高效液相色谱－蒸发光散射检测器法测定仙芪眩宁颗粒中黄芪甲苷含量

庞兴寿，牟晓

(广西壮族自治区玉林食品药品检验所，广西 玉林 537000)

仙芪眩宁颗粒是由仙鹤草、黄芪、白术、泽泻、生姜5味药材制成的中药复方制剂，具有健脾燥湿、升清降浊、利水除痰的功效，用于痰湿中阻型美尼尔氏病的辅助治疗。现行质量标准采用薄层扫描法测定其中主要有效成分黄芪甲苷的含量。为了更准确、有效地控制该制剂的内在质量，确保用药的安全有效，笔者采用高效液相色谱－蒸发光散射检测器法对君药黄芪中的黄芪甲苷进行含量测定，报道如下。

1 仪器与试药

美国Agillnet 1200型高效液相色谱仪(四元泵，脱气装置，自动进样器)，Alltech ELSD 3300。黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为0781－200311);仙芪眩宁颗粒(广西神通药业有限公司，批号为 090901，090902，090903，090801，090802);自制阴性对照样品1批;水为纯净水，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Phenomenex Gemini C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);柱温:30℃;流动相:甲醇 － 水(80∶20);流速:1.0 mL/min;漂移管温度:45 ℃ ;气体流速:3.0 L/min;温度:室温;进样量:10 μL。分离度大于1.5，理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。

2.2 溶液制备

精密称取黄芪甲苷对照品0.01276 g，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容，制成质量浓度为1.276 g/L的对照品溶液。取本品1袋，精密称定，研细，精密称取1 g，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流提取至无色，回收甲醇，残渣加水50 mL使溶解，用水饱和的正丁醇提取4次(每次40 mL)，合并正丁醇液，再用氨试液洗涤两次(每次40 mL)，弃去氨试液，合并正丁醇，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取缺黄芪的阴性对照样品1 g，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:取2.2项下3种溶液，按2.1项下色谱条件进样测定。结果见图1，可见阴性对照样品不干扰黄芪甲苷的测定。

线性关系考察:取质量浓度为1.276 g/L的对照品溶液，用自动进样器分别精密吸取 20，40，60，80，100 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定。以黄芪甲苷进样量(μg)的自然对数为纵坐标、峰面积值的自然对数为横坐标绘制标准曲线，得线性回归方程 Y=0.8946X－7.1462，r=0.9993(n=5)。结果表明，黄芪甲苷进样量在 25.52 ～127.6 μg范围内的对数与峰面积的对数线性关系良好。

精密度试验:取同一对照品溶液，依法连续进样5次。结果的 RSD为 0.76%(n=5)，表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一批样品(批号为090902)，依法制备供试品溶液并测定含量。结果样品中黄芪甲苷平均含量为0.0726 mg/g，RSD 为 0.48%(n=6)。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于配制后 0，2，4，6，8，24 h时依法测定含量。结果黄芪甲苷含量的 RSD为0.98%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品(批号为090902)共6份，每份约0.5 g。精密量取质量浓度为(1.276 g/L)的对照品贮备液 1.00 mL，加甲醇稀释至 10.00 mL，即得质量浓度为 127.6 μg/mL的对照品溶液。精密量取对照品溶液 1.20，1.50，1.80 mL(每个质量浓度各2份)，依次加入6份样品，按供试品溶液制备方法制备，进样测定，记录峰面积，计算回收率。结果见表1。

图1 高效液相色谱图

表1 黄芪甲苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

分别取5批样品，依法制备供试品溶液，注入液相色谱仪测定，以外标两点法计算。结果批号为 090802，090801，090901，090902，090903 的样品中，黄芪甲苷含量分别为 0.0591，0.0651，0.0828，0.0726，0.0689 mg/g。

3 讨论

[1－4]试验，结果以甲醇为溶剂，进行索氏加热回流提取、水饱和正丁醇萃取、氨试液洗涤的方法，提取比较完全;对流动相进行选择[5－7]时，分别比较乙腈－水(32∶68)、甲醇－水(70∶30)、甲醇－水(80∶20)等流动相，结果以乙腈－水(32∶68)和甲醇－水(80∶20)为流动相时，所测得黄芪甲苷峰形均良好，各项指标均达标，但由于乙腈毒性较甲醇强，故选用甲醇－水(80∶20)为流动相。由于本试验中蒸发光散射检测器的载气采用压缩机输出空气，因此对环境也有所要求。若实验室湿度过大，压缩出的空气含水量过高，会影响基线噪声[8－9]。采用高效液相色谱－蒸发光散射检测器法测定仙芪眩宁颗粒中黄芪甲苷的含量，方法学考察结果表明，方法灵敏度高、准确可靠，可用于仙芪眩宁颗粒的质量控制。

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