Graves病相关眼病患者血清白介素（IL）-16的测定

顾雪疆，林秀丽，张海凌，葛胜洁，陈咨苗，朱虹，沈飞霞

（温州医学院附属第一医院 内分泌科，浙江 温州 325000）

白细胞介素-16（IL-16）是一种具有化学趋化活性的细胞因子，通过和细胞表面CD4分子结合，能引起CD4+的细胞，如T细胞、嗜酸性粒细胞等增殖及向炎症部位迁移聚集[1]。有研究报道称眼部组织受到来源于Graves病患者的IgG刺激时，IL-16的RNA及蛋白水平升高[2-3]。我们先前的研究发现IL-16基因的单核苷酸多态性和Graves病相关眼病（Graves’opthalmopathy，GO）的发病易感性相关[4]。但有关GO患者血清IL-16水平鲜有报道。本研究旨在探讨GO患者的血清IL-16水平及其和疾病的活动性关系。

1 对象和方法

1.1 研究对象 根据美国甲状腺协会制定的 NOSPECS分级标准及1989年Mourits等[5]提出的临床活动度评分（clinical activity score，CAS）标准确定眼病的严重程度及病变活动度， 中重度眼病及CAS大于4者入组（CAS计算积分包括球后疼痛、压迫感、上下侧向转动痛、眼睑红肿、球结膜弥散充血、结膜水肿、泪阜肿胀、眼睑水肿、最近1～3个月眼球突出度增加2 mm或以上、最近1～3个月视力下降及眼球运动度降低5度以上，每项1分）；患者CAS评分均由眼科医生专科检查协助确定。6个月内眼病没有变化定义为非活动性眼病。从我院内分泌门诊与住院收治患者中筛查出活动性GO患者（未治疗）70例（活动性GO组），其中男30例，女40例，年龄（49±11.3）岁；非活动性GO患者47例（非活动性GO组），其中男20例，女27例，年龄（45±10.34）岁，均经过激素和（或）免疫制剂治疗。所有眼病患者在入选时甲状腺功能均为正常。正常对照组为70例健康志愿者，其中男29例，女41例，年龄（47±8.9）岁。所有入组者均排除其他自身免疫性疾病和严重心、肝、肾疾病。

1.2 方法

1.2.1 病史询问及体格检查：研究方案经院伦理委员会批准，受试者签署书面的知情同意书。按照统一制定的表格对研究对象进行病史询问及体格检查。1.2.2 生化指标的测定：对研究对象进行甲状腺功能[uTSH、FT3、FT4和（或）TT3、TT4]、TRAb、TgAb和TPOAb测定，均用化学发光法测定。

1.2.3 血清标本保存在-80 ℃，利用酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒（Quantine，R&D Systems，Minneapolis，MN， USA）检测血清IL-16水平。

1.3 统计学处理方法 运用SPSS10.0统计学软件对数据进行处理，计量资料用±s表示，两组间比较采用t检验，计数资料采用x2检验。

2 结果

2.1 活动性GO组、非活动性GO组和正常对照组CAS评分和血清IL-16、FT3、FT4、TSH检测结果 活动性GO组患者血清IL-16水平显著高于非活动性GO组患者和正常对照组，差异具有统计学意义（P<0.05），见表1。相关分析显示IL-16与FT3、FT4水平无相关（r=0.064，P>0.05），与sTSH水平无相关性（r=0.071，P>0.05）。

表1 各组CAS评分、一般资料和血清IL-16检测结果比较

2.2 活动性GO组CAS评分与IL-16相关性 GO患者随着CAS评分的升高，血清IL-16水平呈现出升高趋势，但差异无统计学意义（P>0.05），见表2。

表2 活动性GO组CAS评分与IL-16相关分析

3 讨论

本研究中，我们发现活动性GO组患者血清IL-16水平显著高于非活动性GO组患者和正常对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。进一步分析显示CAS评分越高GO患者的IL-16水平也越高，但可能由于病例数的原因，差异无统计学意义（P>0.05）。

IL-16是一种CD4分子的配体，对表达CD4分子的细胞，如T细胞、嗜酸性粒细胞等，具有趋化活性；参与T细胞和树突状细胞的相互作用，促进并调节上述细胞合成释放各种炎症因子[6-9]。体外研究显示，IL-16能够促进外周血单核细胞IFN-γ的产生，并抑制IL-4、IL-5和IL-13的合成[9-10]。IFN-γ是一种TH1细胞因子，而IL-4、IL-5和IL-13则是一种TH2细胞因子。体内研究也显示给小鼠加用IL-16会抑制TH2细胞因子的水平[11]。进一步研究发现，IL-16具有引起TH1细胞迁移的作用[12]。上述研究提示，IL-16对炎症过程中TH1细胞的聚集和活化具有重要的作用，而对TH2免疫反应表现为抑制作用。

众所周知，GO是一种以TH1免疫反应为主导的自身免疫性疾病[13-16]。Wakelkamp等[16]报道GO在活动期以TH1细胞因子表达增高为特征，TH2细胞因子则未显示出和活动期GO相关。Aniszewski等[14]的研究发现，活动期GO患者眼部组织淋巴细胞浸润以TH1为主，而病程长的GO患者则以TH2细胞浸润为主。这些研究提示GO在疾病活动期以TH1免疫反应为主，在非活动期则以TH2免疫反应为主。研究者们推测这一现象可能是TH2细胞因子对TH1免疫反应的负反馈调控有关。本研究中，活动期GO患者的IL-16水平高于非活动期GO患者及正常对照者，非活动期GO患者IL-16水平和正常对照者相近，提示IL-16水平只是在活动期一过性升高，随病情稳定出现下降趋势。鉴于IL-16对TH1免疫反应具有重要作用，我们认为活动性GO患者IL-16水平升高和以往的研究结果是一致的。IL-16参与GO发病的机制还不是非常清楚，我们推测IL-16在引起/促进TH1细胞向眼部组织聚集，并刺激TH1细胞因子释放的病理过程中起着重要作用。

本研究中所有的患者均有Graves病史，但是基于以下的原因我们认为升高的IL-16水平和甲状腺高功能状态无关，且甲状腺疾病本身并不是引起IL-16升高的唯一原因。首先，所有的GO患者入组时，甲状腺功能均是正常的；其次，本研究中并没有发现IL-16和甲状腺激素水平的相关性；第三，和先前研究相似的是本研究也没有发现IL-16和自身抗体如TPOAb/TRAb水平的相关性[17-18]。因此，升高的IL-16水平至少部分反映眼部炎症的存在。

总之，本研究显示活动性GO组患者血清IL-16水平显著高于非活动性GO组患者及正常对照组，该因子可以作为一个提示GO活动性的标志，及临床用于评价GO治疗效果的指标。

[1]Bacon K, Baggiolini M, Broxmeyer H, et al. IUIS/WHO Subcommittee on Chemokine Nomenclature. Chemokine/chemokine receptor nomenclature[J]. J Interferon Cytokine Res,2002,22(10):1067-1068.

[2]Pritchard J, Horst N, Cruikshank W, et al. Igs from patients with Graves’ disease induce the expression of T cell chemoattractants in their fibroblasts[J]. J Immunol, 2002,168(2):942-950.

[3]Pritchard J, Han R, Horst N, et al. Immunoglobulin activation of T cell chemoattractant expression in fibroblasts from patients with Graves' disease is mediated through the insulin-like growth factor I receptor pathway[J]. J Immunol,2003,170(12):6348-6354.

[4]Gu XJ, Cui B, Zhao ZF, et al. Association of the interleukin(IL)-16 gene polymorphisms with Graves’ disease[J]. Clin Immunol,2008,127(3):298-302.

[5]Mourits MP, Koornneef L, Wiersinga WM,et al. Clinical criteria for the assessment of disease activity in Graves’ophthalmopathy:a novel approach[J]. Br J Ophthalmol,1989,73(8):639-644.

[6]Rand TH, Cruikshank WW, Center DM, et al. CD4-mediated stimulation of human eosinophils:lymphocyte chemoattractant factor and other CD4-binding ligands elicit eosinophil migration[J]. J Exp Med,1991,173(6):1521-1528.

[7]Kaser A, Dunzendorfer S, Offner FA, et al. A role for IL-16 in the cross-talk between dendritic cells and T cells[J]. J Immunol,1999,163(6):3232-3238.

[8]Cruikshank WW, Lim K, Theodore AC, et al. IL-16 inhibi

tion of CD3-dependent lymphocyte activation and proliferation[J]. J Immunol,1996,157(12):5240-5248.

[9]Pinsonneault S, El Bassam S, Mazer B, et al. IL-16 inhibits IL-5 production by antigen-stimulated T cells in atopic subjects[J]. J Allergy Clin Immunol,2001,107(3):477-482.

[10]ElBassam S, Pinsonneault S, Kornfeld H, et al. Interleukin-16 inhibits interleukin-13 production by allergen-stimulated blood mononuclear cells[J]. Immunology,2006,117(1):89-96.

[11]de Bie JJ, Henricks PA, Cruikshank WW, et al. Effect of interleukin-16-blocking peptide on parameters of allergic asthma in a murine model[J]. Eur J Pharmacol,1999,383(2):189-196.

[12]Lynch EA, Heijens CA, Horst NF, et al. Cutting edge:IL-16/CD4 preferentially induces Th1 cell migration: requirement of CCR5[J]. J Immunol,2003,171(10):4965-4968.

[13]de Carli M, D’Elios MM, Mariotti S, et al. Cytolytic T cells with Th1-like cytokine profile predominate in retroorbital lymphocytic infiltrates of Graves’ophthalmopathy[J]. J Clin Endocrinol Metab,1993,77(5):1120-1124.

[14]Aniszewski JP, Valyasevi RW, Bahn RS. Relationship between disease duration and predominant orbital T cell subset in Graves’ ophthalmopathy[J]. J Clin Endocrinol Metab,2000,85(2):776-780.

[15]周素娴, 夏宁,梁瑜祯,等.Graves眼病患者T细胞亚群的研究[J].中华内分泌代谢杂志,2006,2(2):126-127.

[16]Wakelkamp IM, Bakker O, Baldeschi L, et al. TSH-R expression and cytokine profile in orbital tissue of active vs.inactive Graves’ ophthalmopathy patients[J].Clin Endocrinol (Oxf),2003,58(3):280-287.

[17]Diez JJ, Hernanz A, Medina S,et al. Serum concentrations of tumour necrosis factor-alpha (TNF-alpha) and soluble TNF-alpha receptor p55 in patients with hypothyroidism and hyperthyroidism before and after normalization of thyroid function[J]. Clin Endocrinol (Oxf),2002,57(4):515-521.

[18]Salvi M, Pedrazzoni M, Girasole G, et al. Serum concentrations of proinflammatory cytokines in Graves’ disease:effect of treatment, thyroid function, ophthalmopathy and cigarette smoking [J]. Eur J Endocrinol,2000,143(2):197-202.