原发性肝细胞癌生物学行为与HBV感染及survivin表达的关系

陈江 崔彬

原发性肝癌(Primary liver cancer, PLC)居我国癌症发病率的第二位，其中90%以上为肝细胞癌(HCC)，HBV感染与HCC的发生密切相关，而凋亡抑制基因survivin在HCC的发生发展中也起重要作用。因此就HBV感染后HCC的生物学行为以及与survivin蛋白表达的关系进行研究，探讨HBV感染后HCC的生物学行为。

1 资料与方法

1.1 临床资料 取2000年2月～2006年5月肝穿并经病理证实临床和病理资料完整的HCC标本61例。患者均未经过任何抗肿瘤治疗，男性52例，女性9例，年龄28～76岁，中位年龄45.6岁。病理分级按Edmondson分级法分级，I级3例，II级16例，III级40例，IV级2例。按全国肝癌病理协作组提出的HCC的大体分类方法，结节型14例，巨块型46例，弥漫型1例。47例AFP增高，29例GGT和ALT增高，B超及CT检查证实18例伴有门静脉癌栓。

1.2 方法与试剂 人Survivin(FL-142)单抗及S-P试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，免疫组化采用S-P方法，操作步骤如下:石蜡切片脱蜡至水;3%H2O2室温孵育5～10min;微波抗原修复;正常山羊血清封闭，室温15min，滴加Survivin-抗原工作液，冰箱内4ΟC过夜; PBS冲洗，滴加第二代生物素，标记二抗工作液，室温20min; PBS冲洗，滴加第二代辣根酶标记链霉卵白素工作液，室温20min;PBS冲洗，DAB显色，自来水冲洗，苏木素复染，封片。已知的乳腺癌切片为阳对照，PBS代替一抗作为空白对照。

1.3 结果判断 采用双盲法，观察切片至少5个上个具有代表性高倍视野，不少于1000个细胞，对免疫结果进行评估。Survivin阳性表达定位于细胞质，呈棕黄色。根据常规Survivin阳性细胞在同类细胞中所占比例分四个等级。阳性细胞＜10%为“-”，10%～25%“+”，26%～50%为“++”，＞51%为“+++”。

1.4 统计学处理 根据实验资料的性质，对所得资料进行x2检验，P＜0.05认为有统计学意义。

2 结果

2.1 HBV感染及survivin表达与HCC生物学行为的关系HBV感染与HCC病例的年龄、肿瘤直经以及远处转移的发生无统计学差异，与HCC的Edmondson分级、门静脉癌栓的形成、AFP值的升高肝内转移的发生以及GGT的升高有统计学意义(P＜0.05)。survivin的表达与AFP增高及肿瘤直径大小及酶学改变正相关(P＜0.05)；与Edmondson分级及肝内转移的有无门脉癌栓形成无关(见表1)。

2.2 HBV感染与survivin蛋白表达的关系 survivin蛋白在HCC组织的阳性表达主要在细胞质中,呈棕黄色颗粒。39例HBV感染HCCsurvivin蛋白的阳性表达率为68.23%(27/39)，强阳性表率(阳性细胞＞51%)为40%(12/39);22例非HBV感染HCC组织survivin蛋白的表达率为31.81%(7／22)，强阳性表率为(13.6%)3/22;两者分别有显著性差异(x2＝21.97,P＜0.05)。

表1 HBV感染与HCC生物学行为关系

3 讨论

HBV持续感染引起的炎症、坏死及再生可能导致细胞突变的概率增加，HBV感染也可以使一些抑癌基因失活，导致肝细胞的细胞周期失控，使其向“永生化”发展[1]。本实验结果表明，HBV感染与HCC的Edmondson分级、门静脉癌栓的形成、AFP增高、肝内转移、及酶学改变显著相关，提示HBV感染是肝癌的主要致癌因素并影响其生物学行为。我国肝癌患者中,HBV流行率明显高于对照人群,在HBV感染诱发原发性肝癌的过程中,有多种机制共同发挥作用。病毒DNA整合入肝细胞基因组后可激活一系列癌基因，并已发现HBV的X蛋白起着重要的作用[1]。Survivin是新发现的凋亡抑制蛋白家族成员之一，研究表明survivin在肝细胞癌中的阳性表达率为31%～70%[2]。本实验结果表明在原发性肝细胞癌中HBV感染(HBsAg阳性)与survivin阳性表达显著正相关(69.23%),而HBsAg阴性者survivin阳性表达率为31.81%。提示在肝细胞癌发生发展过程中，HBV感染可以诱发Survivin过表达。survivin与乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白(HBXIP)结合，形成survivin-HBXIP复合物，该复合物与半胱氨酸酶-9(caspase-9)前体结合，阻止其与凋亡蛋白激活因子1(APAF1)发生募集反应，从而抑制由线粒体/细胞色素C通路引发的细胞凋亡，使基因受损的肝细胞死亡障碍，引发癌变[3]。HBV感染后，乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白(HBXIP)与survivin共同作用在HCC的发生发展中有着重要的作用。

[1] 孙燕,赵平.临床肿瘤学进展[M].北京:中国协和医科大学出版社,2005:613-614.

[2] Ikeguchi M,Ueda T,satakani T,et al.Expression of survivin messenger RNA correlates with poor prognosis patients with hepatocellular carcinoma[J].Diagn Mol Pathol,2002,11:33-40.

[3] Marusawa H,Matsuzawa S,Welsh K,et al.HBXIP functions as a cofactor of survivin in apoptosis suppression[J].EMBO J,2003,22(11):2729-2740.