不同来源白英乙醇提取物抗肿瘤活性比较

宋 敏，王翔林，孙立新

白英系茄科植物白英(Solanum lyratum Thunb.)的干燥全草，性味苦、辛、微寒，归肝、胆经，多产于江苏、浙江、江西，有清热解毒、祛风化痰、利湿退黄、抗癌的功能。前期研究结果表明［1-2］，白英乙醇提取物对 Hela、SGC-7901、Bel-7402等多种肿瘤细胞有增殖抑制作用，并对提取工艺进行了优化［3］。有关不同来源白英药材抗肿瘤活性比较尚未见报道。本实验在前期工作的基础上，用优化提取工艺对不同来源白英药材进行提取，并对其乙醇提取物进行抗肿瘤活性比较，为白英药材的应用提供一定依据。

1 实验仪器和材料

1.1 仪器与试剂 MCO-18AIC型二氧化碳培养箱(日本三洋);BCN-1360B型生物洁净工作台(北京东联哈尔仪器制造有限公司);SPECTRA MAX plus型酶标仪(Molecular Devices公司);RPMI1640(GIBCO invitregen corporation Lot.No.1285082);胎牛血清(天津TBD公司Lot.No.0701-3100);二甲基亚砜(天津市博迪化工有限公司);MTT［溴化-3-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-2，5-二苯基四氮唑］(美国Sigma)。

1.2 药材 24个来源白英饮片由沈阳药科大学孙启时教授鉴定，见表1。

表1 白英饮片来源

1.3 细胞株 人宫颈癌Hela细胞为贴壁细胞，由本实验室传代保种。

2 方法

2.1 白英药材的提取及试药的配制 分别称取24个来源白英药材各50 g，用75%乙醇按药材溶剂比1∶8浸泡过夜，次日回流提取3次，每次1 h，过滤除去药渣，旋转蒸发得乙醇浸膏。

加药前用PBS将浸膏配成相当于原药材1.2 g/mL药液后，再用RPMI-1640培养液稀释为所需浓度:48、24、12、6 mg/mL(即终浓度相当于原药材的量:24、12、6、3 mg/mL)。

2.2 Hela细胞系培养 以RPMI-1640培养基作为基础，配制成内含10%FBS、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素的细胞培养液。在浓度为5%CO2的37℃培养箱中传代培养。待细胞生长达到对数生长期即可用于实验。

2.3 体外增殖抑制实验 取对数生长期Hela细胞，以4×104cells/mL密度接种于96孔培养板中，每孔100 μL。在浓度为5%CO2的37℃培养箱中培养24 h后加药，给药组设 24、12、6、3 mg/mL 4个剂量(广西柳州产地给药剂量为6、3、1.5、0.75 mg/mL)，阳性对照药 5-Fu 设 50、10、2、0.4 μg/mL 4个剂量，同时设空白组及阴性对照组，每组3复孔，每孔加药100 μL。于37℃、5%CO2、饱湿条件下培养48 h，除去培养液及药液，每孔加5 g/L MTT 10 μL 和培养液 100 μL，继续培养4 h，除去培养液及MTT，每孔加DMSO 150 μL，微型振荡器振荡10 min，用酶标仪在λ492nm下测OD值，计算抑制率、IC50值。

生长抑制率%=〔(对照组平均OD值-用药组平均OD值)/(对照组平均OD值-空白组平均OD值)〕×100%

3 结果

不同来源白英乙醇提取物出膏率及其对Hela细胞增殖抑制作用结果见表2。

表2 不同来源白英乙醇提取物出膏率及其对Hela细胞增殖抑制率(±s，n=3)

表2 不同来源白英乙醇提取物出膏率及其对Hela细胞增殖抑制率(±s，n=3)

来源编号 出膏率(%)浓度(mg/mL)抑制率(%)IC50(mg/mL)1 15.66 6 90.05±4.79 1.91±0.16 3 80.28±1.99 1.5 26.13±5.21 0.75 16.02±4.77 2 10.54 24 93.39±1.13 4.51±0.16 12 92.79±1.06 6 61.42±4.02 3 27.72±2.84

来源编号 出膏率(%)浓度(mg/mL)抑制率(%)IC50(mg/mL)3 13.55 24 93.72±3.12 5.87±0.10 12 87.31±0.12 6 46.99±0.72 3 19.02±0.89 4 14.25 24 99.00±0.22 7.05±0.12 12 78.38±2.68 6 31.43±0.16 3 7.09±1.13 5 9.12 24 96.55±1.86 8.99±0.99 12 57.39±3.89 6 17.63±2.97 3 2.85±0.92 6 13.43 24 94.12±2.41 10.10±0.89 12 44.81±6.04 6 14.33±3.61 3 7.88±5.79 7 10.40 24 94.40±0.16 11.60±1.67 12 40.16±0.87 6 12.99±2.57 3 7.34±3.34 8 11.61 24 94.79±0.74 12.13±1.71 12 33.59±7.18 6 6.62±5.13 3 4.33±1.46 9 9.75 24 95.89±1.49 12.23±0.80 12 41.27±0.34 6 9.05±1.88 3 －0.65±0.55 10 7.20 24 82.01±6.28 13.33±0.70 12 55.82±9.78 6 20.11±2.89 3 －6.37±1.91 11 9.75 24 76.20±1.93 13.53±3.25 12 32.96±1.34 6 25.18±8.44 3 22.95±5.94 12 12.41 24 93.87±2.27 13.94±2.14 12 28.78±7.85 6 5.06±3.73 3 3.47±0.65 13 7.08 24 94.51±2.65 14.46±0.75 12 20.98±0.23 6 4.43±0.86 3 －1.72±0.11 14 13.77 24 92.94±1.05 14.75±2.24 12 23.46±3.66 6 4.84±2.79 3 －2.72±2.14

来源编号 出膏率(%)浓度(mg/mL)抑制率(%)IC50(mg/mL)15 13.12 24 73.40±0.42 14.83±0.20 12 40.55±0.42 6 12.23±0.42 3 0.85±0.82 16 11.22 24 79.96±4.32 15.64±2.05 12 33.47±4.25 6 6.43±4.58 3 －7.42±4.04 17 6.40 24 77.15±3.12 16.41±0.88 12 23.53±6.19 6 4.35±3.15 3 －1.30±0.03 18 15.60 24 94.44±0.34 17.28±0.81 12 5.50±4.94 6 0.61±2.02 3 －6.01±1.02 19 12.40 24 82.58±4.53 17.68±0.67 12 20.33±5.91 6 0.65±3.15 3 －4.02±0.21 20 9.60 24 74.65±6.60 17.87±0.67 12 32.36±3.97 6 1.09±0.10 3 －6.48±1.75 21 10.44 24 67.53±1.14 19.44±0.20 12 11.86±0.44 6 0.27±0.37 3 －3.26±0.62 22 7.22 24 51.00±1.20 22.02±0.69 12 5.94±2.81 6 0.07±4.35 3 －9.07±0.97 23 9.03 24 69.73±2.10 22.63±3.44 12 18.89±6.60 6 1.57±0.43 3 1.03±0.05

注:负值计算IC50时舍去

4 讨论

4.1 实验所用24个来源白英药材基本涵盖了全国各产地，平均出膏率为10.81%，广西柳州、浙江、内蒙古产地出膏率较高，广东佛山产地出膏率最低，北方产地与南方产地并无明显差异。

4.2 不同产地白英乙醇提取物IC50值在1.91～24.26 mg/mL范围内，存在一定差异。广西柳州产地抗肿瘤活性明显比其他产地好，浙江宁波产地次之，广东佛山产地最差。广西两个来源白英药材出膏率、抗肿瘤活性差异较大，推测可能因采收季节、饮片制作工艺等原因所致。有报道江浙一带白英为常用药。可初步推测出，江浙产地的白英抗肿瘤活性成分含量较高。

4.3 将出膏率与抗肿瘤活性结合看，广西柳州、浙江宁波、内蒙古、湖北武汉等产地白英药材出膏率较高，抗肿瘤活性亦较好。安徽、山东青岛等产地白英药材出膏率虽高，但抗肿瘤活性偏低。因此，白英药材出膏率的高低与抗肿瘤活性好坏无必然联系。

［1］ 韦星，李朝敢，农蒿，等.白英提取液对Hela细胞凋亡及P53和Bcl-2蛋白表达的影响［J］.右江民族医学院学报，2006(5):715-716.

［2］ 单长民，胡娟娟，杜冠华.白英提取物诱导人肝癌BEL－7402细胞凋亡作用［J］.中国临床药理学与治疗学，2001，6(3):200-203.

［3］ 韩重，黄霁，何珉，等.白英抗肿瘤成分提取工艺的研究［J］.中草药，2006，37(10):1500-1501.