养胃舒片的薄层色谱鉴别与含量测定

2011-07-28李正杰李晓燕许红辉赵韶华韩桂茹张彦芬

中国药业 2011年17期

李正杰，李晓燕，许红辉，赵韶华，韩桂茹，张彦芬

(1.河北以岭医药研究院，河北石家庄 050035;2.河北省药品检验所，河北石家庄 050011)

养胃舒片由党参、陈皮、黄精(蒸)、山药、干姜等药味组方。为有效控制产品质量，对方中党参、陈皮、山药、白术、干姜和乌梅进行了薄层色谱鉴别，笔者采用高效液相色谱法法对陈皮中橙皮苷进行定量研究，建立了养胃舒片的质量控制方法。现报道如下。

1 仪器与试药

美国安捷伦高效液相色谱仪;紫外检测器;梅特勒－托利多电子天平。养胃舒片(石家庄以岭药业股份有限公司，批号为080801);橙皮苷对照品(批号为110721－200211)，党参对照药材(批号为 121057－200504)，乌梅对照药材(批号为 121208－0101)，陈皮对照药材(批号为120969－200507)，白术对照药材(批号为120925－200407)，山药对照药材(批号为121137－200402)，干姜对照药材(批号为120942－200505)，均购自中国药品生物制品检定所;甲醇(色谱纯)，水为双重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

陈皮与乌梅:取养胃舒片，研细，称取3 g，加甲醇20 mL，超声处理10 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取陈皮对照药材1 g、乌梅对照药材2 g，同法制成对照药材溶液。吸取乌梅对照药材溶液5 μL、陈皮对照药材溶液和供试品溶液各10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷－醋酸乙酯－乙醇－浓氨溶液(7:4:1:0.5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与乌梅对照药材溶液色谱相应位置上至少显1个相同颜色的荧光斑点，在与陈皮对照药材溶液色谱相应位置上至少显3个相同颜色的荧光主斑点(图1)。

图1 乌梅、陈皮薄层色谱图

白术与党参:取白术对照药材0.5 g，加甲醇5 mL，超声处理6 min，取上清液作为白术对照药材溶液。再取党参对照药材1 g，加65%的乙醇30 mL和盐酸3 mL，加热回流30 min，滤过，滤液用氯仿25 mL萃取，氯仿液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为党参对照药材溶液。吸取对照药材溶液和陈皮与乌梅鉴别项下的供试品溶液各6 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以环己烷－醋酸乙酯(7∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，100℃烘烤至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与党参对照药材溶液色谱相应位置上至少显1个相同颜色的斑点;置紫外光灯(365 nm)下检视，在与白术对照药材溶液色谱相应位置上显1～2个相同颜色的荧光斑点(图2)[1]。

图2 白术、党参薄层色谱图

山药:取本品，研细，称取2 g，加甲醇25 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用乙醚提取2次，每次20 mL，合并乙醚层，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取不含山药的阴性样品，同法制成阴性对照品溶液。另取山药对照药材1 g，加甲醇超声30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，制成对照药材溶液。吸取对照药材溶液、供试品与阴性对照品溶液各10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯－甲醇－水－丙酮(8∶3∶1.5∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置105℃烘至斑点显色清晰，日光下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上分别显相同颜色的主斑点(图3 A)。

干姜:取山药鉴别项下的供试品溶液作为供试品溶液，另取干姜对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。吸取对照药材溶液、供试品与阴性对照品溶液各10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯－醋酸乙酯(8∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛10%硫酸乙醇溶液，置105℃烘至斑点显色清晰，日光下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上分别显相同颜色的主斑点(图3 B)。

图3 山药、干姜薄层色谱图

2.2 橙皮苷含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱(150 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－7%醋酸水溶液(32∶68);流速:1.0 mL/min;检测波长:283 nm;柱温:25 ℃;进样量:5 μL。

2.2.2 溶液制备

精密称取橙皮苷对照品12.50 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液;精密吸取对照品贮备液5 mL置25 mL量瓶中，流动相稀释至刻度，即得每1 mL含50 μg的对照品溶液。取片重差异项下的本品，除去薄膜衣，研细，精密称取0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25 mL，密塞，称重，超声处理40 min，放冷，称重，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液10 mL，置25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得供试品溶液。称取处方量除陈皮外的方中药材，按制备工艺制得空白样品，再按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

阴性干扰试验:吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照品溶液，按上述色谱条件测定。结果供试品溶液与对照品溶液在相同时间处有相同的色谱峰出现，阴性对照品溶液无干扰，见图4。

标准曲线制备:分别精密吸取对照品贮备液，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制备成质量浓度为 9.8，29.4，49，73.5，147 μg/mL的对照品溶液，精密吸取5 μL注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标(Y)、橙皮苷进样量(ng)为横坐标(X)绘制标准曲线，得回归方程 Y=1.8811 X+19.657(r=0.9997)。结果表明，橙皮苷进样量在49～735 ng范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

精密度试验:精密吸取对照品溶液及供试品溶液连续进样5次，测定峰面积。结果对照品溶液的 RSD=0.19%(n=5)，供试品溶液的 RSD=0.56%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:精密吸取对照品溶液及供试品溶液，每隔一定时间进样，测定峰面积结果对照品溶液的 RSD=0.47%，供试品溶液RSD=0.78%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。