HPLC法测定云芝肝泰颗粒中葡萄糖的含量

马新民 赵俊华

（吉林省白城市食品药品检验所，吉林 白城 137000）

云芝肝泰颗粒由多孔菌科真菌云芝干燥子实体粗提取物制成的混悬性颗粒，收载于《卫生部药品标准》十三册[1]。本品有免疫调节剂，临床上主要用于治疗慢性活动性肝炎。处方中云芝的主要成分有云芝多糖、三萜类成分，其他有核苷类、甾醇类、生物碱类等，2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷为云芝肝泰颗粒的主要指标之一[2]。高效液相色谱法有很高分离能力、所达到的灵敏度极高、应用也非常广泛。应用高效液相色谱法测定云芝肝泰颗粒中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，测定准确、快捷、可信。

1 仪器与材料

日本岛津LC-2010A高效液相色谱仪，（包括二元梯度泵、紫外线检测器）。甲醇为色谱纯（USA DIKMA-PURE：LOT：57440）；2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品110844-200505（中国生物制品检定所）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：乙腈∶水（24∶76）为流动相；流速0.8mL/min；柱温：室温；进样量10μL；检测波长320nm；理论板数按2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面积计算不低于1500。

2.2 对照品溶液制备

取2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每lmL含20μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液制备

精密称取装量差异项下的供试品，精密称取2.5g，置25mL棕色量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得。

2.4 阴性对照溶液

取本品处方缺云芝的其他组分，按“2.3”项下方法制备。

2.5 线性关系考察

图1 干扰试验

精密吸取2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液（0.02010mg/mL）4.0μL、7.0μL、10.0μL、13.0μL、16.0μL，分别注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以峰面积积分值为纵坐标，进样量为横坐标（mg）绘制标准曲线，回归方程为：Y=3968841.3X-2682.5，r=0.99999，结果表明2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在8.04～32.16μg/mg范围内具备良好的线性关系。

2.6 干扰试验

取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，按上述色谱条件测定，阴性样品无干扰。结果见图1。2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷出峰位置在3min左右，与其他组分均能达到基线分离。

2.7 精密度试验

精密吸取同一2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液（0.02010mg/mL），10μL，重复进样5次，测定峰面积，RSD为0.4%（n：5）。结果表明，精密度较好。

2.8 稳定性试验

取同一供试品溶液（批号20080303），分别于配置后0，2，4，6，8，12，18h进样，依次进行测定，最终结果表明，供试品溶液在18h内基本稳定。

2.9 重复性试验

同一批号样品（批号20080303）称取5份，分别按上述方法测定，RSD为1.0%结果表明此法重复性良好。

2.10 回收试验

采用加样回收法，精密称取同一批号样品（批号20080303，含量43μg/袋，）9份各约1.25g，分别精确加入对照品适量，按“2.3”项下方法及色谱条件，进行测定，并计算回收率，结果见表1。

表1 回收率试验结果表

2.11 样品测定结果

按照“2.2”、“2.3”的处理方法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定3批样品，测定结果见表2。

表2 样品测定结果表

3 结 论

通过紫外分光光度法与样品HPLC法测定样品含量对比，HPLC法更适合，方法简便，重现性较好，灵敏度极高，从而准确可行。

[1]WSB-2527-97,卫生部药品标准·中药成方制剂(第十三册)[S].1997.

[2]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2005.