马 /齿 /苋 /抗 /菌 /试 /验

黄修奇

(商丘职业技术学院畜牧兽医系 ,河南商丘476005)

马齿苋为马齿苋科植物马齿苋的全草。属一年生肉质草本,全株光滑无毛,茎圆柱形,平卧或斜向上,由基部分枝四散,生于田间地头、路旁及荒芜地,在我区分布较广,数量较大,在夏、秋两季茎叶茂盛时采收、割取全草,洗净泥沙,用沸水略烫后晒干备用。马齿苋性寒味酸,入大肠、肝、脾经,具有清热解毒、凉血止血、散血消肿作用[1]。在我区广泛应用于人或动物的肠炎拉稀均有良好的疗效。是民间常用的自采自用药物之一。但马齿苋对常见致病菌的抗菌作用在兽医资料中尚未见报道。我们用马齿苋水煎剂对常见致病菌进行了体外抑菌试验及抗致病菌攻击的体内抗菌试验。报告如下。

1 材料

1.1 器材 冰箱,恒温培养箱,接种箱,显微镜,90 mm培养皿,接种环,不锈钢小管(高,内外径分别为0.6、0.8 mm),试管,注射器等。

1.2 药物来源 马齿苋由本院中兽医实验室在当地自采备用。

1.3 菌种 金黄色葡萄球菌(编号:26113)、表皮球菌(26101)、乙型溶血性链球菌(32210)、大肠杆菌(44103)、痢疾杆菌(51597)、绿脓杆菌(10102),由中国药品生物制品鉴定所提供。

1.4 培养基 肉汤,血清肉汤,营养琼脂,血琼脂培养基,按规定方法配制,分装灭菌备用。

1.5 实验动物 小鼠,雌雄各半,体重20～22 g,由本院实验动物养殖场提供。

2 方法与结果

2.1 体外抑菌试验

2.1.1 供试药液制备 马齿苋12.5 g加适量蒸馏水浸泡20 min后煮沸30 min,过滤浓缩药液至25 mL,制成0.5 g/mL生药液。用蒸馏水等倍稀释再制成0.25 g/mL,0.125 g/mL生药液置冰箱待用。2.1.2 菌液制备 从斜面培养基上分别取一接种环以上菌种的菌苔,乙型溶血性链球菌接种于血清肉汤培养基中,其他菌种分别接种于肉汤培养基中,在37℃培养18 h,取出,分别用血清肉汤、肉汤培养基把原菌液作1∶500稀释成各种细菌的菌液。

2.1.3 取已制备的乙型溶血性链球菌菌液0.3 mL置于血琼脂平板表面;取其他菌液各0.3 mL各置于琼脂平板表面;用无菌圆型小玻璃棒反复均匀涂布后置37℃恒温箱中10 min,使表面干燥。取出,在每个平板上等距离平放打有标记的不锈钢小管3只,每只管内分别加入等量的不同浓度的马齿苋的药液。于37℃培养18 h。取出3个浓度的马齿苋药液,每菌种做6个平板[2]。结果见表1。

表1 马齿苋的抑菌环直径m,±SD)n=6

表1 马齿苋的抑菌环直径m,±SD)n=6

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2.2 体内抗菌试验[3]

2.2.1 供试药液制备 黄连(由商丘市医药供应站提供)3.0 g加适量蒸馏水浸泡20 min后煮沸30 min,过滤浓缩30mL,即 0.1 g/mL药液;马齿苋9.0 g按上述方法制成0.2 g/mL、0.1 g/1mL药液各30 mL,置冰箱供两天用药。

2.2.2 菌液制备 活化大肠杆菌菌种后,取典型菌落接种于肉汤培养基中,经培养后作为原菌液。用无菌生理盐水采用连续稀释方法并同时做活菌计数配制菌液浓度(CFU/mL)分别为6.0×105、6.0×106、6.0×107、6.0×108、6.0×109的大肠杆菌菌液5份。

2.2.3 预试 小鼠30只,随机分5组。各组小鼠分别腹腔注射不同菌浓度的大肠杆菌菌液0.5 mL/只,观察48 h内动物死亡情况。结果为:使小鼠死亡率达90%的大肠杆菌浓度是6.0×107CFU/mL;剂量是0.5 mL/只。

2.2.4 攻击试验 小鼠80只随机机分4组,按表2的药物及剂量分别灌胃给药,每天3次连续3 d。第4天早晨每只小鼠腹腔注射6.0×107CFU/mlL肠杆菌菌液0.5 mL造成感染。感染后继续灌胃给药,每天3次,连续3 d。于感染后第7天统计各组小鼠死亡只数。做X2检验,结果见表2。

表2 马齿苋抗大肠杆菌感染作用

根据表2可以看出,黄连和高剂量马齿苋可显著提高受大肠杆菌攻击小鼠的存活率;低剂量马齿苋亦可提高小鼠的存活率。

3 小结

使用体外抗菌试验的管碟法,取量精确,单位体积中药物浓度、菌液浓度一致,实验结果较为准确及有规律。是研究有抑菌作用药物的首选方法。药物的体内抗菌试验由于有机体因素参与,是药物、致病菌、机体三者相互作用的结果,能更好地反映药物的抗感染疗效。本试验研究从体外、体内抗菌作用两个方面阐明马齿苋水煎剂对6种常见致病菌有明显抑菌作用;对受大肠杆菌攻击的小鼠可提高存活率。为我们在兽医临床上使用马齿苋治疗某些感染性疾病提供一定的理论依据。马齿苋全草含大量甲基肾上腺素、多量钾盐、二羟基苯乙胺、二羟基苯丙氨酸,尚含生物碱、香豆精类、黄酮类、强心甙和蒽醌甙等;故在体内抗菌试验中用黄连、小檗碱[4]作阳性对照药。这又从另一个角度阐明马齿苋与黄连的共性与差异性-均与抗致病菌作用。但马齿苋的作用稍逊于黄连。

[1]江苏新医学院中药大辞典(上册)[M].上海:上海人民出版社,1975:7:289.

[2]中国药典委员会.中国药典1995年版二部附录[S].

[3]陈琦.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社,1993:278.

[4]于船.中兽医学(上册)[M].北京:农业出版社,1979:153.