内阻证者。黄连是方中臣药之一，其主要成分盐酸小檗碱是其药理活性物质，用高效液相法对该成分进行测定，该方法准确方便，干扰少。

1 仪器与材料

1.1 仪器 SSI二元高压液相色谱仪，Thermo可变波长紫外检测器和EZ Chrom Elite色谱工作站（美国科学技术公司），Thermo Hypersil C18色谱柱(4.6 mm × 25 mm，5 μm)；UV-1801紫外可见分光光度计（北京化分瑞利有限责任公司）；KQ-50B型超声波提取器（昆山市超声仪器有限公司）；AB265-S十万分之一电子分析天平（梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司）。

1.2 试剂与试样 盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110713-200208，供含量测定用）；乙腈为色谱纯；纯化水；磷酸、三乙胺、磷酸二氢钾均为分析纯；肾特康胶囊 （京东中美医院制剂室，090503，090603，090805，090907，091101）。

2 方法与结果[1]

2.1 检测波长的选择

对盐酸小檗碱甲醇溶液在200～400 nm进行光谱扫描，有两个最大吸收峰分别为265 nm和254 nm，同时参考黄柏药材色谱条件[2]选择265 nm为检测波长。

2.2 色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈－0.33 mol/L磷酸二氢钾溶液（0.5%三乙胺，磷酸调pH值至3.0）30∶70为流动相；检测波长为265 nm。理论板数以盐酸小檗碱峰计算应不低于4 000。

在上述色谱条件下，盐酸小檗碱保留时间约9.1 min，且阴性对照在相应的位置无干扰。见图1～图3。

图1 盐酸小檗碱对照品

图2 肾特康胶囊盐酸小檗碱阴性

图3 肾特康胶囊供试品

2.3 对照品溶液的制备

精密称取在100℃干燥5 h的盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，即得。

2.4 供试品溶液的制备

取本品装量差异项下的内容物，研细，取0.2 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入流动相25 mL，称定重量，加热回流30 min，取出，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.5 线性关系考察

精密称取盐酸小檗碱对照品1.168 0 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取对照品溶液2、5、8、10、12、15 μL，注入液相色谱仪，按拟定的色谱条件测定峰面积分别为 317985、768251、1235748、1554219、1856922、2 269 632。以峰面积积分值为纵坐标，盐酸小檗碱进样量为横坐标绘制标准曲线（见图4），计算回归方程：Y=12 97 759.284 X+20 114，r=0.999 7，盐酸小檗碱在0.233 6～1.752 μg范围内呈良好的线性关系。

图4 盐酸小檗碱线性关系

2.6 精密度试验

精密吸取对照品溶液10 μL，按上述色谱条件，连续进样5次，测定其峰面积分别为1465806、1495460、1490 340、1 497 411、1 465 970，RSD=1.1%（n=5），表明仪器精密度良好。

2.7 重复性试验

取同一批（批号090503）样品，按供试品溶液制备方法平行制备供试品溶液5份，测定盐酸小檗碱含量，结果分别为 2.22、2.12、2.10、2.22、2.18mg/粒，平均含量 2.168mg/粒，RSD=2.58%（n=5），结果表明方法重复性良好。

2.8 稳定性试验

精密吸取同一份供试品溶液，按上述色谱条件，分别在不同时间（0、2、4、6、12 h）进样 10 μL,测定盐酸小檗碱的峰面积，结果分别为 788 282、790 444、788 647、777 784、786 548，平均峰面积为 786 341，RSD=0.6%，（n=5），结果表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.9 加样回收率试验

精密称取已知含量的同一批号（批号：090503，平均装量0.447 mg/粒，平均含量2.168 mg/粒）的样品约0.1 g，分别精密加入盐酸小檗碱对照品溶液（0.497 mg/mL）各1 mL，挥干溶剂，按“供试品溶液制备”项下的方法制成供试品溶液并测定，计算回收率，平均回收率为98.47%，RSD=3.0%（n=5），结果见表 1。

2.9 含量测定结果

取样品 5 批，分别为 090503，090603，090805，090907，091101，按“供试品溶液制备”项下的方法制成供试品溶液并测定，结果分别为 2.20、1.98、1.96、1.90、2.16 mg/粒，平均含量为2.04 mg/粒。

表1 加样回收率试验

3 讨论

3.1 经对乙腈-0.1%磷酸溶液（50∶50）（每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g），乙腈-0.33 mol/L磷酸二氢钾溶液（0.5%三乙胺，磷酸调pH值至3.0）30∶70等流动相条件选择，均能达到较好分离，但考虑到离子对试剂和色谱柱的性能影响较大，故选择乙腈-0.33 mol/L磷酸二氢钾溶液（0.5%三乙胺，磷酸调pH值至3.0）30∶70为流动相，结果盐酸小檗碱与杂质峰分离度良好，峰形对称，经系统适用性试验，均能符合要求，且阴性样品无干扰。

3.2 供试液制备方法参考《中国药典》2005版（一部）黄连药材的制备方法，经对回流提取与冷浸放置过液提取效果比较，两者没有明显的区别，为缩短检验时间，确定回流提取为供试液制备方法，该方法分析迅速、准确。

[1]谢秀琼.中药新制剂开发与应用［M］.北京：人民卫生出版社，2002：298-314.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［S］.北京：化学工业出版社，2005：214，附录 114-116.