牛磺酸有关物质检查的方法研究及质量考察

2011-03-06

中国药业 2011年4期

(北京市药品检验所，北京 100035)

牛磺酸(taurine)化学名为2－氨基乙磺酸(2－aminoethansulfonic)，是一种具有多种生理功能的含硫氨基酸，主要用于治疗感冒、发热、神经痛、扁桃体炎、支气管炎、风湿性关节炎、各类眼疾及药物中毒。其为2005年版《中国药典(二部)》收载品种[1]，在第31版美国药典和日本药局方(15版)中也已收载。但2005年版《中国药典(二部)》牛磺酸标准中无有关物质检查项。为进一步提高质量标准水平，确保对原料药质量的监控，应建立牛磺酸有关物质检查方法。由于牛磺酸无紫外吸收，无法用高效液相色谱法测定其有关物质，笔者参照第31版美国药典和日本药局方(15版)牛磺酸项下有关物质的检测方法，用薄层色谱(TLC)法为牛磺酸原料建立了有关物质检查方法，并考察了国内产品的质量，为2010年版《中国药典》中牛磺酸质量标准的制订提供了科学依据。

1 仪器与试药

薄层色谱全自动点样仪(瑞士Camag);Digistore 2数码相机系统(瑞士Camag);AE240型天平(瑞士Mettler)。牛磺酸、丙氨酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号分别为111616－200301和140680－200401);牛磺酸原料药(市售国产品，批号分别为TP08042365，TP08042366，TP06061029，TP0609004，TP0609005，TP0609006，070702，080301，080302);正丁醇(色谱纯，Sigma 公司);冰醋酸、无水乙醇、丙酮(分析纯，北京化学试剂公司);茚三酮(Fluka公司);硅胶G薄层预制板(青岛海洋化工厂、烟台化学工业研究所及Merck公司)，纯化水。

2 方法与结果

2.1 溶液配制

精密称取牛磺酸0.5 g，置25 mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成20 g/L的溶液作为供试品溶液。精密量取供试品溶液1 mL，置500 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，制成含牛磺酸40 μg/mL的溶液，作为对照溶液。分别取牛磺酸和丙氨酸对照品适量，分别用水溶解并稀释成2 g/L的溶液，各取适量，等体积混合，摇匀，作为系统适用性试验用溶液。

取于105℃下加热1 h的样品约1.0 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为高温破坏样品。取牛磺酸样品约1.0 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液A。精密量取供试品溶液A10 mL，置50 mL容量瓶中，加1 mol/L的氢氧化钠溶液10 mL，在100℃水浴中加热1 h，放冷，调pH至中性，加水至刻度，摇匀，作为强碱破坏样品。精密量取供试品溶液10 mL，置50 mL容量瓶中，加1 mol/L的盐酸溶液10 mL，在100℃水浴中加热1 h，放冷，调pH至中性，加水至刻度，摇匀，作为强酸破坏样品。精密量取供试品溶液10 mL，置50 mL容量瓶中，加30%过氧化氢溶液10 mL，在100℃水浴中加热1 h，放冷，加水至刻度，摇匀，作为氧化破坏样品。

2.2 展开剂选择及系统适用性试验用溶液确定

采用高温、强酸、强碱、强氧化方法对牛磺酸进行破坏性处理，希望能获得强制降解产物。使用3种展开剂展开剂[A为正丁醇－冰醋酸－水(5∶1∶2)，B 为正丁醇－冰醋酸－水(60∶20∶20)，C 为水－无水乙醇－正丁醇－冰醋酸(150∶150∶100∶1)]分别考察分离效果，使用4种显色方法[显色方法Ⅰ为茚三酮的丙酮溶液(1→50)，Ⅱ为茚三酮 0.2 g溶于100 mL的正丁醇－2 mol/L醋酸(95∶5)，Ⅲ为茚三酮0.3 g溶于100 mL的正丁醇再加3 mL冰醋酸，Ⅳ为碘蒸气]检视其降解产物。结果表明，在较强的降解条件下，用上述方法均未检出杂质斑点。显示牛磺酸可能具有很好的化学稳定性，也有可能此TLC法只适用于检测含有氨基的物质，若强制降解产物不含氨基，则无法检出。为研究牛磺酸原料强制降解后含量变化，又使用丹磺酰氯对牛磺酸未破坏样品及各降解产物进行柱前衍生，采用高效液相色谱法测定其含量，结果4种降解产物与未破坏样品相比含量并无下降，说明牛磺酸原料非常稳定，在强制降解条件下并没有生成其他有关物质。

由于无法选择强制降解溶液作为系统适用性试验用溶液，故考虑用杂质加入法配制系统适用性试验溶液。目前国内各厂家产品工艺不同，引入的杂质也不同，无法统一杂质对照品，只能选择与牛磺酸在同一TLC条件下比较难分离的化合物，作为其系统适用性分离对照品。丙氨酸分子的大小、性质与牛磺酸较接近，在同一条件下的TLC行为较相似，且其易得、无毒。因此，用牛磺酸与丙氨酸的等浓度混合溶液作为系统适用性试验用溶液较适宜。

用3种展开体系分别对酸降解溶液、碱降解溶液、氧化降解溶液、高温降解溶液及牛磺酸与丙氨酸的混合溶液进行展开，见图1，分离情况见表1。结果显示，C展开剂的分离能力优于A和B，因此选C展开剂较好。

图1 采用3种展开剂的薄层色谱图

表1 3种展开剂的分离情况

2.3 检视方式选择及最低检出限确定

表2为4种显色方法的对比。除碘蒸气的检测灵敏度明显较低外，其他3种显色剂的检测灵敏度差异不大。因此，选用茚三酮的丙酮溶液(1→50)显色即可。精密量取供试品溶液0.5，1.0 mL，分别置500 mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成含牛磺酸 20 μg/mL 和40μg/mL 的溶液。精密量取供试品溶液 1.0，2.0，3.0，4.0 mL，分别置 200 mL 量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成含牛磺酸 100，200，300，400 μg/mL 的溶液。使用展开剂Ⅲ，点样量5 μL，条带状点样，点样宽度3 mm。见图 2。

图2 最低检出限薄层色谱图

2.4 点样方式考察

供试品溶液配制质量浓度较高(20 g/L)，点样量较大，否则自身对照溶液色谱不易出现斑点;又因样品溶解度而不能选用较易挥发的有机溶剂作为供试品溶液配制用溶剂，只能以水作为溶剂。因此，当点样量为5 μL，采用圆点状方式点样时，供试品溶液色谱斑点易出现拖尾现象(见图3)。后采用条带状方式点样，拖尾现象大为改观(见图4)。

2.5 溶液稳定性考察

配制供试品溶液，室温放置，于 0，2，4，8，24 h 检测。结果各溶液色谱斑点颜色、大小均无明显变化，且均无杂质斑点出现，表明供试品溶液在24 h内稳定。

表2 4种显色剂的对比

图3 9批样品的薄层色谱图

图4 3批样品的薄层色谱图

2.6 拟订方法

精密吸取供试品溶液(20 g/L)、对照溶液(40 μg/mL)、系统适用性试验用溶液(1 g/L)各5 μL，分别以条带式点样方式点于同一硅胶薄层板上，条带宽度5 mm，以水－无水乙醇－正丁醇－冰醋酸(150∶150∶100∶1)为展开剂展开，晾干，喷以茚三酮的丙酮溶液(1→50)，在105℃下加热约5 min至斑点出现。系统适用性试验用溶液应能检出两个斑点，供试品溶液的杂质斑点不得多于1个，且其斑点大小和颜色不得过对照溶液的主斑点(0.2%)。