AW2镇痛药理作用的实验研究

王思斯 姜忠良 匡文娟 王彦丁 杨云霞 王曙 朱玲△

(1.四川大学华西基础医学与法医学院,2.四川山和药业有限公司,3.四川大学华西药学院,四川 成都 610041)

阿魏为伞形科植物,世界上约有150种,现主要分布于地中海、中亚及其邻近地区;我国有26种1变种,主要分布于新疆[1-2]。新疆阿魏是常用维药之一,可消食健胃,通经止痛,祛风寒,排泄多余黏液质,强筋健脑等,具有抗胃溃疡作用,抗炎作用及免疫调节作用,用于食欲不振、胃痛、脑、筋之寒症、瘫痪、口眼歪斜、手指震颤、耳、牙之疾[3-4]。AW2为新疆阿魏的树脂经蒸馏提取的挥发油,故命名为阿魏油。文献报道阿魏挥发油对三种贺癣菌试验有抑制作用[5]。本实验主要对AW2是否具有镇痛作用进行初步的研究,旨在对其进一步开发和临床应用提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

小鼠,雌雄兼用,体重(20±2)g,由四川大学实验动物中心提供,动物证号0020358,根据实验性质和性别分笼喂养,自由采食饮水。电子称、灌胃器、注射器、CS501型超级恒温水浴、秒表等。

AW2,软胶囊,内含挥发油,黄色透明液体,具强烈而持久的蒜样特异臭气,味辛辣,有灼烧感,100g生药提取10ml挥发油[6],批号080301,由四川大学药学院提供;AW2高、中、低剂量组小鼠灌胃给药体积均为0.2ml◦10g-1(分别相当于4,2,1 g(生药量)◦kg◦d-1)给药(以后文中出现AW2组的剂量均为生药量),临床拟定成人用剂量为 2ml(挥发油)◦d-1。盐酸吗啡注射液,无色透明液体,规格：10 mg◦ml-1,东北制药集团公司沈阳第一制药厂生产,批号071001;取 1ml吗啡注射液,用9ml生理盐水配制成浓度为 1 mg◦ml-1的药液,每只给药体积为0.1ml◦10g-1(相当于10mg◦kg◦d-1),约相当于临床用量的10倍。冰醋酸(中国成都化学试剂厂)生理盐水(四川科伦药业股份有限公司,批号：K081009B)乙醇(成都海星化工试剂厂,批号：0080908)。

1.2 方法

1.2.1 小鼠扭体法镇痛实验[7]

取体重18～22 g健康小鼠50只,雌雄各半,随机分为5组,每组 10只,分为阴性对照组、盐酸吗啡注射液组(10 mg◦kg-1),AW2高、中、低剂量组(4、2、1 g◦kg-1剂量组)。阴性对照组及AW2各剂量组小鼠灌胃给药体积均为0.2ml◦10g-1,盐酸吗啡腹腔注射体积为0.1ml◦10g-1。灌胃给药后30min腹腔注射 0.7%冰醋酸0.2ml◦只-1,同时用秒表计时,记录注射冰醋酸后15min内的各鼠扭体反应(腹部内凹、伸展后肢、臀部抬高)扭体次数,计算各药抑制率,抑制率=(对照组扭体次数-给药组扭体次数)/对照组扭体次数×100%。并记录射冰醋酸后小鼠第一次出现扭体的时间,即阈值。

1.2.2 小鼠热板法镇痛实验[7]

取雌性小鼠,放入(55±0.5)℃热板测痛仪中,以舔后足作为疼痛反应指标,预测小鼠药前痛阈值以痛阈值小于30 s视为合格小鼠,将痛阈值合格的50只小鼠随机分为5组,每组10只。分组及给药方法同前。 给药后 0、30、60、90、120、150min按照前法用秒表记录痛阈值(凡痛阈值超过60 s者停止试验,按60 s记)并计算痛阈提高率。痛阈值提高百分率(%)=[(药后痛阈值-药前痛阈值)/药前痛阈值]×100%。

1.3 统计分析

2 结果

2.1 小鼠扭体法镇痛实验结果

由表1可见,与阴性对照组比较,盐酸吗啡注射液组扭体首次出现的时间,有显著性差异(P＜0.001);AW2各剂量组在扭体首次出现的时间与阴性对照组相比也有明显的差异(P＜0.01)。从扭体次数来看,盐酸吗啡注射液组和阴性对照组相比有显著性差异(P＜0.001);AW2各剂量组扭体次数与对照组相比有明显差异(P＜0.01),且有量效趋势,高剂量组作用较好,镇痛作用抑制率大于50%。实验重复三次,均得到相似结果。本实验结果表明,采用扭体法,AW2各剂量组灌胃给药可不同程度抑制化学刺激所致的小鼠扭体反应,有一定的镇痛作用。另外,采用扭体法7个AW2剂量组给药观察,试验后采用Bliss方法,AW2的镇痛ED50为3.3342 g◦kg-1,95%可信限为1.1458～9.7019 g◦kg-1(未发表)。

表1 AW2对冰醋酸致小鼠疼痛的影响(,n=10)

表1 AW2对冰醋酸致小鼠疼痛的影响(,n=10)

注：与阴性对照组＊P＜0.05,＊＊P＜0.01,＊＊＊P＜0.001,与吗啡组比较#P＜0.05,##P＜0.01,###P＜0.001。

组别 剂量(g◦kg-1) 阈值(s) 扭体次数(15min) 抑制率(%)阴性对照组 - 2.182±0.759 56.700±9.922 0吗啡组 0.01 12.610±3.870＊＊＊ 0.400±0.843＊＊＊ 99.32 AW2高剂量组 4 3.683±0.921＊＊＊### 27.400±13.721＊＊＊### 51.68 AW2中剂量组 2 3.190±1.067＊＊＊### 34.200±11.380＊＊＊### 39.68 AW2低剂量组 1 3.463±0.858＊＊### 35.800±9.271＊＊＊### 36.86

2.2 小鼠热板法镇痛实验结果

本实验条件下由表2表3可见：各时间段吗啡组痛阈值都有明显的提高,都有明显的镇痛作用,与阴性对照组相比有显著性差异(P＜0.05～0.001)。AW2高、中、低三个剂量组给药后痛阈均有一定程度的提高,对热板法所致疼痛均有一定程度的镇痛作用,但与阴性对照组相比,仅120min时段后高、低剂量组较之有统计学差异(P＜0.05),其余时段并无显著性差异(P＞0.05)。本实验结果提示,对于热板法所致的小鼠疼痛,本实验所用剂量下AW2镇痛作用较轻微,无统计学意义,但其作用呈量效趋势,增大剂量实验可能镇痛作用较好。

表2 AW2对热刺激致小鼠疼痛的影响(,n=10)

表2 AW2对热刺激致小鼠疼痛的影响(,n=10)

注：与阴性对照组比,＊表示p＜0.05,＊＊p＜0.01;与吗啡组对比,#表示p＜0.05。

组别 剂量(g◦kg-1)痛阈值(s)0min 30min 60min 90min 120min 150min阴性对照组 - 22.100±6.488 41.400±13.410 41.400±17.456 43.900±17.527 44.300±17.833 47.200±16.444吗啡组 0.01 16.400±7.214 57.500±7.906＊＊ 59.900±0.316＊ 60.000±0＊＊ 60.000±0＊ 60.000±0＊AW2高剂量组 4 23.100±7.015 49.400±12.1216 51.300±2.737# 54.200±9.1869 52.000±13.944 60.000±0＊AW2中剂量组 2 23.300±6.111# 43.800±16.8312#40.000±15.832# 44.700±18.939# 52.800±11.717 50.60±14.025#AW2低剂量组 1 24.000±5.099 50.800±13.315 53.800±12.246 53.600±13.566 59.700±0.9487＊ 60.000±0＊

表3 AW2对热刺激致小鼠疼痛的影响(,n=10)

表3 AW2对热刺激致小鼠疼痛的影响(,n=10)

注：与阴性对照组比,＊、＊＊、＊＊＊表示 p＜0.05,p＜0.01,p＜0.001。

给药后痛阈提高值(率)(s(%))组别 剂量(g◦kg-1)30min 60min 90min 120min 150min值率值率值率值率值率阴性对照组 - 20.2±14.97 1.1206±0.8948 23.3±15.28 1.1635±1.0135 23.1±18.21 1.3312±1.4185 22.2±15.27 1.0218±0.7486 25.9±17.361.4493±1.3038吗啡组 0.01 41.1±8.24 3.0226±1.4752＊＊ 43.5±7.38 3.3314±1.8480＊＊ 43.6±7.21 3.3351±1.8432＊ 43.6±7.21 3.3351±1.8432＊＊ 43.6±7.21 3.3351±1.8432＊AW2高剂量组 4 23.6±11.61 1.2893±0.6984 28.4±12.33 1.4032±0.8142 31.1±6.33 1.4998±0.6629 29.7±16.77 1.6388±1.3678 36.9±7.02 1.8931±1.1309 AW2中剂量组 2 20.5±15.19 0.9488±0.8457 17.2±17.28 0.9272±1.1687 19.1±19.1 0.9547±1.0944 29.5±12.08 1.4036±0.8062 27.3±12.011.2222±0.6889 AW2低剂量组 1 27.4±13.4 1.2646±0.7730 29.8±11.35 1.3103±0.5982 29.7±13.66 1.3587±0.9363 35.7±4.42 1.6190±0.7094 36±5.10 1.6421±0.7713

3 讨论

本文采用两个经典疼痛模型——醋酸致小鼠扭体法与热板法来考察AW2是否具有镇痛作用。醋酸致小鼠扭体模型是通过化学刺激造成小鼠腹腔急性炎症反应,而热板法属于反射性测痛模型。实验表明采用扭体法,AW2各剂量组灌胃给药可不同程度抑制化学刺激所致的小鼠扭体反应,镇痛效果和剂量有一定的相关性,随着剂量的增加,镇痛效果增强。采用Bliss方法,AW2的镇痛 ED50为 3.3342 g◦kg-1。AW2高、中、低剂量组对物理制热的小鼠都有一定程度的镇痛作用,且作用有一定的量效趋势,但不及吗啡组,镇痛作用轻微,可能增加剂量后作用相对较好。实验表明对于不同原因导致的疼痛,AW2镇痛作用不尽相同,因此其镇痛作用机制有待进一步研究。AW2在镇痛作用的研究为指导临床合理用药提供了科学依据,为研制较为理想的戒毒或抗肿瘤新药提供了药理学基础。

1 李晓瑾,刘力.稀土与西部资源开发与利用[M].北京：中国轻工业出版社,2003,302-307.

2 单人驿,余孟兰.中国植物志[M].北京：科学出版社,1992,85-117.

3 中国药典2005年版一部[S].2005,131-132.

4 维吾尔药材标准上册[S].1993,133-135.

5 谭秀芳,李晓瑾,杜翠玲,等.药用植物阿魏概况及研究进展[J].中国民族民间医药杂志,2006,78：15-15.

6 司书毅,张月琴.药物筛选——方法与实践[M].北京：化学工业出版社,2007,281-281.

7 陈奇,沈映君,刘青云,等.中药药理学实验第1版[M].上海：上海科学技术出版社,2001,24-24.