组织因子在结直肠癌中的表达及其与临床病理因素的关系

刘振邦 曹杰 梁立源 梁笑

组织因子(tissue factor，TF)即我们熟悉的凝血Ⅲ因子，参与生理性凝血，是生理性凝血过程中的启动因子。正常情况下，组织因子不存在于循环中或不与循环血液接触，只有当血管壁的完整性遭到破坏时TF才暴露于循环血液，通过激活生理性凝血级联反应，从而发挥止血功能，也在组织修复以及血栓形成等发挥重要作用。然而国外文献报道，TF还参与恶性肿瘤的生长、转移，尤其与肿瘤的血管形成有密切关系［1～2］。在国内，王鹏等［3］研究报道指出，TF 在多种肿瘤中常异常表达，可通过介导多种信号转导途径影响肿瘤的生长、侵袭和转移等病理过程。本文运用免疫组化SP法检测TF在不同大肠组织中的表达情况，采用SPSS16.0软件统计学分析并探讨TF在结直肠癌中的表达以及其表达的临床病理意义。

1 材料和方法

1.1 一般资料 收集广州市第一人民医院病理科2009年2月至2009年8月结直肠癌手术后50例石蜡标本，查阅病例资料，所有患者术前均未行放化疗治疗。其中男31例，女19例;年龄27～85岁，平均年龄约62.3岁，其中 ＜60岁者21例，≥60岁者则为29例;术后大体标本肿瘤直径＜4 cm有22例，≥4 cm则28例。肿瘤位于直肠者为33例，右半结肠者7例，左半结肠则有10例。高分化者7例，中分化为32例，而低分化则11例。伴有淋巴结转移者27例，无淋巴转移则为23例。按TNM分期，Ⅰ～Ⅱ期有16例，而Ⅲ～Ⅳ期者为34例。侵润肌层或黏膜下者为20例，而侵润浆膜或浆膜外者为30例。

30例正常大肠组组织取用行PPH术后痔疮黏膜石蜡标本，35例结直肠腺瘤则为行肠镜电切术后的石蜡标本。标本均能到广州市第一人民医院病理科选取。所有标本均制成4 μm切片。

1.2 实验材料及方法 鼠抗人TF多克隆抗体(稀释浓度1∶200)购自Santa Cruz Biotechnology公司。SP试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司，具体操作按试剂盒说明，行免疫组织化学SP法检测TF在大肠三种不同组织的表达情况。实验中使用阳性和阴性对照，阴性对照为PBS缓冲液代替一抗作。

1.3 结果判定标准 阳性参照Fromowitz方法，以细胞质着棕黄色为阳性判断标准;根据肿瘤细胞显色的比例及染色强度。在高倍镜下对细胞内反应如下评分：①无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分;②阳性范围：＜5%为0分，5% ～25%为1分，26% ～50%为2分，51% ～70%为3分，＞70%为4分。两项结果相加＜2分为阴性(-)，2～3分为弱阳性(+)，4～5分为中度阳性(++)，6～7分为强阳性(+++)。

1.4 统计学方法 采用采用SPSS16.0软件进行χ2检验，检验水准a=0.05;当n＜5时，采用Fisher精确检验法检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TF在正常结直肠组织、结直肠腺瘤组织以及结直肠癌中的表达率情况 正常结直肠组织、结直肠腺瘤组织以及结直肠癌中TF的表达率分别为16.67%、25.71%和76.00%。见表1。

表1 TF在三种组织中的阳性表达情况(例，%)

2.2 TF的表达与结直肠癌临床病理的关系 TF的表达水平与肿瘤直径、年龄、性别、侵润深度无关;与肿瘤的分化程度、淋巴结转移情况以及TNM分期有关。见表2。

表2 结直肠癌TF表达及其与各种临床病理的关系

附图 TF在结直肠癌中表达与在腺瘤中阴性表达(×200)

3 讨论

组织因子(tissue factor，TF)是一个由263个氨基酸残基组成的跨膜单链糖蛋白，分子量约为47kDa。其中氨基端219个氨基酸残基位于细胞膜外，紧随其后的23个氨基酸残基则穿过细胞膜，其余21个氨基酸残基位于细胞质内。许多研究报道TF在多种恶性肿瘤中高表达，如黑色素瘤、胰腺癌、乳腺癌等肿瘤［4～7］。Lykke J等［8］于 2003 年发现结直肠癌患者TF明显升高。周红等［9］实验报道高转移性结直肠癌细胞株SW620在基因和蛋白水平均大量表达PAR2和TF，而PAR2和TF可增强细胞的增殖、迁移能力等。目前TF在参与肿瘤的发生、转移等机制仍不清楚。但近年来研究表明，TF与肿瘤的血管生成有关。丁会民等［10］研究表明肝癌组织TF的表达与其微血管的异常增生呈正相关。周业江等［11］报道组织因子的胞质区末端具有细胞内信号传导功能，可能促进肿瘤血管内皮细胞生长因子的转录和合成。张全爱等［12］研究表明TF抗体靶向性抑制肿瘤血管生成导致肿瘤坏死。

本实验可证实：TF不仅参与生理性凝血反应，也参与肿瘤的发生及转移，并能影响其预后。本实验表1显示：TF在结直肠癌组织中表达(76.00%)和在正常结直肠组织(16.67%)与腺瘤组织(25.71%)中表达之间在统计学上有显著差异(P=0.00)。表2显示：TF在结直肠癌中的表达水平与患者的性别、年龄、肿瘤大小以及肿瘤侵润深度无明显关系(P＞0.05)，而与肿瘤的分化程度、是否淋巴结转移、TNM分期有关(P＜0.05)。

本实验结果提示TF与结直肠癌的发生及转移密切相关，为结直肠癌蛋的治疗提供新的靶向位点，也为判断其预后可能提供新的指标。但TF在结直肠发生、转移等分子学机制上仍有待更深入的研究。

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