水红花子对免疫肝纤维化大鼠肝功能及血清肝纤维化标志物的影响*

杜宇琼 赵 晖 张秋云 法振鹏 季巍巍 车念聪

首都医科大学（北京 100069）

水红花子对免疫肝纤维化大鼠肝功能及血清肝纤维化标志物的影响*

杜宇琼 赵 晖 张秋云 法振鹏 季巍巍 车念聪△

首都医科大学（北京 100069）

目的 观察水红花子对免疫肝纤维化大鼠模型血清肝纤维化标志物的影响。方法40只wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、秋水仙碱组、水红花子组。除正常对照组外，其余各组均给予腹腔注射无菌猪血清，剂量为0.3mL/100g，每周2次，连续12周。模型对照组、正常对照组每日灌服蒸馏水1mL/100g；其余各组灌服相应药物。采用放射免疫的方法观察肝纤维化大鼠血清肝纤维化指标（HA、LN、Ⅳ-C、PCⅢ）的变化。结果与模型对照组比较，各治疗组血清学标志物均有不同程度改善，其中秋水仙碱组PCⅢ、HA、LN显著降低；水红花子组LN、PCⅢ、HA、Ⅳ-C显著降低。结论水红花子可有效降低肝纤维化血清学指标，其作用优于秋水仙碱。

水红花子 免疫肝纤维化 肝功能

水红花子性味辛、咸，微寒，归肝、脾、胃经，具有散血消癓，消积止痛的功效，在临床已广泛应用于急慢性肝病中的各期的治疗。但作为治疗慢性肝病传统药物之一[1]，目前水红花子各方面的研究工作还很不完善，其药用机理、药效学方面的研究还处于初步探索阶段[2]。其对肝纤维化作用机理的研究尚未见报导。本实验通过建立猪血清诱导的免疫肝纤维化大鼠模型，通过对血清肝纤维化指标的观察，初步探讨水红花子对猪血清诱导的免疫肝纤维化大鼠的抑制作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 wistar大鼠40只，雌雄各半，清洁级，体质量（210±20）g，由首都医科大学实验动物中心提供，合格证号：维通利华SEXK（京）2006-009。饲养于首都医科大学实验动物室，恒温恒湿，任意进食进水，以标准饲料喂养，并进行适应性喂养约7d。

1.2 药物与试剂 猪血清购自北京元亨金马生物技术开发有限公司，批号为100410；水红花子（北京同仁堂有限公司，生产批号091117，产地：辽宁本溪），水煎成 100%浓缩液，4℃保存，秋水仙碱（购于首都医科大学附属北京友谊医院，西双版纳药业有限责任公司，批号：100617，用蒸馏水配成1mg/100mL的溶液）。 血清透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）试剂盒由中生北控生物科技股份有限公司提供。血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂盒、血清天门冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒由北京北化康泰临床试剂公司提供。

1.3 主要仪器 37℃恒温箱、标准规格酶标仪、光学显微镜，日本Olympus公司；SABA-18全自动生化分析仪、DY8f-1型电动玻璃匀浆机，美国BEKCMAN公司；J-25型低温高速离心机，中国宁波新芒科器研究所；HTEMRO超低温冰箱，美国BEKCMAN公司；DU-530型紫外分光光度计，日本三洋公司；自动γ放射计数仪。

1.4 分组与造模 40只大鼠进行1周适应性喂养后随机分为正常对照组、模型对照组、秋水仙碱治疗组、水红花子治疗组。采用腹腔注射无菌猪血清（0.3mL/100g）进行造模；正常对照组注射等剂量生理盐水；每周2次，连续12周。

1.5 给药方法 秋水仙碱组每日灌服秋水仙碱1次；水红花子组每日灌服水红花子水煎浓缩液1次，用量为0.12mL/100g；正常对照组和模型对照组每日灌服蒸馏水1mL/100g；均连续12周，饲养条件相同，其中给药组于造模第2日开始灌服药物。

1.6 标本采集与检测 将大鼠进行腹腔注射麻醉，麻醉后大鼠固定于鼠板上，依次剪开胸骨两侧皮肤肌肉；同样方法剪开胸骨柄下端的皮肤肌肉，注意防止剪断血管，剪开后将胸肋骨向上掀起，使心脏充分暴露。使用连接注射器的针头，从心尖部纵向刺入心室腔，吸取血液至尽，注入干净的试管内保存。全血分离血清，于4℃静置 30min后，4℃ 2500r/min离心 20min，分离血清，-80℃保存待检（检测血清酶、肝纤指标及细胞因子等）。

2 结 果

2.1 水红花子对血清肝功能指标的影响 见表1。与正常对照组大鼠比较，模型对照组大鼠血清ALT、AST、ALP水平均显著升高（P＜0.05或0.01）；秋水仙碱组与模型对照组大鼠比较，血清 ALT、AST、ALP 水平无明显变化（P＞0.05）；水红花子组与模型对照组比较，血清 ALT、AST、ALP 水平均显著升高（P＜0.01）。

表1 各组肝纤维化大鼠血清肝功能指标 （U/L，±s）

与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。下同。

组 别 n ALT正常对照组 10 42.70±4.95**AST 109.40±37.22**模型对照组 10 66.80±16.71* 90.20±27.03**ALP 69.30±27.24**140.00±35.76**秋水仙碱组 10 69.70±8.30** 168.00±44.63** 89.10±22.55**水红花子组 10 41.70±7.21** 107.80±17.00** 63.90±20.43**

2.2 水红花子对血清肝纤维化指标的影响 见表2。与正常对照组大鼠相比，模型对照组大鼠血清HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C明显升高（P＜0.01）；秋水仙碱组HA、LN、PCⅢ较模型对照组显著降低（P＜0.05 或 0.01）；水红花子组 HA、LN、Ⅳ-C、PCⅢ较模型对照组显著降低（P＜0.05或 0.01）。

3 讨 论

在慢性肝炎中肝细胞的炎症、坏死是肝炎后肝纤维化的非常重要的启动因素之一。肝细胞持续、慢性的损伤，导致多种细胞（肝细胞、肝星状细胞、枯否氏细胞、成纤维细胞等）、多种细胞因子参与的肝纤维化的形成与发展，是肝纤维化的过程中的首要问题。所以有效保护肝细胞功能、防止肝细胞的炎症与坏死，是抑制炎症细胞浸润，也是治疗肝纤维化的重要策略之一。ALT、AST、ALP水平是临床常用的反映肝细胞功能的重要血清生化指标。本实验研究即以猪血清诱导的免疫肝纤维化模型为研究对象，观察到经水红花子治疗后，实验大鼠血清ALT、AST、ALP的含量均有不同程度改善，证明在水红花子对猪血清诱导的免疫肝纤维化大鼠的肝细胞功能均具有保护作用，可以抑制肝纤维化大鼠肝细胞的炎症反应。

表2 各组大鼠血清HA、LN、Ⅳ-C、PCⅢ含量比较 （±s）

表2 各组大鼠血清HA、LN、Ⅳ-C、PCⅢ含量比较 （±s）

组 别 n HA（μg/L）正常对照组 10 97.70±4.44*LN（ng/mL）121.31±8.67*模型对照组 10 118.87±19.24 138.60±16.90秋水仙碱组 10 95.42±13.15**103.64±24.24**水红花子组 10 93.65±16.86**122.88±23.21*Ⅳ-C（μg/L）98.32±16.81*131.06±25.60 131.74±14.90 113.45±17.44**PCⅢ（μg/L）111.11±11.90*125.42±17.18 113.71±25.37*114.72±21.71*

血清中HA、LN、Ⅳ-C及PⅢP是胶原组织的降解产物，也是临床研究最多的肝纤维化血清学指标，目前已成为诊断肝纤维化的重要血清学标志物。能够反映肝纤维化时肝细胞外基质的变化。其中，HA是反应最为敏感，其含量变化与肝的纤维化程度呈正相关。LN反应肝窦毛细血管化和汇管区纤维化，在肝纤维化晚期其升高更为明显。Ⅳ-C是反应肝内基底膜胶原变化的可靠指标[4]。PⅢP为肝内正常胶原Ⅲ型胶原的前体，其血清含量可以反应Ⅲ型胶原的代谢情况，并可反映肝纤维化程式度[5]。本实验结果表明，水红花子治疗后实验大鼠的血清学标志物与模型对照组比较均有不同程度改善。证明水红花子具有抗肝纤维化作用，其作用机理尚待进一步研究。

以上结果表明：水红花子可明显改善肝纤维化大鼠的肝功能；使肝纤维化血清学指标下降，提示该药具有明显的抗肝纤维化作用。这为临床应用水红花子治疗肝纤维化提供了实验依据。

[1]陈红.中西医结合治疗肝硬化腹水近况[J].广西中医学院学报，2005，8（1）：65.

[2]翟延君，张淑荣，郝宁，等.水红花子研究概况[J].辽宁中医学院学报，2005，7（3）：226.

[3]陆燕婷，汪太松，顾欣.血清肝纤维化指标在各型肝病诊断中的应用[J].标记免疫分析与临床，2010，17（6）：350-353.

[4]董永杰，彭彦辉，赵晓云，等.肝纤维化血清学诊断方法的研究进展[J].医学综述，2007，13（22）：1743.

[5]刘杰，王吉耀，陆晔.血清纤维化指标对肝纤维化诊断价值的研究[J].中华内科杂志，2006，45（6）：475-477.

[6]MacwellP R，Flisiak R.Change in serological biomarkers of liver function and connective tissue turnover in chronic hepatitisB during lamivudine therapy[J].Biomarkers，2005，10（6）：475-484.

Effect of Fructus Polygoni Orientalis on the Liver Function and Serum Liver Fibrosis Markers of Immune Liver Fibrosis Rats

DU Yu-qiong，ZHAO Hui，ZHANG Qiu-yun，et al
Capital Medical University（Beijing100069）

Objective：To explore the effect of fructus polygoni orientalis on the serum liver fibrosis markers of immune liver fibrosis rats.Methods：40 wistar rats were divided randomly into the normal group，the model group，the colchicinum group and the fructus polygoni orientalis group.Excluding the control group，3 groups were injected 0.3mL/100g swine serum to set up liver fibrosis.The model group and the normal groups were given NS frombaseline lmL/100g.Another groups were given the same volume/weight medicine respectively.Indices of serum liver fibrosis were observed by the radioimmunoassay method.Results：Compared with the model group，serum indices in the treatment group and the control group were improved.In the colchicinum group，the PCⅢ，HA and LN were decreased obviously.In the fructus polygoni orientalis group，the LN，PCⅢ，HA and Ⅳ-C were reduced remarkably.Conclusion：Fructus polygoni orientalis can significantly reduced the elevate levels of serum markers of liver fibrosis.Its effect is superior to that of the colchicinum.

Fructus polygoni orientalis；Immune liver fibrosis；Liver function

R285.5

A

1004-745X（2011）09-1433-02

北京市中医药管理局中医药科技发展基金资助项目（JJ2009-18）

△通信作者

2011-04-26）