小儿香橘片质量标准研究

2011-03-06杜小英李秋菲姜锦花宋愿智

中国药业 2011年4期

杜小英，李秋菲，姜锦花，宋愿智

(1.陕西方舟制药有限公司，陕西西安 710075; 2.陕西省食品药品检验所，陕西西安 710061)

小儿香橘丸由木香、陈皮、苍术、白术、茯苓等19味药材制方，具有健脾和胃、消食止泻功能，用于小儿饮食不节引起的呕吐便泻、脾胃不和、身烧腹胀、面黄肌瘦、不思饮食等症的治疗[1]。小儿香橘片为其改剂型品种，原丸剂质量标准仅有一项显微鉴别，无含量测定要求。为了更好地控制产品质量，根据《药品注册管理办法》及相关技术指导原则[2～3]，笔者对其质量标准进行了研究，淘汰了比较繁杂且缺乏特异性的原鉴别项，增加了白术、苍术、木香、砂仁、陈皮、枳实、香附及山楂药材中有效成分熊果酸的薄层色谱(TLC)法鉴别，并用高效液相色谱(HPLC)法测定制剂中陈皮和枳实中橙皮苷含量。现报道如下。

1 仪器与试药

Waters 600E型高效液相色谱仪，Waters 600泵，Waters 2487紫外检测器;Millog色谱工作站，奥豪斯电子天平等。橙皮苷(批号为110721－200613，供含量测定用)、熊果酸(批号为 110742－200516)对照品及白术(批号为120925－200708)、苍术(批号为120932－200405)、木香(批号为 120921－200607)、砂仁(批号为120985－200505)、陈皮(批号为 120969－200507)、枳实(批号为120936－200503)、香附(批号为121059－200706)对照药材均购自中国药品生物制品检定所;小儿香橘片(批号分别为20080915，20080916，20080917)及不含被测药材的阴性样品(陕西方舟制药有限公司);硅胶G(青岛海洋化工厂)，甲醇(色谱纯)，水(超纯水)，其他试剂(分析纯)。

2 方法与结果

2.1 TLC 鉴别

白术:取本品适量，研细，称取5 g，加乙醚30 mL，超声处理10 min，滤过，滤液蒸至1 mL，作为供试品溶液;另取白术对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液;取不含白术的阴性样品，照供试品溶液制法制备阴性对照品溶液。照TLC法[2005年版《中国药典(一部)附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各3 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液不显色、无干扰(图1 A)。

苍术:取本品适量，研细，称取2 g，加正己烷20 mL，超声处理15 min滤过，滤液室温下挥至约1 mL，作为供试品溶液;另取苍术对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液;取不含苍术的阴性样品，照供试品溶液制法制备阴性对照品溶液。照TLC法[2005年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯(20∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇液，加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液不显色，无干扰(图1 B)。

木香:取本品适量，研细，称取2 g，加三氯甲烷20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液室温下挥至约1 mL，作为供试品溶液;另取木香对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液;取不含木香的阴性样品，照供试品溶液制法制备阴性对照品溶液。照TLC法[2005年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，分别吸取上述3种溶液各5 μL，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－环己烷(5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸试液，加热显色至斑点清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的主斑点，阴性对照品溶液不显色、无干扰(图1 C)。

砂仁:取白术项下的供试品溶液作为供试品溶液;另取砂仁对照药材1 g，同法制成对照药材溶液;取不含砂仁的阴性样品，照供试品溶液制法制备阴性对照品溶液。照TLC法[2005年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶 G薄层板上，正己烷－醋酸乙酯(8.5∶1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸试液。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的主斑点，阴性对照品溶液不显色、无干扰(图1 D)。

熊果酸:取本品适量，研细，称取2 g，加醋酸乙酯15 mL，超声处理20 min，滤过，滤液浓缩至约1 mL，作为供试品溶液;另取熊果酸对照品适量，加甲醇制成1 g/L的溶液，作为对照品溶液;取不含山楂的阴性样品，照供试品溶液制法制备阴性对照品溶液。照TLC法[2005年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯－醋酸乙酯－三氯甲烷－冰醋酸(10 ∶3 ∶0.5 ∶3.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇试液(3→10)试液。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液不显色、无干扰(图 1 E)。

陈皮:取本品适量，研细，称取2 g，加醋酸乙酯10 mL，超声处理30 min，滤过，滤液作为供试品溶液;另取陈皮对照药材1 g，同法制成对照药材溶液;取不含陈皮的阴性样品，照供试品溶液制法制备阴性对照溶液。照TLC法[2005年版《中国药典(一部)附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各4 μL，分别点于同一以0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯－甲醇－水(10∶1.7∶1.3)为展开剂，展开约3 cm，再以甲苯－醋酸乙酯－甲酸－水(20∶10∶10∶1)的上层溶液为展开剂，展开约8 cm，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的主荧光斑点，阴性对照品溶液不显色，无干扰(图1 F)。

枳实:取本品适量，研细，称取3g，加甲醇15mL，超声处理20min，滤过，滤液浓缩至约5 mL，作为供试品溶液;另取枳实对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液;取不含枳实的阴性样品，照供试品溶液制法制备阴性对照品溶液。照TLC法[2005年版《中国药典(一部)附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯－三氯甲烷－丙酮(8∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的主荧光斑点，阴性对照品溶液不显色、无干扰(图1 G)。

香附:取本品适量，研细，称取5 g，加乙醚10 mL，超声处理10 min，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1 mL溶解，作为供试品溶液;另取香附对照药材1 g，同法制成对照药材溶液;取不含香附的阴性样品，照供试品溶液制法制备阴性对照品溶液。照TLC法[2005年版《中国药典(一部)》附录Ⅵ B]试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯－醋酸乙酯－冰醋酸(9.5 ∶0.5 ∶0.5)为展开剂展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的主斑点，阴性对照品溶液不显色、无干扰(图 1 H)。

图1 薄层色谱图

2.2 橙皮苷含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Kromosil ODS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:0.1%磷酸－乙腈(78 ∶22);柱温:室温;流速:1.0 mL/min;进样量:10 μL;检测波长:284 nm。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2 000，在此条件下的高效液相色谱图见图2。

图2 橙皮苷的高效液相色谱图

2.2.2 溶液制备

取本品20片，精密称定，研细，取约1 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，超声提取40 min，放冷，称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成0.1 g/L的溶液，即得对照品溶液。取不含橙皮苷的阴性样品，同法制成阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

线性关系考察:分别精密吸取对照品溶液 3，5，10，15，20 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，以进样量 X(μg)对峰面积(Y)进行线性回归，得回归方程 A=1 976 177 C+23 809，r=0.9995(n=5)。结果表明，橙皮苷进样量在0.3～2.0 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液10 μL，连续测定。结果峰面积的 RSD为1.03%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液10 μL，分别于0，1，2，3，5，8 h时测定峰面积。结果的 RSD为1.50%(n=6)，表明供试品溶液在8 h内稳定。

重复性试验:精密称取同一批样品，依法制备供试品溶液并测定峰面积。结果的 RSD为0.83%(n=6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验:取已知浓度的供试品溶液6份，分别精密加入一定量橙皮苷对照品，依法测定，计算回收率。结果见表1。