高效液相色谱法测定金鸡片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量

张火旺，谢雄瑞，黄湖斌

（1.广东省河源市药品检验所，广东 河源 517000； 2.广东药学院中药学院，广东 广州 510006）

金鸡片由金樱根、鸡血藤、千斤拔、穿心莲、功劳木、两面针等6味中药组成，具有清热解毒、健脾除湿、通络活血的功效，用于治疗湿热下注引起的附件炎。其现行药品标准[1]中只有定性项无含量测定项。为确保制剂质量，保证用药安全有效，笔者采用高效液相色谱（HPLC）法测定了该制剂中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，报道如下。

1 仪器与试药

安捷伦1200型自动高效液相色谱仪；日本岛津UV-2450型紫外分光光度计；CP225D型电子天平；SB2200型超声处理器。甲醇（色谱纯，TEDIA），水为超纯水；穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯对照品（批号分别为0797-200105，0854-200103，供含量测定用，均购自中国药品生物制品检定所，含量均为100%）；金鸡片（市售品，批号分别为 20080504，20080601，20080701，IA007，依次分别编号为1，2，3，4）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[2]

色谱柱：Hypersil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（50∶50）；穿心莲内酯检测波长：225 nm，脱水穿心莲内酯检测波长：250 nm；流速：0.8 mL/min；进样量：10 μL。

2.2 溶液制备

精密称取经五氧化二磷干燥24 h的穿心莲内酯对照品10.34 mg，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解至刻度，作为穿心莲内酯对照品贮备液；精密称取经五氧化二磷干燥24 h的脱水穿心莲内酯对照品10.13 mg，置50 mL量瓶中，用甲醇溶解至刻度，作为脱水穿心莲内酯对照品贮备液；各用0.45 μm滤膜滤过，即得对照品溶液。取样品20片，除去包衣，精密称定，研细（过3号筛），精密称取适量（约相当于2片的质量），置50 mL量瓶中，加甲醇适量，密塞，超声30 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按处方工艺制备不含穿心莲的阴性样品，同法制备成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

干扰试验：分别取2.2项下3种溶液，按上述色谱条件进样测定。可见2组分的出峰时间处无干扰峰，表明处方中其他成分及辅料对样品测定无干扰（见图1）。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：分别精密量取穿心莲内酯对照品贮备液和脱水穿心莲内酯对照品贮备液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL，置50 mL和25 mL量瓶中，加甲醇至刻度并摇匀，分别配成穿心莲内酯对照品和脱水穿心莲内酯对照品溶液，按上述色谱条件分别进样测定峰面积，以峰面积积分值（A）为纵坐标、穿心莲对照品质量浓度（C）为横坐标绘制标准曲线，回归方程为穿心莲内酯 A=25.555 C+0.641 3，r=1.000 0；脱水穿心莲内酯 A=20.234 C-12.099，r=0.999 8。结果表明穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯进样量分别在 0.020 68～0.124 08 μg和 0.081 04～0.486 24 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验：取同一对照品溶液，连续重复进样测定。结果峰面积的 RSD分别为1.7%和0.43%（n=6），表明仪器精密度良好。

重现性试验：取同一批样品6份，依法平行测定2组分含量。结果穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的 RSD分别为0.63%和0.60%（n=6），表明方法重现性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，室温放置，每隔2 h测定1次。结果穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯含量的 RSD分别为0.71%和0.48%（n=7），表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

加样回收试验：精密称取已知含量的样品（批号为20080504，穿心莲内酯含量为0.635 1 mg/g，平均片重0.325 0 g/片）适量，共6份，分别加入穿心莲内酯对照品溶液（0.051 35 mg/mL）2，4，5 mL按供试品溶液制备方法操作，进样测定含量。精密称取已知含量的样品（批号为20080504，脱水穿心莲内酯含量为1.166 0 mg/g，平均片重0.325 0 g/片）适量，共6份，分别加入脱水穿心莲内酯对照品溶液（0.202 6 mg/mL）1，2，3 mL，按供试品溶液制备方法操作，进样测定含量。结果见表1。

表1 穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯加样回收试验结果（n=6）

2.4 样品含量测定

取4批样品，依法测定峰面积，按外标法计算含量。结果见表2。根据4批样品所测结果，暂订金鸡片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯总量限为1.0 mg/g。

表2 4批样品含量测定结果（mg/g，n=3）

3 讨论

取穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品适量，以甲醇为溶剂，经紫外-可见分光光度计扫描，穿心莲内酯在225 nm波长处有最大吸收，而脱水穿心莲内酯在250 nm波长处有最大吸收，灵敏度高，故选225 nm作为穿心莲内酯检测波长，250 nm作为脱水穿心莲内酯检测波长。分别超声处理样品 10，20，30，40，60 min，结果 2 组分含量最高的为超声30 min，故认为超声30 min基本提取完全。曾以甲醇-水溶液（55∶45）为流动相，但样品的分离度不好，主峰形不好；用甲醇-水溶液（40∶60）为流动相时，主峰分离好，但保留时间太长，不适合研究；而用甲醇-水溶液（50∶50）为流动相时主峰峰形较对称，分离效果较好。

4批样品中，不同厂家、批次的含量相差较大。方法学考察结果表明，本法回收率、精密度、重现性好，可更好、更进一步完善金鸡片的质量标准。

[1]WS3-B-3432-98，中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂（第18册）[S].

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：附录33.