负载羟喜树碱的纳米粒子制备及其释放性质

柳怀玉 王 斓 周小洲 韩 冰 张海锋 才子斌 (吉林大学动物实验中心，吉林 长春 00)

羟喜树碱是目前我国临床上应用较多的喜树碱类药物，其活性强于喜树碱数十倍〔1〕。喜树碱类药物比较难溶于水〔2〕，而易溶于碱性溶液，在碱性溶液中，内酯环结构易于打开，从而形成钠盐;但是喜树碱类药物的内酯结构是发挥抗癌作用的重要结构，所以增加水溶性后疗效会降低。本研究运用复乳法将羟基喜树碱包裹于聚乳酸羟基乙酸(PLGA)中制备羟喜树碱PLGA缓释纳米粒，从而延长羟喜树碱发挥抗肿瘤作用的时间，提高患者的依从性和生物利用度。本文观察羟喜树碱PLGA纳米粒的表观形态、粒径、载药量、体外释放等特性。

1 材料与方法

1.1 材料 羟喜树碱购于上海龙翔生物科技公司;PLGA购于美国雷克少公司;二氯甲烷、乙腈等常规试剂购于天津化工;BS124S型电子天平(德国赛多丽丝公司);JY88-IIN型超声细胞破碎仪(宁波新芝科技公司);高效液相色谱仪(德国安捷伦公司)。

1.2 方法

1.2.1 羟喜树碱PLGA纳米粒的制备 取一定量的PLGA，用有机溶液将其溶解，并向其中加入一定量的羟喜树碱水溶液，溶解后超声处理制备成乳状溶液。将此溶液逐滴加入到50 ml聚乙烯醇(PVA)水溶液中，高速搅拌，之后加水稀释，将PVA浓度控制在2%，700 r/min低速搅拌2 h。将外水相滤出，对剩余溶液进行离心，每次20 min，离心2次。最后将其浓缩后，向纳米粒中加入5%的甘露醇并进行冻干。

1.2.2 纳米粒的表面形貌观测及粒径测定 取一定量的羟喜树碱PLGA纳米粒样品，用水溶解后用显微镜进行观察，记录表面形貌。利用粒度分析仪对纳米粒的粒径进行测定并记录分析。

1.2.3 纳米粒的载药量测定 取5 mg纳米粒样品，将之置于10 ml离心管底部，向其中加入乙腈溶液，涡旋振荡处理，而后利用高效液色谱仪相对羟喜树碱进行检测，利用上述方法对多批制备得到的羟喜树碱PLGA纳米粒分别进行载药量的测定。

1.2.4 纳米粒的体外释放检测 取20 mg纳米粒样品，置于10 ml离心管底部，加入5 ml pH7.0的磷酸盐缓冲液(PBS)，封口膜封口，将离心管置于37℃的摇床中，120 r/min进行摇动，固定的时间点离心，取出4 ml上清液，其中20 ml用于液相检测，其余弃掉，同时向离心管中补充4 ml新鲜PBS缓冲液，使释放继续进行。每次相应检测时间点重复上述检测。共对3批制备得到的纳米粒样品进行体外释放检测，绘制三批样品的平均释放曲线。

2 结果

2.1 纳米粒的表面形貌及粒径 经测定羟喜树碱PLGA纳米粒的平均粒径为139.4 nm。制备的羟喜树碱PLGA纳米粒表观形态完整，细小均匀。见图1。

图1 羟喜树碱PLGA纳米粒的表面形态

2.2 纳米粒的载药量 A、B、C三组的羟喜树碱PLGA纳米粒的平均载药量为6.03%，各组制备的羟喜树碱PLGA纳米粒的载药量无统计学差异(P＜0.01)。结果显示羟喜树碱PLGA纳米粒制备的工艺重现性良好，组间差异小。见表1。

表1 A、B、C三组的羟喜树碱PLGA纳米粒载药量结果(%)

2.3 纳米粒的体外释放 将释放药物累积后做百分比图，其中横坐标为时间，纵坐标为累计释放百分比，纳米粒的体外药物释放基本呈现0级释放，释放周期维系1个月左右。见图2。

图2 羟喜树碱PLGA纳米粒的药物体外释放曲线

3 讨论

近几年来，药剂学的快速发展使缓释制剂得以很好的发展，很多药物都逐步开始了在缓释制剂平台的应用研究工作〔3〕。制备纳米粒的材料很多，本研究采用的是新型聚合物PLGA，该材料具有良好的生物降解性、生物相容性及降解速度可调节性。PLGA同时是美国食品药品管理局(FDA)批准的可用于注射的药用辅料。复乳法超声载药纳米粒相对壳聚糖、蛋白材料、脂质体材料等制备出的纳米粒稳定性较好，可显著延长纳米粒的使用时间并使给药持久体现血药浓度，同时降低系统中药物产生的毒性刺激性。该羟喜树碱PLGA纳米粒的体外释放图谱显示在体外释放液中，羟喜树碱PLGA纳米粒释放平稳，药物显效期可长达一个月，说明该纳米粒具备良好的释放特性。本文利用复乳法成功制备了羟喜树碱PLGA纳米粒，结果表明，纳米粒可以成为难溶性的喜树碱类抗肿瘤药物的极具潜力的给药系统。

1 Zhou YY，Du YZ，Wang，L，et al.Preparation and pharmacodynamics of stearic acid and poly(lactic-co-glycolic acid)grafted chitosan oligosaccharide micelles for 10-hydroxycamptothecin〔J〕.Int J Pharmacol，2010;393(1):143-51.

2 Chow DS，Gong L，Wolfe MD.Modified lactone/carboxylate salt equilibria in vivo by liposomal delivery of 92nitro-camptothecin〔J〕.Ann N Y Acad Sci，2000;922:164-74.

3 Han B，Wang HT，Liu HY，et al.Preparation of pingyangmycin PLGA microspheres and related in vitro/in vivo studies〔J〕.Int J Pharmacol，2010;398(1-2):130-6.