HPLC测定复方丹参片中三七总皂苷的含量

曾荣华 邓雪媚 卢慧娴 莫肇江 刘 燕

1 广东省肇庆市第一人民医院药剂科（526021）

2 广东省肇庆医学专科学校（526021）

复方丹参片是2005年版《中国药典》一部收载的品种，由丹参、三七和冰片三昧药组成，有活血化瘀、理气止痛之功效，用于心血管疾病可显著扩张冠状动脉，增加血流量，减少心肌耗氧量，改变血液流变性。同时也能改善糖尿病患者心、脑血管及神经系统并发症的症状及体征。三七是复方丹参片的重要药物组成，国内文献报道[1-3]。对不同厂家生产的本品的含量比较只是针对丹参中主要成分丹参酮ⅡA和丹酚酸B。三七总皂苷含量变化幅度较大，致使药品质量和疗效存在很大的差异。三七中的主要有效成分是人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1，已有文献报道采用HPLC法测定以上成分的含量来控制制剂的质量[4,5]。本文采用HPLC法，同时对复方丹参片中的三七总皂苷3种主要有效成分进行了含量测定，可用于控制复方丹参片的质量，保证其临床用药有效性提供参考。

1 资料与方法

1.1 资料

仪器与试剂：Agilentl100高效液相色谱仪（美国惠普公司）；Agilentl100系列可变波长检测器；Diamonsil C18柱（5μm，250mm×4.6mm，迪马公司）；BP211D电子分析天平（北京塞多利斯天平有限公司）；KQ100型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

人参皂苷Rg1（批号：110703-200637）、人参皂苷Rb1（批号：110704-200634）、三七皂苷R1（批号：110745-200619），对照品均供含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供。实验中乙腈为色谱纯，水为纯净水，甲醇为分析纯；复方丹参片（广州白云山中药厂）。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18柱（5μm，250mm×4.6mm）；以乙腈为流动相A，0.05%磷酸水溶液为流动相B，进行二元梯度洗脱，洗脱程序[6]：0→12min流动相A 22%，12→20min流动相A 22%→28%，20→60min流动相A 28%→43%；流动相B 81%→64%；流速：1.0mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：203nm，进样量为10μL。

1.2.2 供试品溶液的制备

取复方丹参片20片(除去包衣)，研碎，精密称取约0.8g，加乙醚10mL，超声5min，过滤，弃去滤液，残渣挥干溶剂，加20mL甲醇于水浴上回流60min，放冷，过滤，滤液蒸干，加水微热溶解，定容至5mL，摇匀，精密吸取上清液1.00mL，加于E固相萃取小柱上（小柱先用5mL甲醇和5mL纯水预先冲洗处理）[7]，分别用5mL纯水和5mL 20%甲醇水溶液洗脱，弃去洗脱液，再用5mL 70%的甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，用甲醇定容至1mL，用微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。

1.2.3 对照品溶液的制备

精密称取经五氧化二磷减压干燥的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1对照品适量，分别加甲醇制成：人参皂苷Rg1质量浓度为0.462mg/mL、人参皂苷Rb1质量浓度为0.368mg/mL，三七皂苷R1质量浓度为0.105mg/mL的溶液，将三者混合作为对照品溶液。

2.1.4 缺三七阴性对照溶液的制备

按2005年版中国药典中复方丹参片中的处方，取处方中除三七外的其余药材按制剂工艺制成缺三七的阴性对照品，按2.2项下的供试品制备方法处理得缺三七阴性对照液，精密吸取溶液10μL进行测定

结果显示：在该色谱条件下，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1能够达到基线分离，阴性对照液在三七皂苷R1和人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的相同保留时间位置上未见色谱峰，说明其他成分对测定无干扰。

2 结 果

2.1 线性关系试验

精密吸取混合对照品1、5、9、13、17μL注入液相色谱仪测定，以进样量(μg)为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，计算回归方程，结果如表1所示。

表1 标准曲线结果表

2.2 精密度试验

分别精密吸取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1对照品溶液，于测定条件下进样10μL，分别重复进样5次。以3种组分峰面积分别计算，结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的RSD分别为3.02%、3.18%、3.35%，结果表明仪器精密度良好。

2.3 重现性试验

取同一批号的供试品，按供试品溶液制备项下操作，平行制备6份，按“2.1”项色谱条件测定，按外标法以峰面积计算样品含量。结果样品中测得人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1平均含量分别为5.47、5.13、1.608mg/g，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的RSD分别为3.17%，4.24%、2.31%。测定结果表明，本方法重现性符合要求。

2.4 稳定性试验

取同一批号供试品，室温下放置，分别在0、2、4、8、10、24h进样，结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的RSD分别为2.46%、3.57%、3.46%。表明供试品溶液在24h内稳定。

2.5 回收率试验

精密称取已知含量的供试品（批号为20061111，每片含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1分别为5.75、4.91、1.55mg，每片重0.3118g），分别精密加入一定量的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1对照品，按供试品溶液制备项下操作，重复操作5份，按色谱条件测定含量，计算回收率，见表2～表4。

2.6 样品测定

取3批复方丹参片内容物，分别按“2.3”项下方法进行处理样品及测定，结果批号为071001、071104、071205的样品测得的三七总皂苷含量分别为10.25、12.10和9.96 mg/粒。

3 讨 论

由于三七属于贵细药材，2005年版《中国药典(一部)》复方丹参片项下仅有丹参成分的含量测定，对三七成分仅有薄层色谱鉴别，一些厂家为了降低成本，采用少投料、用劣药来降低成本，进行恶意竞争，

表2 人参皂苷Rg1加样回收率实验（n=5）

表3 人参皂苷Rb1加样回收率实验

表4 三七皂苷R1加样回收率实验

而现有的质量标准不能有效控制该品种的质量，建议增加三七的含量测定，以保证复方丹参片疗效。同时还应考虑中药生产的现状以及中药的特殊性，对生产企业生产原料的购人、加工以及投料生产的全过程进行有效监控。实验证明，对君药三七建立含量测定方法，能有效地监控本品内在质量，有助于发挥处方应有的疗效，保证患者用药安全有效。

[1] 尹爱群,刘群,邱明丰.不同厂家复方丹参片中丹参酮ⅡA的含量测定[J] .中国中药杂志,2006,31(20)：1729-1731.

[2] 吕凤莲,宋韶锦,宋吉莲,等.不同厂家复方丹参片的质量考察[J] .时珍国医国药,2007,18(9)：2230-2231.

[3] 密静英,崔金国,魏惠珍,等.不同厂家复方丹参片中丹酚酸B的含量比较[J] .江西中医学院学报,2006,18(5)：40.

[4] 何夏秋,杨蕾,贺建华,等.用HPLC法测定三七及益尿通胶囊中人参皂苷Rg1的含量[J] .中国中药杂志,2001,26 (1)：37.