肝复康片对大鼠的长期毒性研究

周娟妮 赵诗云

（1江西中医学院附属医院 南昌330006；2江西省中医药研究院 南昌330046）

肝复康片系根据部颁中药成方制剂第7册收载的肝复康丸经剂型改革（改变提取工艺及剂型）而成的中药片剂，功能收敛、益气、解毒、降谷丙转氨酶，用于急性肝炎、慢性肝炎、早期肝硬化和肝功能不良。为了评价其安全性，我们进行了肝复康片长期毒性研究，并观察了其毒性作用的可逆性，为临床安全用药和毒副反应监测提供参考。

1 实验材料

1.1 供试品 肝复康片，每片含生药量2 g，批号：091001。

1.2 动物 健康6～7周龄SD大鼠160只，体重100～120 g，雌雄各半，清洁级，由江西中医学院实验动物中心提供（合格证号：JZDWNO：2008-0049）。饲养环境为层流柜屏障系统，温度20～26℃，相对湿度40%～70%，噪音低于60分贝。每笼5只，雌雄分开饲养，每组8笼。定时定量添加饲料和饮水，每两天更换垫料一次。鼠全价颗粒饲料喂养，自由摄食。

1.3 仪器及试剂 BS-223S电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司），7170A全自动生化分析仪（日本日立），CD1400血球计数仪（美国），RM2235组织切片机（徕卡），CX-31生物显微镜（Olympus）。总蛋白测定试剂盒（批号：20080210）、白蛋白测定试剂盒（批号：20080209）均由四川迈克尔生物制品有限公司生产，碱性磷酸酶测定试剂盒（批号：20080201）、血糖测定试剂盒（批号：20080127）、肌酐测定试剂盒（批号：20080313）、尿素氮测定试剂盒（批号：20080317）均由北京中生生物工程高技术公司生产，丙氨酸氨基转移酶（批号：20080109）、天门冬氨酸氨基转移酶（批号：20080115）均由和光纯药工业株式会社生产，总胆红素测定试剂盒（批号：20080116）、甘油三酯测定试剂盒（批号：20080125）、总胆固醇测定试剂盒（批号：20080118）、肌酸磷酸激酶测定试剂盒（批号：20080121）均由上海荣盛生物技术公司提供。

2 实验方法

2.1 动物分组及给药[1～2]将动物按体重随机分为四组，40只/组，雌雄各半，设对照组及肝复康片高、中、低剂量组[18.50、6.15、2.05 g（生药）/（kg·d）]，分别相当于临床拟用剂量的74.0、24.6、8.2倍）。每日上午9:00～10:00给药，连续给药26周。

2.2 观察指标[1～2]观察大鼠的外观特征、行为活动、饮食和体重等，每周记录一次，即时记录异常症状和体征。于给药后13周、26周及停药后2周（恢复期），每组处理10只、20只和10只动物，雌雄各半，眶后静脉取血，进行血液学和血液生化检查，处死动物，剖取脏器组织称量湿重，计算脏器指数，并进行病理学检查。血液学指标包括：红细胞（RBC）计数、血红蛋白（HGB）、红细胞压积（HCT）、平均红细胞压积（MCV）、平均红细胞血红蛋白（MCH）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）、白细胞计数（WBC）及其分类（LYN/N）、血小板计数（PLT）、网织红细胞(RC)；血液生化学指标包括：丙氨酸转氨酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN），苦味酸动力学法测肌酐（Cr）、血糖（G1u）、总蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、总胆红素（TBil）、肌酸磷酸激酶（CK）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、球蛋白（GLB）、凝血酶原时间(PT)、K+、Na+、Cl-；脏器指数包括：脑、肝、心、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、睾丸（或子宫）、附睾（或卵巢）；病理检查包括：大脑、小脑、垂体、肝、心、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、睾丸（或子宫）、附睾（或卵巢）、胃、大肠、小肠、淋巴结、膀胱等。

3 实验结果

3.1 对动物的一般行为、外观体征等的影响 给药过程中，对照组及各给药组动物均发育正常，皮毛光滑，反应机敏，自主活动未见异常，饮食及排泄物亦正常，试验期间无动物死亡。

3.2 对体重、饲料消耗量、饮水消耗量的影响 给药13周和26周及恢复期，各组动物体重均持续增长，各给药组与空白对照组比较无显著性差异，饮水量、饲料消耗量亦无显著性差异。

3.3 对血液学指标的影响 给药13周和26周，动物血液学检测未见明显异常改变，各给药组与对照组比较，血液学指标无显著性差异(P＞0.05)。见表1。

表1 肝复康片对大鼠血液学指标的影响 (±S)

表1 肝复康片对大鼠血液学指标的影响 (±S)

时间 组别 nWBC(109/L) N(%) L(%) RBC(1012/L)HGB(g/L)HCT(L/L) MCV(fL) MCH(pg) MCHC(g/L)PLT(109/L) RC(%)对照组 10 10.1±1.79 25.4±5.76 74.6±5.76 7.46±0.49 159±6.4 0.42±0.02 56.7±1.72 21.3±1.07 376±18.6 827±144.8 3.05±0.78高剂组 10 10.7±1.61 24.3±7.66 75.7±7.66 7.20±0.49 156±14.0 0.42±0.03 57.9±1.85 21.6±0.93 373±15.5 692±173.6 3.33±0.31给药13周中剂组 10 10.3±2.56 23.1±4.65 76.9±4.65 7.30±0.51 154±10.7 0.42±0.03 57.5±2.73 21.1±0.79 367±20.7 703±279.3 2.92±0.40低剂组 10 10.0±1.47 22.5±6.06 77.5±6.06 7.16±0.49 152±7.9 0.41±0.03 57.5±1.56 21.3±0.94 370±12.7 696±227.7 3.34±0.70对照组 20 9.9±1.84 23.4±4.09 76.6±4.09 7.24±0.50 156±12.3 0.41±0.03 57.2±1.84 21.5±1.03 377±21.2 697±216.2 3.11±0.56高剂组 20 10.4±2.33 23.1±6.47 76.9±6.47 7.27±0.42 157±9.0 0.42±0.03 57.3±1.96 21.6±0.94 378±15.0 728±148.2 3.29±0.57给药26周中剂组 20 10.1±1.50 25.0±7.36 75.0±7.36 7.36±0.56 157±10.4 0.42±0.03 57.2±2.35 21.3±0.88 373±23.1 696±239.5 3.04±0.71低剂组 20 10.0±1.59 23.0±5.82 77.0±5.82 7.25±0.42 154±9.1 0.42±0.02 57.5±1.93 21.3±1.16 370±20.8 806±144.5 3.40±0.60对照组 10 9.7±2.06 26.1±4.74 73.9±4.74 7.35±0.50 155±12.1 0.42±0.03 57.4±2.36 21.1±0.61 369±22.3 799±187.5 3.35±0.59高剂组 10 10.5±1.42 25.4±7.22 74.6±7.22 7.36±0.58 159±11.9 0.41±0.03 56.3±1.81 21.6±1.23 384±19.0 682±217.0 3.13±0.72恢复期 中剂组 10 10.9±2.31 21.2±4.31 78.8±4.31 7.19±0.56 155±13.4 0.42±0.03 57.7±1.80 21.5±0.97 373±22.7 711±217.7 3.13±0.47低剂组 10 9.3±1.31 21.8±6.99 78.2±6.99 7.23±0.45 153±7.1 0.42±0.02 57.7±1.76 21.3±0.83 369±11.7 746±184.9 3.33±0.7

3.4 对血液生化学指标的影响 给药13周和26周，动物血生化学检测未见明显异常改变，各给药组与对照组比较，血液生化学指标无显著性差异（P＞0.05）。见表 2、表 3。

表2 肝复康片对大鼠血液生化学指标的影响 (±S)

表2 肝复康片对大鼠血液生化学指标的影响 (±S)

mol/L) ALT(U/L) AST(U/L) ALP(U/L) CREA(mmol/L) BUN(mmol/L)0.61 46.0±9.08 137.1±12.25 193.7±58.70 23.0±2.64 6.68±1.126 0.90 42.0±5.50 142.7±17.05 222.2±64.30 22.3±3.97 6.89±1.054 0.68 44.3±7.99 144.9±20.15 217.8±74.17 22.5±4.57 6.75±0.801 0.38 43.3±6.77 150.1±13.67 218.2±76.30 22.7±2.13 6.61±0.862 0.44 45.9±8.54 143.4±19.99 216.0±63.32 22.8±4.65 6.77±0.934 0.61 41.5±5.44 135.2±18.41 223.1±54.07 21.0±3.69 6.74±1.145中剂组 20 72.1±6.10 43.5±2.74 0.9±0.41 44.2±7.57 147.7±21.87 236.4±63.94 21.9±3.09 6.36±0.683低剂组 20 71.5±4.56 43.6±2.12 1.1±0.51 43.4±6.85 139.2±19.66 216.6±46.94 23.1±4.87 6.45±0.998对照组 10 70.5±3.64 42.7±1.55 1.1±0.62 46.4±7.29 141.5±19.36 211.9±68.49 23.2±1.62 6.47±0.718高剂组 10 70.9±4.69 43.5±2.32 1.2±0.98 46.1±7.74 142.0±17.11 210.1±66.12 23.2±4.35 6.77±0.761恢复期 中剂组 10 74.2±6.06 44.5±2.35 0.9±0.46 41.5±7.53 149.5±15.60 203.2±72.17 21.4±3.47 6.73±1.296低剂组 10 70.4±5.92 43.2±2.45 0.7±0.45 41.1±6.16 141.0±14.36 224.4±67.78 22.8±3.62 6.92±0.929

表3 肝复康片对大鼠血液生化学指标的影响 (±S)

表3 肝复康片对大鼠血液生化学指标的影响 (±S)

时间 组别 n GLU(mmol/L) CK(U/L) TG(mmol/L) TC(mmol/L) K+(mmol/L) Na+(mmol/L) Cl-(mmol/L) PT（s）对照组 10 7.88±0.932 724±207.3 1.11±0.413 1.91±0.314 6.4±0.52 144.8±3.35 101.0±1.19 16.5±1.73高剂组 10 7.40±0.948 753±251.0 1.12±0.365 2.16±0.223 6.2±0.42 143.4±2.31 100.4±1.89 16.7±1.91给药13周 中剂组 10 7.69±0.612 723±237.8 1.01±0.522 1.99±0.355 6.4±0.64 143.0±1.98 100.9±2.02 16.4±1.56低剂组 10 7.76±0.905 658±230.5 1.07±0.411 1.93±0.311 6.3±0.67 143.7±3.47 100.4±1.56 17.1±1.64对照组 20 7.74±0.833 732±259.8 1.07±0.515 1.88±0.272 6.4±0.53 143.9±3.35 101.4±1.99 16.6±1.81高剂组 20 7.87±0.850 764±187.6 1.12±0.443 1.89±0.391 6.3±0.43 143.9±3.31 101.1±2.16 16.2±1.89给药26周 中剂组 20 8.16±1.058 743±249.8 1.08±0.345 1.94±0.340 6.3±0.47 144.7±3.43 100.4±2.41 16.5±1.75低剂组 20 8.02±0.928 742±192.1 1.03±0.471 1.87±0.348 6.4±0.59 144.5±2.44 101.6±1.65 16.9±1.55对照组 10 6.24±0.711 704±157.9 1.10±0.425 1.92±0.359 6.5±0.69 144.4±3.52 100.9±1.78 16.6±1.86高剂组 10 6.34±0.643 712±199.3 1.02±0.509 2.11±0.284 6.3±0.44 143.2±3.97 100.7±1.99 16.4±1.45恢复期 中剂组 10 6.05±0.885 679±303.6 0.99±0.359 2.05±0.341 6.3±0.47 144.7±3.23 100.2±2.62 16.5±1.34低剂组 10 6.19±1.167 771±248.9 1.22±0.392 1.90±0.247 6.3±0.60 142.2±1.98 100.3±1.86 15.9±1.95

3.5 系统尸检及病理检查 系统尸检，各组组织及器官均未见异常；各给药组与对照组比较，脏器指数无显著性差异（P＞0.05）。见表4。光镜病理检查结果显示，对照组及各给药组均有少数动物肺组织切片出现异常。肺切片可见局部肺气肿，或肺泡隔增厚，炎性细胞浸润。由于各组均散在出现相似肺组织炎性反应，出现的数量也相近，故没有毒理学意义。组织病理学检查，给药结束及恢复期结束，与对照组相比，各给药组均未出现相关毒性病理改变。系统尸检及病理检查显示，肉眼观察脏器未见明显异常，脏器系数均在正常范围内，高剂量组动物脏器组织学与对照组一致，基本正常，均未见有特异性组织病变及延迟性病变发生。

4 讨论

大鼠连续灌胃给药肝复康片26周，各给药组大鼠的皮毛、活动、体重、饮食、排泄物及病理学检查均未出现异常改变；且大鼠的血液学指标、血液生化学指标、脏器指数指标与对照组比较均未出现显著性差异（P＞0.05）；光镜病理检查结果显示，对照组及各给药组均有少数动物肺组织切片出现异常，推测可能与动物本身个体差异以及处理动物时的操作和给药过程有关，与药物无明显相关性，其余动物脏器组织学检查未见明显异常。在恢复2周后，各组各项指标正常，未见蓄积毒性产生，未见与药物有关的不可逆毒性反应。实验结果表明，在本试验条件下，大鼠口服肝复康片26周未见明显毒性反应的剂量为18.50 g（生药）/(kg·d)，该剂量相当于临床拟用剂量的74倍。

表4 肝复康片对大鼠脏器指数的影响 (±S) g/kg

表4 肝复康片对大鼠脏器指数的影响 (±S) g/kg

6.92±0.99 4.72±0.87 7.17±0.34 5.03±0.40 7.26±0.50 4.71±0.49 7.49±0.42 5.18±0.15肝31.12±5.38 29.63±2.87 30.63±2.42 31.22±1.59 31.87±1.62 28.92±3.19 32.70±4.10 28.24±2.70心3.41±0.20 3.40±0.34 3.40±0.24 3.51±0.35 3.56±0.47 3.37±0.25 3.73±0.23 3.22±0.19胸腺 1.88±0.59 0.90±0.20 1.68±0.31 1.17±0.19 1.67±0.27 1.22±0.35 1.68±0.32 1.20±0.37肺6.01±0.66 5.28±0.63 5.42±0.69 5.54±0.24 5.34±0.77 4.66±0.87 5.74±0.52 5.39±1.17给药13周 肾 3.18±0.38 3.14±0.34 3.09±0.40 3.22±0.19 3.28±0.38 3.24±0.24 3.28±0.39 3.27±0.17对照组 高剂组 中剂组 低剂组时间 组别 ♀ ♂ ♀ ♂ ♀ ♂ ♀ ♂脑2.66±0.17 2.04±0.37 2.74±0.52 2.05±0.34 2.54±0.39 1.78±0.22 2.79±0.62 2.00±0.24睾丸/子宫 2.32±0.67 3.95±0.28 2.00±0.56 3.66±0.10 2.02±0.28 3.51±0.20 1.91±0.39 3.71±0.64附睾/卵巢 0.46±0.07 1.40±0.16 0.43±0.08 1.54±0.30 0.49±0.11 1.31±0.12 0.59±0.19 1.45±0.50肾上腺 0.13±0.02 0.06±0.01 0.14±0.03 0.06±0.01 0.14±0.03 0.06±0.01 0.16±0.03 0.07±0.01脑7.39±0.35 4.96±0.77 7.06±0.55 4.92±0.40 7.19±0.72 5.04±0.60 7.11±0.77 4.99±0.37肝32.47±3.40 28.20±2.84 31.09±3.38 30.51±2.13 30.02±3.21 28.98±2.69 32.09±3.93 29.78±2.63心3.86±0.68 3.33±0.27 3.78±0.40 3.45±0.25 3.63±0.41 3.36±0.33 3.44±0.23 3.32±0.14胸腺 1.77±0.39 0.98±0.21 1.83±0.34 0.95±0.23 1.59±0.37 1.10±0.31 1.57±0.32 1.12±0.32肺5.95±0.65 5.44±0.68 5.61±0.57 5.47±0.63 5.54±0.67 5.29±0.99 5.66±0.68 5.25±0.69给药26周 肾 3.25±0.35 3.34±0.31 3.23±0.50 3.33±0.27 3.15±0.33 3.29±0.21 3.17±0.29 3.25±0.21脾2.70±0.77 2.14±0.68 2.58±0.35 1.93±0.35 2.67±0.78 1.96±0.22 2.80±0.67 2.14±0.66睾丸/子宫 2.01±0.31 3.86±0.34 2.00±0.67 3.62±0.43 1.71±0.63 3.72±0.49 1.86±0.50 3.57±0.21附睾/卵巢 0.50±0.07 1.45±0.22 0.49±0.18 1.43±0.11 0.49±0.18 1.43±0.20 0.45±0.09 1.47±0.27肾上腺 0.16±0.03 0.07±0.02 0.14±0.02 0.05±0.01 0.14±0.02 0.06±0.01 0.14±0.04 0.06±0.01脑6.80±0.70 5.16±0.47 7.10±0.30 4.99±0.32 7.18±0.51 4.93±0.35 7.34±0.51 4.67±0.96肝32.02±3.20 26.50±1.95 31.37±1.91 28.92±2.14 32.42±2.10 28.22±2.90 33.31±2.55 29.92±3.27心3.58±0.24 3.22±0.18 3.97±0.56 3.34±0.16 4.10±0.63 3.34±0.17 3.64±0.22 3.47±0.48胸腺 1.59±0.39 1.14±0.40 1.73±0.44 0.97±0.20 1.80±0.47 1.09±0.25 1.47±0.13 1.24±0.30肺5.63±0.32 5.40±1.37 5.66±0.45 5.78±0.73 5.77±0.70 4.92±0.79 5.25±0.80 5.15±0.48恢复期 肾 3.25±0.23 3.19±0.44 3.19±0.31 3.21±0.17 3.52±0.35 3.42±0.27 3.49±0.31 3.26±0.18脾3.02±0.98 2.03±0.37 2.39±0.51 2.33±0.90 2.63±0.33 1.86±0.28 2.77±1.06 1.95±0.17睾丸/子宫 1.81±0.28 3.69±0.63 1.73±0.37 3.68±0.23 1.90±0.52 3.36±0.57 1.84±0.37 3.86±0.26附睾/卵巢 0.55±0.22 1.26±0.18 0.42±0.06 1.32±0.07 0.51±0.03 1.35±0.11 0.47±0.12 1.40±0.26肾上腺 0.14±0.02 0.07±0.01 0.16±0.04 0.06±0.01 0.14±0.02 0.06±0.02 0.14±0.05 0.06±0.01脾

[1]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社,1993.119

[2]中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南·毒理学[M].1994.20