血管紧张素转移酶基因插入/缺失多态性与胃癌的相关性

史美龙 邵 红 鲁海宏 张景斌 (吉林省人民医院普外科，吉林 长春 300)

血管紧张素转移酶(ACE)是肾素-血管紧张素系统中的重要成员之一，其不仅在维持微循环稳态而且在肿瘤发生发展中发挥着重要作用〔1，2〕。ACE基因位于人类第17号染色体长臂2区3带(17q23)，ACE基因第16内含子存在一个287碱基的插入(I)、缺失(D)多态性，该多态性与血清ACE表达水平有关，即缺失型等位基因(D)ACE水平明显增高。以往大量研究调查了ACE基因I/D多态性与多种肿瘤的相关性〔3～7〕，然而，其与中国人群胃癌的相关性尚不清楚。为此，本研究采用PCR技术检测了中国人群胃癌患者的ACE基因I/D多态性，旨在探索其与胃癌的关系，为胃癌的发病机制提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象 根据临床症状和组织病理学结果临床确诊为胃癌的我院普外科患者181例，男109例，女72例;平均年龄(56.5±11.2)岁。其中高中分化117例，低分化64例;临床Ⅰ～Ⅱ期104例，临床Ⅲ～Ⅳ期77例;无转移107例，有转移74例。对照组198例选自体检健康人群，男129例，女69例，平均年龄(54.2±10.5)岁，无肿瘤家族史及胃肠道炎症性疾病，研究对象均为非血缘关系汉族个体。

1.2 DNA提取及引物合成 采集研究对象外周静脉血2 ml，采用北京百泰克公司全血基因组DNA提取试剂盒提取DNA。参照文献〔8〕设计引物。上游引物:5'-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3'，下游引物:5'-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3'。引物由上海英骏生物技术有限公司合成。

1.3 PCR法检测 PCR反应体系为10 μl，其中包括基因组DNA 0.8 μl，上、下游引物各 0.1 μl，TaqDNA 聚合酶 0.3 U，10 × 反应缓冲液 1.2 μl，Mg2+0.6 μl，dNTPs 1.2 μl，不足体积用无菌去离子水补充至10 μl。PCR反应循环参数均为:94℃预变性4 min;94℃变性30 s，64 ℃退火90 s，72℃延伸90 s，35个循环。以上反应均在Eppendorf热循环仪完成。扩增产物用6%聚丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色，分析判断结果。

1.4 统计学方法 基因型和等位基因频率采用直接计数法计算，胃癌组和对照组基因型及等位基因频率比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 两组ACE I/D多态性比较 两组间基因型和等位基因频率差异不显著(P＞0.05)(表1)。

表1 胃癌组与对照组ACE I/D多态性比较〔n(%)〕

表2 胃癌组临床特征与ACE I/D多态性比较〔n(%)〕

2.2 胃癌组临床特征与ACE I/D多态性比较 根据临床特征进行亚组分析，发现低分化胃癌患者中DD基因型频率明显高于高中分化者(P=0.002);有转移的胃癌患者中DD基因型频率明显高于未转移者(P=0.012)(表2)。

3 讨论

胃癌由多种因素共同作用而致，流行病学研究表明，遗传因素在其发病中发挥着重要作用。然而，胃癌发病机制迄今尚未完全阐明，对其易感基因的研究是近年来胃癌分子机制研究的重点和热点。多种肿瘤ACE表达水平均升高，参与血管生成、肿瘤细胞生长、迁移和转移〔2〕。使用ACE抑制剂能够减缓肿瘤生长和血管生成。由此认为，ACE抑制剂有望成为新的抗肿瘤药物，用于肿瘤防治。

关于ACE基因I/D多态性与胃癌的关系，目前文献报道结果尚不一致。Ebert等〔6〕报道在德国人群中，该位点DD基因型在胃癌病人中的分布明显高于对照组(P=0.003 4)。ACE基因型与淋巴结转移数量和肿瘤分级有关，II基因型胃癌患者，其淋巴结转移数量更少(P＜0.001)，并且其肿瘤分级更低(P=0.01)〔5〕。相反，在日本人群中，未发现ACE基因I/D多态性与胃癌存在明显相关性〔3〕。然而，携带I/D杂合子基因型的幽门螺旋杆菌阳性的胃萎缩患者胃癌的发生风险明显增高〔7〕。本研究与日本人群的研究结果类似，未发现在中国人群中ACE基因I/D多态性与胃癌存在明显相关性。引起这种差异的原因可能是:①人群不同，不同的遗传背景造成不同个体对胃癌的易感性不同;②环境因素的影响。

为明确ACE基因I/D多态性与胃癌临床病理特征的关系，本研究进一步分析了其与胃癌的分化程度、临床分期和淋巴结转移的关系，本结果提示携带DD基因型的胃癌患者恶性程度更高，并且更容易发生肿瘤转移。

本研究结果表明，尽管ACE基因I/D多态性与中国人群胃癌的发病风险无关，但是其与胃癌的分化程度和转移状态等影响胃癌预后的临床病理特征密切相关。然而，本研究样本量有限，因此，有必要进行大样本、多民族的病例-对照研究以证实ACE在胃癌发病中的作用。

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