兰州地区恶性肿瘤患者弓形虫抗体IgG和IgM检测结果对比分析

连晓雯，李克生，杜惠芬，袁 明，叶文华，周永奇

（甘肃省医学科学研究院医学生物技术中心，甘肃 兰州 730050）

兰州地区恶性肿瘤患者弓形虫抗体IgG和IgM检测结果对比分析

连晓雯，李克生，杜惠芬，袁 明，叶文华，周永奇

（甘肃省医学科学研究院医学生物技术中心，甘肃 兰州 730050）

采用间接ELISA法对兰州地区435例不同临床类型恶性肿瘤患者血清中的弓形虫抗体IgG和IgM进行检测，以50例健康体检者作为对照，对前者伴发弓形虫病的情况进行统计，得出兰州地区不同临床类型恶性肿瘤患者伴发弓形虫病的特点及规律。

恶性肿瘤；弓形虫抗体IgG；弓形虫抗体IgM；弓形虫病

弓形虫（TOX）是一种寄生在宿主有核细胞内的机会致病性原虫，而弓形虫病是由弓形虫寄生在人和多种动物体内所引起的一种人兽共患病，在人体多为隐性感染，其感染率和感染后的发病情况与机体的免疫状况密切相关。免疫功能正常的人群感染后一般无临床症状，但免疫功能受损或缺陷患者及孕妇，感染后往往会产生严重后果[1]。肿瘤患者的免疫功能大多低于正常人，而且抗肿瘤治疗中的化疗和放疗会使患者的免疫功能进一步降低，因而其对弓形虫这种机会性感染的病原体特别易感。弓形虫抗体IgG和IgM是弓形虫感染的重要血清标志物，弓形虫感染早期多产生IgM抗体，IgG抗体产生较IgM抗体晚，但持续时间长，是持续感染的重要指标，两者在弓形虫病诊断和流行病学调查等方面均被广泛运用。本研究采用ELISA法对435例临床确诊的恶性肿瘤患者和50例健康体检者的血清进行弓形虫抗体IgG和IgM的检测，以了解兰州地区恶性肿瘤患者的弓形虫感染状况，并探讨其相关性。

1 对象和方法

1.1 研究对象

随机选择甘肃省肿瘤医院确诊的恶性肿瘤患者435例为研究组，其中男性167例，女性268例；年龄 12～80岁，平均49岁；消化道恶性肿瘤（食管癌、胃癌、结肠癌、直肠癌等）患者29例，肝胆恶性肿瘤患者31例，呼吸道恶性肿瘤（肺癌、支气管肺癌等）患者30例，妇科肿瘤（宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌等）患者71例，乳腺癌患者102例，血液淋巴系统肿瘤患者30例，皮肤癌患者20例，泌尿系统肿瘤（肾癌、膀胱癌等）患者43例，其他类型恶性肿瘤患者79例。对照组50例为门诊健康体检者，年龄27～78岁，平均46岁。研究组和对照组的血清均为常规分离血清，来自甘肃省肿瘤医院检验科，-20℃保存备用。

1.2 检测试剂和仪器

1.2.1 检测试剂 纯化弓形虫分泌抗原、阳性标准对照血清、阴性标准对照血清均来自中国农科院兰州兽研所；羊抗人IgG酶、羊抗人IgM酶由北京中山生物技术公司提供；包被液、封闭液、样品稀释液、酶稀释液和TMB底物均由我院实验室自行配制。

1.2.2 检测仪器 微量可调式移液器，微量搅拌器，酶联免疫检测仪，酶标洗板机，96孔酶标板（深圳市金灿华实业有限公司）。

1.3 检测方法

用间接ELISA法检测弓形虫IgG抗体和IgM抗体。经棋盘滴定实验确定ELISA的最适反应条件为：抗原以1∶1800稀释包被，血清以样品稀释液稀释，稀释倍数为1∶20，羊抗人IgG酶按1∶1000稀释，羊抗人IgM酶按1∶800稀释。检测为阳性的样本均进行复核实验，2次均为阳性者则最终判为阳性。

具体操作步骤：酶标板以100微升/孔包被抗原，37℃放置2 h，4℃过夜；随即以120微升/孔加封闭液，37℃放置2 h，干燥后封装备用。检测时每板均加阴、阳性对照血清，振荡混匀，37℃孵育30 min，洗涤4次，加入工作浓度的羊抗人IgG酶及羊抗人IgM酶，50微升/孔，振荡混匀，37℃孵育30 min，洗涤5次，加入底物A、B各50微升/孔，37℃避光反应10 min，以2 mol/L硫酸终止反应。用酶标仪于450 nm处读取OD值，分析结果。

结果判定，目测判断：显蓝色为阳性，无色或极浅蓝色为阴性；OD值判断：根据弓形虫标准阳性值和标准阴性值对照分析，将检测血清P/N≥3.0判定为阳性。

弓形虫感染判定依据：待检血清检测弓形虫抗体IgG和IgM，两者中任何一种为阳性，即判定为弓形虫感染。

2 结果

2.1 弓形虫感染检测结果（见表1）

表1 弓形虫感染检测结果

本次共检测恶性肿瘤患者血清435份，弓形虫感染率为24.14%，健康体检者共50例，弓形虫感染率为8.00%，两者比较有显著性差异（P＜0.01）。

2.2 弓形虫抗体IgG和IgM检测结果（见表2）

表2 弓形虫抗体IgG和IgM检测结果[n（%）]

本次共检测435份恶性肿瘤患者的血清，其中IgG阳性患者68例，阳性率为15.63%；IgM阳性患者48例，阳性率为11.03%；IgG和IgM均为阳性患者11例，阳性率为2.53%。健康体检者共50例，其中IgG阳性者3例，阳性率为6.00%；IgM阳性者1例，阳性率为2.00%。除肝胆恶性肿瘤患者和妇科恶性肿瘤患者的弓形虫抗体IgM阳性率明显高于弓形虫抗体IgG外，其余各类恶性肿瘤患者弓形虫抗体IgG的阳性率高于或等于弓形虫抗体IgM。

3 讨论

（1）弓形虫是一种机会致病原虫，在人体多为隐性感染，当机体免疫力低下时，其致病力增强。肿瘤患者免疫力下降，再加上放疗或化疗使机体免疫力更低，容易合并或诱发弓形虫感染，所以肿瘤患者感染弓形虫的机会增多。据国内报道[2～3]，我国恶性肿瘤患者弓形虫抗体检测阳性率介于 10.34%～63.53%之间。本次研究组恶性肿瘤患者弓形虫感染率为24.14%，是健康体检者感染率（8.00%）的3.02倍，两者之间相比有显著性差异，此结果与国内报道一致，表明肿瘤患者对弓形虫有易感倾向。

（2）近年的资料报道[4～6]，不同地区人群血清弓形虫抗体阳性率差异很大。因此，恶性肿瘤患者的弓形虫抗体阳性率与不同地区人群弓形虫的感染率有一定的关系。从检测结果中可以看出，不同临床类型恶性肿瘤患者弓形虫抗体阳性率均高于健康体检者；在各类恶性肿瘤患者中，消化道恶性肿瘤和皮肤癌患者弓形虫感染率偏高，此结果与国内外报道不完全一致[7～8]。

（3）弓形虫抗体IgG和IgM是弓形虫感染的重要血清标志物，一般IgG阳性、IgM阴性提示既往感染或慢性感染，IgM阳性、IgG阴性提示有近期感染，而IgG、IgM双阳性则多为活动性感染。比较各类恶性肿瘤患者弓形虫抗体IgG和IgM的阳性率发现，绝大多数恶性肿瘤患者弓形虫抗体以IgG阳性、IgM阴性为主，提示恶性肿瘤患者既往感染弓形虫的几率较大。肝胆恶性肿瘤患者弓形虫抗体以IgM阳性、IgG阴性居多，说明肝胆恶性肿瘤患者急性期感染的可能性大，其对机会致病性原虫——弓形虫更易感。而妇科恶性肿瘤患者的弓形虫抗体IgM阳性率明显高于弓形虫抗体IgG，比较具体病例发现弓形虫抗体以IgM阳性、IgG阴性居多，且IgG、IgM双阳性比率高，这一结果表明妇科恶性肿瘤患者近期感染弓形虫的几率明显高于其他类型恶性肿瘤患者且多为活动性感染。

[1]于恩庶.弓形虫病学[M].福州：福建科学技术出版社，1992.

[2]黄菱，李燕宾，张炜.肿瘤患者合并弓形虫感染血清抗体检测分析[J].宁夏医学杂志，2002，24（6）：335～336.

[3]杨占军，谢顺清，吕晓娴.恶性肿瘤患者并发弓形虫感染抽样调查[J].医药论坛杂志，2005，6（1）：45～46.

[4]卢致民，张振明，牛发良.肿瘤患者弓形虫感染调查[J].广东医学，1998，19（4）：281～282.

[5]刘爱芹，李雅杰.不同临床类型的恶性肿瘤患者弓形虫感染调查[J].中国人兽共患病杂志，1998，14（6）：73～74.

[6]张欠欠，张晓文，惠清法.恶性肿瘤患者弓形虫感染调查[J].中国热带医学，2009，9（2）：337.

[7]牛安欧，傅小玉，Hlobil H.用DIFA检测肿瘤患者的弓形虫抗体[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1997，15：86～88.

[8]黄鹤，阎福华，李川江，等.ELISA检测妇科肿瘤患者伴发弓形虫感染的调查[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2000，18（3）：165～166.

G424.31

B

1671-1246（2010）14-0117-02