养肾补血颗粒薄层色谱定性鉴别研究

许 梅，郭 敏

(重庆市江北区中医院，重庆 400020)

养肾补血颗粒由人参、三七、制何首乌、淫羊藿、五味子、灵芝、女贞子、熟地黄[1]等10味中药组方，是我院使用多年的医院协定处方制剂，具有养肾补血、益气的功效，对元气亏损、精血不足所致的眩晕耳鸣、失眠健忘、性欲减退、腰膝痿软、神倦乏力等症具有较好的治疗作用。该制剂原无质量标准，为了确保产品质量，笔者采用薄层色谱法对制剂中的人参、三七、制何首乌、淫羊藿进行了定性鉴别研究，现报道如下。

1 仪器与试药

ZF－1型三用紫外分析仪(上海市顾村电光仪器厂);定量毛细管(美国Drummond公司);939薄层制板器(重庆南岸贝尔德仪器技术厂);ZFQ－85A型旋转蒸发器(上海医械专机厂);CQ－100型超声波清洗机(上海跃进医用光学器械厂);硅胶G(青岛海洋化工有限公司)。羧甲基纤维素纳(上海化学试剂采购站);人参皂苷Rg1对照品(批号为0703－200016)，人参皂苷 Rb1对照品(批号为0704－200013)，三七皂苷 R1对照品(批号为110745－200312)，淫羊藿苷对照品(批号为0703－200111)，何首乌对照药材(批号为0934－9704)，均由中国药品生物制品检定所提供;养肾补血颗粒(本院制剂室生产);其他化学试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 人参[2]、三七[3]薄层色谱鉴别

取本品内容物10 g，研细，加三氯甲烷50 mL，置水浴上加热回流30 min，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加甲醇50 mL，置水浴上加热回流2 h，滤过，滤液置水溶上蒸干，残渣加水10 mL使溶解，用水饱合的正丁醇振摇提取3次(20，20，10 mL)，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次50 mL，分取正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，取上清液作为供试品溶液。取不含人参、三七的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1 mL各含2 mg的混合溶液，作为对照品溶液。照2005年版《中国药典(一部)》附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和阴性对照品溶液各10 μL、对照品溶液5 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－水(15∶40∶25∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同的3个紫红色斑点，阴性对照品溶液色谱中则无此斑点(图1 A)。

2.2 淫羊藿[4]薄层色谱鉴别

取本品内容物10 g，研细，加乙醇40 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。取不含淫羊藿的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照2005年版《中国药典(一部)》附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和阴性对照品溶液各10 μL、对照药品溶液2 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯－丁酮－甲酸－水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，在105℃加热约2～5 min，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品溶液色谱中则无此斑点(图 1 B)。

2.3 制何首乌[5]薄层色谱鉴别

取本品内容物8 g，研细，加甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加稀盐酸10 mL使溶解，置水浴上加热30 min，放冷，用乙醚振摇提取3次，每次15 mL，合并乙醚液，挥干，残渣加乙醚1 mL使溶解，作为供试品溶液。取不含制何首乌的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。取何首乌对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照2005年版《中华人民共和国药典(一部)》附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和阴性对照品溶液各10 μL、对照药材溶液5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。在105℃加热约5 min，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品溶液色谱中则无此斑点(图1 C)。

图1 薄层色谱图

3 讨论

本品组方较复杂，干扰因素较多。笔者经反复试验，选用多种展开系统和纯化方法，以及样品的不同取样量，摸索出处方中人参、三七、制何首乌、淫羊藿4味药材的薄层色谱定性鉴别方法。方法分离度高、重现性好、专属性强，可有效控制养肾补血颗粒的质量。

笔者对方中五味子、女贞子和灵芝药材成分也进行了薄层色谱定性鉴别研究。五味子[6]中主要成分为五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲，样品经提取分离、薄层展开后，层析斑点不清晰、颜色较浅。女贞子[7]中主要成分为齐墩果酸，样品经提取分离后，点于硅胶G薄层板上，斑点颜色较浅，且拖尾现象较严重。灵芝[8]主要成分为多糖类，以灵芝药材作为对照，经点样展开后，在365 nm紫外光灯下观察，阴性对照品溶液色谱中含有相同的荧光斑点，因此没有将上述方法列入质量标准中。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:7，10，31，44，123，229，83，130.

[2]王隶书，程东岩，朱 杰.薄层扫描法测定仙灵双保胶囊中人参皂苷Rg1及人参皂苷 Rb1之和的含量[J].中国药师，2003，6(3):155－156.

[3]潘翠华.用TLC法对愈伤灵胶囊中三七进行鉴别[J].中国医学杂志，2007，5(3):123－124.

[4]阮桂平.仙珍骨宝胶囊中淫羊藿苷薄层色谱鉴别方法的筛选[J].时珍国医国药，2006，17(6):557.

[5]陈志娟，高 静，赵 杨，等.降脂冲剂中何首乌与决明子的薄层鉴别[J]. 天津中医药，2008，25(2):159 －160.

[6]于忠兴，范正达，唐风雷.反相高效液相色谱法测定金虎胶囊中五味子甲素的含量[J].传染病药学，2002，12(2):10－11.

[7]罗朵生，郭 姣，何 伟，等.高效液相色谱法与薄层扫描法测定女贞子中齐墩果酸含量的比较[J].时珍国医国药，2008，19(6):15－16.

[8]尹松鹤，赵玉梅，刘权友.灵芝颗粒的薄层色谱鉴别[J].中华实用医药杂志，2006，6(2):13.