化瘀通脉煎剂不同煎煮方法的指纹图谱研究

邓震亭，马 瑛，刘 芳，柴士伟（天津中医药大学第一附属医院，天津市 300193）

煎剂是中药的传统剂型之一，是临床医师辨证论治、随方加减治疗疾病的重要手段。长期以来，煎剂的制备以采用饮片手工煎煮为主，但随着人们生活方式的改变，中药煎药机得到越来越广泛的应用，特别是在医院中已经被普遍的应用[1]。煎药机分为2种类型：常压和高压。这两种煎煮方法对中药煎剂造成的质量差异一直缺乏全面、系统的评价；目前，文献多是以某一种主要成分作为指标对不同的煎煮方法进行比较，所得结果比较片面，不能全面的反映不同煎煮方法的特点[2，3]。因此，笔者在化瘀通脉煎剂的指纹图谱研究的基础上，采用指纹图谱技术对采用不同煎煮方法的化瘀通脉煎剂的质量差异进行全面的评价[4～6]。

1 仪器与试药

Waters 600E高效液相色谱仪，配有UV检测器、四元梯度泵、在线脱气装置、自动进样器，EMPOWER工作站（美国Waters公司）；AX205分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）。

丹酚酸 B（批号：880200010）、阿魏酸（批号：110773-200611）对照品均购于中国药品生物制品检定所；丹参、川芎、当归、鸡血藤均购于河北美威中药材有限公司，经天津中医药大学第一附属医院马瑛主任药师鉴定为真品；甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取阿魏酸对照品5 mg，置于25 mL量瓶中，用体积分数为50%的甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

精密称取丹酚酸B对照品5 mg，置于25 mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2 供试品溶液的制备

2.2.1 高压煎煮溶液的制备 取同一批化瘀通脉处方饮片5份，加10倍量水，浸泡20 min后放入高压煎煮机煎煮40 min，溶液定容至1 000 mL，备用。

2.2.2 常压煎煮溶液的制备 取同一批化瘀通脉处方饮片5份，加10倍量水，浸泡20 min后放入常压煎煮机煎煮40 min（先武火，溶液沸腾后改用文火），溶液定容至1 000 mL，备用。

2.3 色谱条件

色谱柱：大连依利特Hypersil ODS2 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.05%甲酸溶液，线性梯度洗脱（0→40→60→80 min，乙腈的比例为10%→20%→80%→90%；0.05%甲酸溶液的比例为90%→80%→20%→10%）；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：280 nm；柱温：30 ℃。

2.4 精密度试验

分别吸取阿魏酸、丹酚酸B对照品溶液各20 μL，按“2.3”项下色谱条件连续进样测定5次。结果，色谱峰的保留时间的RSD分别为1.96%、2.32%，相对峰面积积分值的RSD分别1.23%、2.47%，n均为5，表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验

取同一常压煎煮供试品溶液20 μL，分别在 0、4、8、12、24、48 h进样6次。结果，14个共有峰相对保留时间的RSD平均为2.13%，相对峰面积积分值的平均RSD为2.56%，n均为6，表明供试品溶液48 h内稳定性良好。

2.6 重复性试验

取同一批次的化瘀通脉煎剂9份，按“2.2.1”项下方法，取供试品溶液20 μL，照“2.3”项下色谱条件进样分析。结果，14个共有峰保留时间的RSD平均为2.41%，相对含量的RSD平均为3.72%，n均为9，表明方法重复性良好。

2.7 指纹图谱的建立

在前期试验中，笔者对不同批次12份高压煎煮样品进行检测，建立了化瘀通脉煎剂的共有模式指纹图谱，包含14个共有峰，其中6号峰为阿魏酸，9号峰为丹酚酸B，相似度均在0.92以上。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatograms

2.8 样品溶液的测定

分别将上述2种供试品溶液减压浓缩至干，加50%甲醇溶解，定容至25 mL。进样前用0.45 um滤膜过滤，按上述色谱条件进样测定，图谱见图2。

图2 常压、高压下煎剂指纹图谱比较Fig 2 Comparison of fingerprints of decoctions under atmospheric and high pressure

由图2可知，常压煎煮所得煎剂中6号峰（阿魏酸）、8号峰比高压煎煮含量稍高，而9号峰（丹酚酸B）含量明显增加；高压煎煮煎剂中1、2、3、4、7号峰含量比常压煎煮含量增加明显，其中11号峰增加最显著；两种煎煮方法对12、13、14号峰影响不明显。

3 讨论

分析两种煎煮方法所造成的煎剂的质量差异：高压煎煮中9号峰（丹酚酸B）含量降低可能是由于丹酚酸B不稳定，在高压煎煮过程中降解所导致；11号峰增加明显推测可能为丹酚酸B的降解产物。

利用指纹图谱比较两种煎煮方法的化瘀通脉煎剂的质量差异，总体上看：高压煎煮后有些共有峰的含量有所提高，但临床疗效还需要进一步进行临床试验，以期为中药选择煎煮方法提高临床疗效提供指导。

[1] 龚慕辛，王欣苗，郁崴岳，等.北京市医院、药店中药煎药机使用情况调研[J].中国中药杂志，2008，33（8）：980.

[2] 于忠兴，唐风雷，范正达.自动煎药与传统煎煮法对白芍汤剂质量的影响[J].抗感染药学，2006，3（2）：81.

[3] 杨 凌，包玮鸳.煎药机煎药与传统方法煎药的煎出率比较[J].时珍国医国药，2001，12（5）：410.

[4] 孙国祥，池剑玲，宋宇晴.HPLC指纹图谱控制复方丹参片质量[J].沈阳药科大学学报，2009，25（12）：971.

[5] 陶金成，钱文锦，宋少刚.不同厂家复方丹参注射液质量考察[J].中国药房，2005，16（12）：937.

[6] 陈玉娟，张宏佳，贺丽鹏，等.水曲柳HPLC指纹图谱研究[J].中国药房，2008，19（9）：673.