薄层色谱法检查姜红活血止痛酊中乌头碱限量

郭廷东，唐志立，曹 阳，雷果平

(1.四川省南充市中心医院，四川 南充 637000;2.四川省南充市食品药品检验所，四川 南充 637000)

姜红活血止痛酊为医院自制制剂，由姜黄、红花、生马钱子、生天南星、生半夏、生川乌、生草乌、雪上一枝蒿等11味药材制成，具有活血化瘀、消肿止痛、舒筋活络等功效，用于跌打损伤、风湿骨痛等。由于方中川乌、草乌、雪上一枝蒿中均含有剧毒的乌头碱类酯型生物碱[1]，为了更好地控制产品质量、保证用药安全有效，必须对制剂中乌头碱含量进行限量控制。笔者采用薄层色谱法对姜红活血止痛酊中乌头碱含量进行限量检查，现报道如下。

1 仪器与试药

层析缸，玻璃喷雾器，微量点样器，薄层制版器，电子天平。乌头碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110720－200410);姜红活血止痛酊(自制，批号为101213，101214，101215);姜红活血止痛酊阴性样品(自制，批号为101221);乙醚，氯仿，硅胶G，羧甲基纤维素钠，试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

精密吸取20 mL样品，于蒸发皿中低温(40℃以下)挥去乙醇，残渣加氨试液2 mL湿润，加乙醚60 mL，分3次提取，提取液低温蒸干(40℃以下)，残渣加氯仿溶解，定容至2 mL，作为供试品溶液。取乌头碱对照品，精密称定，加异丙醇－氯仿(1∶1)混合液制成1 g/L的溶液，作为对照品溶液。精取20 mL阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.2 显色剂制备

称取0.85 g碱式硝酸铋，加10 mL冰乙酸与40 mL水溶解，临用前取5 mL，加碘化钾溶液(取碘化钾4 g溶于10 mL水)5 mL，再加冰乙酸20 mL，加水稀释至100 mL，即得碘化铋钾溶液。

2.3 检查法

按薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2 μL、对照品溶液2 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以正己烷 －乙酸乙酯 －甲醇(6.4∶3.6∶1)为展开剂，在氨蒸气饱和20 min的层析缸内，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液显色。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱斑点相应位置上，斑点应小于对照品色谱的斑点，即可证明每1 mL本品含有的乌头碱低于100 μg。

2.4 方法学考察

重现性试验 :取 6批样品(批号为 081121，081122，081123，081124，081125，081126)，依法检查。结果薄层色谱斑点清晰，且供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱斑点相应位置上，斑点小于对照品色谱的斑点，表明方法重现性良好。

专属性试验:照薄层色谱法[3]试验，吸取供试品溶液、阴性对照品和对照品溶液各2 μL，按2.3项下方法操作，检视斑点大小及颜色。结果在阴性对照品溶液色谱中，与对照品溶液色谱斑点相同位置上不出现斑点，其他斑点则与供试品溶液色谱相同，说明阴性无干扰，方法专属性好。薄层色谱图见图1。

回收试验:取阴性样品20 mL，加入对照品溶液1 mL，照供试品溶液制备方法制备溶液，分别吸取该溶液 1，2，4，6，8，10 μL 以及对照品溶液2 μL，依法检查。溶液色谱中，在与对照品溶液色谱斑点相应位置上显相同颜色的斑点，且斑点颜色随点样量增加而加深。

图1 薄层色谱图

检出限确定:精密吸取阴性样品20 mL，加入对照品溶液0.1 mL，照供试品溶液制备方法制备溶液，分别吸取该溶液2，4，6，8 μL以及对照品溶液2 μL，依法检查。溶液色谱中，在与对照品溶液色谱斑点相应位置上，点样量在4 μL时即显清晰斑点，故检出限确定为 0.2 μg。

耐用性试验:采用自制和青岛海洋生物制品厂生产的硅胶G薄层板，在不同温度(5，10，20，30 ℃ )、湿度(相对湿度为 45% ，70%)条件下展开。可见，在温度5～30℃、相对湿度45% ～70%条件下展开，采用自制和厂家生产的硅胶G板得到的薄层色谱图斑点均清晰。

2.5 样品检查

依法对3批姜红活血止痛酊进行检查。结果3批样品溶液的薄层色谱中，在与对照品溶液色谱斑点相应位置上，所显斑点均小于对照品斑点，表明3批样品的乌头碱限量检查合格。

3 讨论

酊剂中的乌头碱在碱性条件下，经乙醚萃取，在硅胶G板上进行分离、显色，将样品与对照品比较，在相同斑点的 Rf值位置，可根据斑点大小和颜色深浅进行定量检查。根据2010年版《中国药典(一部)》及相关文献[2－3]，综合分析认为，乌头碱含量生川乌应低于0.17%，生草乌应低于0.50%，雪上一枝蒿应低于0.10%。本方中含有生川乌6 g，生草乌6 g，雪上一枝蒿6 g，制成1000 mL，乌头碱的理论限度应为100.2 μg/mL。样品检查结果表明，每1 mL本品中含有的乌头碱低于100 μg，低于理论限度，说明此方法可靠[4]。

[1]南京中医药大学.中药大辞典[M].第2版.上海:上海科学技术出版社，2006:301－305，2128－2131，2930－2931.

[2]高继武，蒋山好.离子对萃取光度法测定雪上一枝蒿总生物碱含量[J].中国民族民间医药杂志，2000，43(2):88－91.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:36，220.

[4]梁生旺.中药制剂分析[M].北京:中国中医药出版社，2003:315－316.