子宫内膜异位症不孕患者血管内皮生长因子的检测及其临床意义

陈霞，赵军招，周玮，王佩玉

（温州医学院附属第一医院 生殖医学中心，浙江 温州 325000）

子宫内膜异位症（endometriosis，EMs）是生育期妇女的常见病，在不孕症妇女中的患病率为0.5%～5.0%[1]。目前认为异位子宫内膜具有类似于恶性肿瘤转移、种植、侵袭等生物学特性，而此过程均依赖于新生血管的形成。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）作为一种主要的血管生成因子以其促进血管内皮细胞增殖、迁移，增加微血管通透性，促进血管形成的生物学特性参与了子宫内膜生理及病理血管生长。本研究测定了子宫内膜异位症不孕患者行体外受精（in vitro fertilization，IVF）过程中不同时期血清及卵泡液中VEGF水平，以探讨VEGF在由EMs引起的不孕症中的发病机制。

1 资料和方法

1.1 研究对象 收集2008年1月-2010年1月期间在温州医学院附属第一医院生殖医学中心进行体外受精-胚胎移植/卵泡浆内单精子显微注射（IVF/ICSI）治疗的EMs患者14例作为研究对象（EMs组）。纳入标准：患者年龄≤40岁；卵泡刺激素（FSH）≤12 IU/L；具有正常的月经周期；经腹腔镜或剖宫手术或行经阴道超声引导下卵巢巧克力囊肿穿刺抽吸术，根据美国生殖协会（AFS）修正标准分期确诊为子宫内膜异位症III、IV期。在此项研究前12个月，接受过GnRH-a或其他治疗内异症药物者，不纳入本研究。随机选择同期接受IVF治疗的非子宫内膜异位症不孕患者15例作为对照组。EMs组患者平均年龄（30.24±2.53）岁，对照组平均年龄（30.65±3.85）岁；EMs组患者不孕年限（4.03±1.60）年，对照组患者不孕年限（3.35±1.61）年，两组患者年龄、不孕年限差异均无统计学意义。

1.2 标本收集 所有IVF患者于注射hCG日及取卵日抽取外周静脉血3～5 mL并留取2～3个直径大于16 mm、无明显血染的卵泡液。所有标本在室温静置2 h后，以3500 r/min离心10 min，取上清液，小管分装后于-70 ℃的冰箱保存待测。

1.3 血清及卵泡液中VEGF水平的测定 人VEGF酶联免疫试剂盒购自深圳依诺金生物科技有限公司，采用双抗体夹心酶联免疫吸附（ELISA）法，由专人严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.4 统计学处理方法 应用SPSS 15.0统计软件包进行统计，采用t检验。

2 结果

两组患者血清及卵泡液VEGF水平的比较见表1。注射hCG日血清VEGF水平EMs组高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。取卵日卵泡液中VEGF水平EMs组高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。两组注射hCG日至取卵日VEGF水平有增高趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05）。两组卵泡液中VEGF水平明显高于血清VEGF水平，差异有统计学意义（P<0.05）。

表1 EMs组与对照组患者血清及卵泡液VEGF水平的比较（±s，pg/mL）

表1 EMs组与对照组患者血清及卵泡液VEGF水平的比较（±s，pg/mL）

注：F-VEGF代表卵泡液，VEGF1代表注射hCG日血清VEGF浓度，VEGF2代表取卵日血清VEGF浓度。与VRGF2组比：*P<0.05

测定指标t P 2.201-2.635-2.099 VEGF1 VEGF2 F-VEGF EMS组（n＝14）69.36±27.71 102.87±54.26 680.69±291.31*对照组（n=15）50.02±19.11 63.49±19.58 469.79±249.39*0.036 0.014 0.045

3 讨论

EMs的发病机制至今仍未完全阐明。Sampson的子宫内膜种植学说虽已被较多接受，但经血逆流在育龄妇女中非常普遍，其中仅有10%左右发展为EMs，因此经血逆流可能只是发病的基础。近来的研究表明，患者的内膜具有转移、种植、生长等类似恶性肿瘤细胞生物学行为的能力可能才是发病的关键。脱落的子宫内膜黏附并种植在腹腔或组织器官上依赖于足够血液供应的建立和维持，种植灶子宫内膜的快速生长需要大量的新生血管。迄今为止，较为肯定的促血管发生因子中，VEGF被认为是诱导血管生成的最重要、最关键的因子，在血管形成中起中心调节作用。

VEGF是一种结合肝素的二聚体糖蛋白，分子量约为34～46 KDa。它以旁分泌的方式作用于血管内皮细胞，通过和血管内皮细胞的特异性受体结合，具有强大的促内皮增殖、促血管形成作用。VEGF对于内异症内膜细胞的转移和种植十分重要，它在组织中的表达反应了该组织的血管生成活性。EMs的发生有赖于血管的形成[2]。对VEGF的研究是从腹腔液开始的，McLaren等[3]报道EMs患者腹腔液中VEGF浓度较对照组明显升高，并呈周期性变化，且增生期明显高于分泌期。金海燕等[4]通过对VEGF在EMs患者中的检测，发现在分泌期，EMs在位子宫内膜腺上皮细胞中VEGF的表达强度明显高于正常子宫内膜。国内外研究者都认为，内异症患者的腹腔液和血清VEGF水平是升高的，并且血清VEGF水平能反映病变的程度[5-7]。本研究中EMs组血清VEGF水平高于对照组，与其他学者研究相一致；另外证实了IVF取卵患者卵泡液中VEGF水平亦高于非内异症患者，差异有统计学意义。

女性生殖系统中，VEGF受到体内多种激素的调节，呈现周期性、时相性变化，并参与卵泡的生长发育过程。Yamamoto等[8]利用免疫组化定位证实人类卵巢中原始卵泡、初级卵泡没有VEGF的表达，卵母细胞进入第二次减数分裂时期，VEGF开始有弱表达，随卵子成熟表达增强（定位于颗粒细胞及卵泡膜细胞）。从排卵到黄体形成直至植入表达最强，定位于黄体细胞，当黄体萎缩期VEGF表达渐弱。本研究IVF过程中注射hCG日，取卵日血清VEGF水平呈升高趋势，虽然差异无统计学意义，但仍能证实随着卵子成熟表达增强，VEGF水平也随之升高。

邢福祺等[9]采用免疫组织化学方法对正常人卵巢标本的VEGF表达进行检测，发现卵巢VEGF的表达定位于颗粒细胞胞浆及胞膜，卵泡膜细胞也有少量分泌，卵泡液呈阳性表达，原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡中VEGF表达依次增强，与卵母细胞成熟同步。本研究结果中，EMs组取卵日卵泡液VEGF水平明显高于取卵日血清VEGF水平，而对照组亦是如此，表明卵泡液中VEGF水平明显高于血清VEGF水平，也证实了卵巢（主要是卵泡内黄素化颗粒细胞）可能是卵泡和血清VEGF的主要来源。

另外，闻姬等[10]为探讨卵泡液VEGF与妊娠结局的相关性，检测了50例接受IVF治疗的不育妇女的卵泡液VEGF水平，发现卵泡液VEGF水平越高卵细胞越成熟，但过高会导致卵细胞退化，因此卵泡液VEGF水平过低或过高均会导致卵母细胞质量、受精率、卵裂率及优质胚胎比例下降，导致临床妊娠率降低。本研究中EMs组卵泡液VEGF水平明显高于对照组，卵泡液VEGF过高水平可能是卵母细胞退化的标志，是卵母细胞内低氧、低糖的表现。同时发现低氧会导致卵母细胞质量显著降低。卵泡内低氧一方面使卵母细胞质量下降，另一方面使VEGF反应性升高。因此EMs患者卵母细胞质量及妊娠率降低是否与VEGF显著升高有一定相关，还有待于进一步研究。

[1]Buyalos RP, Agarwal SK. Endometriosis-associated infertility[J]. Curr Opin Obstet Gynecol,2000,12(5):377-381.

[2]Cho SH, Oh YJ, Nam A, et al. Evaluation of serum and urinary angiogenic factors in patients with endometriosis[J]. AM J Reprod Immunol,2007,58(6):497-504.

[3]McLaren J. Vascular endothelial growth factor and endometriotic angiogenesis[J]. Hum Reprod Update. 2000,6(1):45-55.

[4]金海燕, 王自能, 卢凤昕, 等. 血管内皮生长因子在子宫内膜异位症发病中的作用[J].基础医学与临床,2005,25(3):257-260.

[5]Kalu E, Sumar N, Giannopoulos T, et al. Cytokine profiles in serum and peritoneal fluid from infertile women with and without endometriosis[J]. J Obstet Gynaecol Res,2007,33(4):490-495.

[6]Garcia-Manero M, Alcazar JL, Toledo G. Vascular endothelial growth factor (VEGF) and ovarian endometriosis: correlation betwen VEGF serum levels, VEGF cellular expression,and pelvic pain[J]. Fertil Steril,2007,88(2):513-515.

[7]王晓黎, 刘青. 子宫内膜异位症患者血清与腹腔液中血管内皮因子VEGF含量测定的临床研究[J].卫生职业教育, 2008,26(11): 138-139.

[8]Yamamoto S, Konishi I, Tsuruta Y, et al. Expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) during folliculogenesis and corpus luteum formation in the human ovary[J]. Gynecol Endocrinol,1997,11(6):371-381.

[9]邢福祺,梁卫华,陈士岭. 血管内皮生长因子在人卵巢和子宫内膜上的表达[J].第一军医大学学报,2000,20(5):453-455.

[10]闻姬, 孙伟, 宁玻, 等. 不育妇女卵泡液血管内皮生长因子水平与妊娠结局相关性[J].生殖医学杂志, 2003, 12(6):348-351.