HPLC法测定导赤丸中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量

陈兴田 黄金华

（1 徐州医学院附属医院药剂科，江苏 徐州 221002；2 *南通大学医学院，江苏 南通 226001）

导赤丸收载于1995年版《中国药典》，是由大黄为主药，配以连翘、黄连、栀子等中药制成的大蜜丸，具有利尿通便，清热泻火的功效。文献报道有关导赤丸的质量控制研究多为荧光扫描法[1,2]，常只测定单一成分。在导赤丸标准中制订了显微鉴别与薄层色谱鉴别，但无其中大黄的含量测定；本实验我们采用高效液相色谱法，测定了其中大黄的5种成分含量，达到进一步完善质量标准，更好地控制其质量，起到良好效果。

1 仪器与试药

KQ-250VDB型双频数控超声波清洗器由昆山市超声仪器有限公司出品；高效液相色谱仪采用岛津LC-20AD型，配以Shimadzu VPODS色谱柱（规格4.6mm×250mm，5μm）紫外检测器采用日本Shimadzu公司出产的SPD-20A型；电子天平采用日本Shimadzu公司的AUW120D型； LC-20AD泵；标准品芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚和大黄素为中国药品生物制品检定所出，纯度均≥98%；试验样品导赤丸由北京中药五厂，批号（100817、100922、101008）。水为自制的多重蒸水，甲醇、乙腈为色谱纯；其他均为分析纯试剂。

2 方法与结果

2.1 实验品溶液的制备

将导赤丸用粉碎机粉碎，然后取细粉精密称取1.0g，加80 mL甲醇溶解，再分2次超声提取，每次20min，合并后滤过，回收滤液中的甲醇并浓缩至干，酸化时加40mL10%盐酸，摇匀后分3次萃取，每次用氯仿100mL，3次萃取液合并后回收氯仿，余下残渣再用甲醇稀释至30 mL，用0.50μm微孔滤膜过滤，即为实验品溶液[3,4]。

2.2 标准对照品的制备

精密称取纯度很高的对照品大黄素15mg，大黄酸5mg，芦荟大黄素15mg，大黄酚5mg，大黄素甲醚5mg分别放置棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释到50mL，充分摇匀，得各对照品母液。然后再分别吸取母液1、2、5、10、15mL置同棕色容量瓶中，用甲醇溶解稀释到50mL，摇匀，就成为对照品混合液。见图1。

图1 对照品（A）和供试品（B）色谱图

2.3 线性关系

准备好液相色谱仪，流动相采用乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱；设定波长262nm；控制流速1.0mL/min；柱温30℃；每次进样量10μL；取对照品混合溶液1、4、8、12、20μL，依次吸注入，测定其峰面积。横坐标是测得的浓度，纵坐标是相应峰面积积分值，进行线性回归处理。计算测得的芦荟大黄素的回归方程是Y = 26312468.4012 X-368728.1998，r= 0.9994，线性范围为0.042～0.841μg；大黄素的回归方程为Y=1529651.5149 X-21996.5749，r= 0.9996，线性范围为0.085～1.688μg；大黄酸的回归方程为Y=1235866.2489 X-96883.3987，r=0.9997，线性范围为0.167～3.371μg；大黄酚的回归方程为Y=2120163.7978 X-23997.4768，r=0.9998，线性范围0.091～1.1804μg；大黄素甲醚的回归方程为Y=804967.1203X-5978.1309，r= 0.9993，线性范围为0.170～3.61μg。

2.4 精密度实验

参照上述2.3方法，取同一供试品液连续加样5次，测定5种活性成分的峰面积并计算出各成分的RSD。测得的芦荟大黄素、大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚峰面积的RSD分别是2.19%、1.63%、2.91%、2.51%和1.72%，表明该仪器的精密度良好。

2.5 重复性实验

参照上述2.3方法制备供试品溶液，同一批5份依次测定。实验显示芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚峰面积的RSD分别为2.10%、2.09%、2.18%、2.13%和1.88%，表明此法试验重复性良好。

2.6 稳定性试验

按照上述色谱条件，取同一供试品溶液，在0、2、4、6、8h 5个节段分别进行测定。结果测得芦荟大黄素、大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚峰面积的RSD分别为0.8%、2.18%、1.63%、1.49%和1.38%，显示供试品溶液在5分段时间内比较稳定。

2.7 加样回收率实验

取已知含量的导赤丸供试品，精密称取1 g共5份，再各分别加入1.0mL对照品混合液，混合后使各成份含量分别约为0.056、0.19、0.12、0.23、0.19mg。按照上述“2.3”项的方法，进行各成分的含量测定，实验结果计算回收率分别是：99.6%、99.1%、99.6%、98.8%、99.2%；RSD分别为1.30%、1.70%、0.89%、0.90%和99.6%（n= 5）。

2.8 样品的测定

分别吸取供试品和对照品溶液各10μL，以上述同等条件测定，测得结果用外标一点法计算样品中各大黄成分的含量，其中3批样品测定结果见表1（批号分别为100817、100922、101008）。见表1。

表1 样品含量测定结果(mg/g)

3 讨 论

本试验确立了导赤丸中五种大黄成分的含量测定方法；在实验过程中我们采用超声提取法，此方法相对其它如加热回流法操作简便，结果也准确，稳定重复好，是一个较好的提取法，可以作为该产品质量控制使用[5,6]。

[1]夏青.薄层扫描法测定导赤丸中盐酸小檗碱的含量[J].长春中医药大学学报,2008,24(6):659-660.

[2]邬国庆,周富荣.薄层扫描法测定导赤丸中盐酸小檗碱的含量[J].中国中药杂志,1999,24(7):412-413.

[3]江苏省药品标准.江苏省卫生局编[S].南京: 江苏科学技术出版社,1977:260.

[4]国家药典委员会编.中华人民共和国药典 (一部) [M].北京:化学工业出版社,2005:214.

[5]陈广通,李玉琴,黄金华,等. HPLC法测定十滴水中五种活性成分的含量[J].中国医药导报,2010,7(29):40-42.

[6]陈广通,汪冬庚,李玉琴,等.赤丸中大黄5种成分的HPLC测定[J].长春中医药大学学报,2010,20(5):621-622.