宣痹汤治疗IgA肾病大鼠的实验研究*

李建英 孙云松 胡维华 刘先英

山东省青岛市海慈医疗集团（山东青岛 266033）

宣痹汤治疗IgA肾病大鼠的实验研究*

李建英 孙云松 胡维华 刘先英

山东省青岛市海慈医疗集团（山东青岛 266033）

目的 探讨宣痹汤对实验性IgA肾病大鼠的作用机理。方法采用口服牛血清白蛋白及静注葡萄糖球菌肠毒素制成的大鼠IgA肾病模型，分析宣痹汤的作用机理。结果宣痹汤各治疗组对降低C反应蛋白、血尿素氮、血肌酐及大鼠尿红细胞较雷公藤多苷治疗组明显；各治疗组肾组织IgA荧光强度较模型组均弱；各治疗组肾小球轻度增大，系膜细胞和系膜基质增生的程度较模型组均轻，系膜细胞数较模型组少。结论宣痹汤能降低IgA肾病大鼠尿红细胞和尿蛋白，减轻炎症状态，减少肾组织中IgA的沉积，改善肾功能。

宣痹汤 IgA肾病

IgA肾病是以出现镜下血尿或肉眼血尿或蛋白尿，血清IgA可升高，肾小球系膜区IgA免疫复合物沉积为特征的一类肾小球肾炎，是导致终末期肾脏病的最常见的原发性肾小球疾病之一[1]。笔者认为IgA肾病的中医病机可概括为风湿郁热、痹阻肾络的“肾痹证”。本实验采用牛血清白蛋白和葡萄球菌肠毒素复合感染的IgA肾病大鼠模型，运用宣痹汤进行治疗，探讨其防治IgA肾病的可能作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF级wistar大鼠60只，6～8周龄，体质量（200±20）g，雌雄各半，由青岛市实验动物和动物实验中心提供，动物许可证号SCXK（鲁）20030010。

1.2 实验药物 宣痹汤：由木防己、杏仁、滑石、连翘、山栀、薏苡仁、半夏、晚蚕沙、赤小豆、姜黄组成；药材水煎、抽滤、水浴蒸发浓缩制成水煎剂（含生药1.5g/mL）；雷公藤多苷片（10mg/片，浙江得恩德制药有限公司，生产批号：081101），加蒸馏水制成混悬液。

1.3 主要试剂 牛血清白蛋白（BSA），购自RocHE生物工程有限公司；葡萄球菌肠毒素（SEB），购自军事医学科学院微生物流

行病学研究所；荧光抗体为FITC标记的羊抗小鼠IgA抗体，购自美国Sigma公司。

1.4 分组及造模 将大鼠随机分为正常对照组、模型组、雷公藤多苷组、宣痹汤低剂量组、宣痹汤中剂量组、宣痹汤高剂量组，每组各10只。参照文献[2]方法造模。隔日口服含牛血清白蛋白（BSA）200mg/kg的酸化水（用1%盐酸酸化水稀释），同时于第6周开始尾静脉注射BSA20mg/kg，每日1次，连续3次，8周时附加尾静脉注射葡萄糖球菌肠毒素（SEB）0.6mg/kg，每周1次，连续3周，然后观察至第12周末。

1.5 给药方法 正常对照组、模型组灌胃蒸馏水2mL；雷公藤多苷组予雷公藤多苷稀释液2mL（6.3mg/kg）灌胃；宣痹汤低剂量组灌服宣痹汤1mL（7.5g/kg）；宣痹汤中剂量组灌服宣痹汤2mL（15g/kg）；宣痹汤高剂量组灌服宣痹汤4mL（30g/kg）。 所有动物均自由饮水和进食。自实验的第6周起灌服，均每日1次，共进行12周。

1.6 标本采集与检测 24h尿蛋白测定采用比浊法，C反应蛋白（CRP）测定采用乳胶增强免疫投射比浊法，血清肌酐（SCr）测定采用苦味酸法；血尿素氮（BUN）采用尿酶法。取1/2肾脏一块，用10%中性甲醛溶液固定，24h后逐级酒精脱水，二甲苯透明，60℃石蜡包埋，用于HE染色，观察肾组织形态学变化，肾组织形态学检测按照肾脏病理Lee氏分级标准[3]。取1/2肾脏一块入液氮速冻，-70℃保存用于免疫荧光冰冻切片，肾小球IgA荧光染色采用直接法。

2 结 果

2.1 一般情况 建立IgA肾病模型过程中，造模大鼠于第7周开始均出现不同程度的精神不振、皮毛不光泽，于第12周末部分大鼠出现水肿，治疗2～3周后缓解。模型组、雷公藤多苷组、宣痹汤高剂量组大鼠各死亡2只，宣痹汤低、中剂量组大鼠各死亡1只，从实验中剔除。正常对照组小鼠精神状态一直良好。

2.2 各组大鼠尿红细胞及尿蛋白比较 见表1。各组大鼠于造模第6周末均出现血尿及蛋白尿，各组间比较无显著差异。第12周末，模型组的尿红细胞及尿蛋白定量明显高于其他治疗组（P＜0.05）；各治疗组的尿蛋白定量明显低于模型组，但相互间差异无统计学意义（P＞0.05）；宣痹汤各治疗组尿红细胞数改善优于雷公藤多苷组（P＜0.05）。

表1 各组大鼠尿红细胞计数、尿蛋白定量比较 （±s）

表1 各组大鼠尿红细胞计数、尿蛋白定量比较 （±s）

与正常对照组比较，*P＜0.05；与模型组比较，▲P＜0.05；与雷公藤多苷组比较，△P＜0.05。 下同。

组 别 n 尿红细胞数（个/HP）正常对照组 10 0.62±1.15尿蛋白（mg/24h）63.52±30.48模型组 8 7.65±3.51* 155.71±54.46*雷公藤多苷组 8 5.50±2.24*▲ 117.92±37.75*▲宣痹汤低剂量组 9 4.14±2.12*▲△ 120.22±43.91*▲宣痹汤中剂量组 9 4.17±2.16*▲△ 118.27±39.79*▲宣痹汤高剂量组 8 4.21±2.19*▲△ 120.50±40.12*▲

2.2 各组大鼠生化指标比较 见表2。模型组血BUN、SCr和CRP明显高于正常对照组（P＜0.05）。各治疗组的血BUN和SCr明显低于模型组，但相互间无显著差异（P＞0.05）。中药治疗各组对CRP改善要优于雷公藤多苷组（P＜0.05）。

表2 各组大鼠生化指标比较 （±s）

表2 各组大鼠生化指标比较 （±s）

组 别 n BUN（mmol/L）正常对照组 10 0.62±1.45模型组 8 7.65±3.51*雷公藤多苷组 8 5.50±2.24*▲宣痹汤低剂量组 9 5.64±2.37*▲宣痹汤中剂量组 9 5.57±2.19*▲宣痹汤高剂量组 8 5.61±2.32*▲SCr（μmol/L）63.52±30.48 155.71±54.46*107.92±37.75*▲113.22±43.95*▲108.27±39.79*▲110.50±40.12*▲CRP（mg/L）0.26±0.12 0.84±0.26*0.50±0.16*▲0.58±0.20*▲△0.60±0.26*▲△0.54±0.18*▲△

2.3 肾组织光镜检测结果 光镜下模型组多数肾小球系膜细胞重度增生，基质增多，球囊粘连，局灶节段硬化，肾小管多灶状萎缩和代偿性肥大，相当于Lee氏Ⅲ级病变。各治疗组系膜细胞增殖及系膜基质增殖均减轻，偶见球囊粘连和节段硬化。见图1。

2.4 肾组织免疫荧光检测结果 对照组肾小球系膜区无IgA沉积，模型组肾小球系膜区有较强的呈线状及块状结构的IgA沉积，各治疗组肾小球系膜区的IgA沉积荧光强度较弱。正常组和模型组大鼠肾组织IgA荧光强度比较有非常显著的统计学差异（P＜0.05），表明模型组大鼠肾组织IgA荧光强度明显增强，实验模型复制成功。各治疗组与模型组IgA荧光强度比较有明显减弱（P＜0.05）。

图1 各组大鼠肾脏病理组织切片（HE染色，×200）

3 讨 论

循环免疫复合物沉积所致的体液免疫机制参与IgA肾病的发病已经得到公认。本实验结果表明：造模6周起即出现不同程度的血尿和蛋白尿，肾脏免疫荧光显示了IgA在肾小球系膜区呈团块样沉积，提示造模成功。此种沉积的免疫球蛋白从微观辨证的角度可以认为是黏滞的湿浊之邪。

IgA肾病目前尚无有效的治疗方法，根据其发病机理，一般采用免疫抑制剂、抗血小板聚集、控制诱发因素等治疗。中医学把IgA肾病归属于“尿血”、“腰痛”、“虚劳”等范畴。其病机为风湿郁热、痹阻肾络之“肾痹证”，在治疗上以清热祛湿、宣痹通络立法，予吴鞠通《温病条辨》中的宣痹汤以治之。本实验研究表明，宣痹汤能显著减少IgA免疫复合物在肾脏中的沉积，同时改善血尿、蛋白尿，减轻肾脏病理学改变，降低SCr、BUN。其可能机制是该方具有免疫调节功能，影响IgA免疫复合物的生成、代谢、转归、排泄，从而减少免疫复合物在肾脏中的沉积。宣痹汤中杏仁、滑石、连翘、山栀、薏苡仁、半夏、赤小豆长于清热除湿；防己、晚蚕沙、姜黄祛湿活络；诸药合用，使湿祛热清、经络宣通、肾痹自愈。本实验结果表明：宣痹汤与雷公藤多苷片在减轻实验性IgA肾病大鼠尿蛋白、保护肾功能及减少IgA在系膜区沉积的作用无明显差异。宣痹汤在减轻炎症反应状态、改善血尿方面明显优于雷公藤多苷片，而且无明显副作用，其作用机理可能与复方的清热祛湿、通络止血的综合作用较单味药更为全面和缓有关。

综上所述，可以认为宣痹汤能治疗IgA肾病的作用机制可能与具有多层次综合的抗炎及抗免疫作用，显著抑制肾小球系膜区IgA的沉积、改善免疫功能有关。证明了该方药对IgA肾病有较好的治疗作用，值得进一步开发与研究。

[1]王海燕.肾脏病学[M].3 版.北京：人民卫生出版社，2009：993.

[2]刘宏伟，卢景芬，李彩熙，等.滋肾止血片对实验性IgA肾病小鼠肾组织氧自由基的影响[J].中国中医基础医学杂志，1996，22（6）：24-26.

[3]Lee S M K，Rao V M，Franklin W A，et al.IgA nephropathy：Morphologie predietors of progressive renal disease[J].Hum Pathol，1982，13（6）：314-322.

Experimental Study of Xuanbi Decoction on IgA Nephropathy Rats

LI Jian-ying，SUN Yun-song，HU Wei-hua，et al
Qindao Haiser Hosipital，Qindao City，Shandong Province（Qingdao266033，Shandong）

Objective：To evaluate the mechanism ofXuanbi Decoctionon IgA nephropathy rat models.Methods：The IgA nephropathy rat model was copied by the methods of oral taking BSA and vein injection of SEB.Results：Reduction degrees including CRP，BUN and SCr in theXuanbi Decoctiongroups were more obvious than those of the tripterygium glycosides group.The fluorescence intensities of theseXuanbi Decoctiongroups were weaker than those of the model group.Meanwhile，in theseXuanbi Decoctiongroup，the glomerular were increased.However，the degrees of the mesangial cell and the mesangial matrix proliferations were weaker than those of the model group.Also，the number of the mesangial cell was lower than that of the model group.Conclusion：Xuanbi Decoctioncan reduce the microscopic heamaturia and deposits of the protein immunoglobulin A inside the glomeruli within the kidney.

Xuanbi Decoction；IgA nephoropathy

R285.5

A

1004-745X（2011）09-1435-02

山东省青岛市科技发展计划项目（08-2-1-7-nsh-4）

2011-04-04）