Ki-67在乳腺癌新辅助化疗中的表达及与病理学相关性研究*

钦传辉,黄 平,莫军扬,庄亚强

(广西医科大学第五附属医院乳腺甲状腺外科,广西 柳州 545001)

新辅助化疗(neo-adjuvant chemotherapy,NAC)作为乳腺癌的治疗策略现已广泛用于临床,术前化疗不但有利于消除全身微小转移灶,其在对局部肿瘤的缩小、降期、保乳率的提高等方面亦显示出明显的优势,而这些关键取决于肿瘤对化疗的敏感程度。近年来乳腺癌生物学因子在NAC疗效预测方面的价值已得到越来越多的重视并成为当前热点,但目前为止还没有一种特异性和敏感性都满意的基因表达及相关的肿瘤生物学指标[1]。国内外研究表明,乳腺肿瘤病理缓解率是NAC后长期无复发和总生存的最重要、也是最好的预测因素[2]。本研究通过对该院乳腺癌患者化疗前后Ki-67生物学指标与病理学缓解率进行比较分析,评价其对NAC疗效的预测价值。

1 临床资料

1.1 一般资料 45例均取自本院乳腺外科2005年9月至2009年1月住院行NAC的乳腺癌患者,使用NAC前均以空芯针穿刺或首次局部手术确诊且未经治疗的原发乳腺癌标本和NAC后的根治术标本,均为女性。参考2003年国际抗癌联盟TNM分期法,其中Ⅰ期4例,Ⅱ期 21例,Ⅲ期17例,Ⅳ期3例。年龄26～74岁,平均48岁。NAC采用ET方案表柔吡星(EPI)70～ 90 mg/m2,第1天;紫杉醇(PTX)135～175 mg/m2,第1天;3周为一个化疗周期,1～2个周期后为临床完全缓解(cCR)和临床部分缓解(cPR)继续完成预定化疗周期化疗,临床无进展(cSD)者改换 NP方案顺铂(DDP)30～40 mg/m2第1～4天;长春瑞滨(盖诺)25～30 mg/m2,第 1、8天静脉滴注;全程为6个周期(含术前化疗)。经2～4个周期化疗后行保乳术3例,余行乳腺癌改良根治术,保乳率为 6.67%。

1.2 标本检测方法及结果判定

1.2.1 试剂与方法 试剂:鼠抗人Ki-67单克隆抗体与S-P试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。方法:免疫组化染色采用SP法,DAB显色。石蜡切片脱蜡水化后,微波抗原修复,过氧化酶阻断剂灭活内源性过氧化物酶活性,羊血清工作液封闭,滴加一抗4℃过夜,滴加生物素标记的二抗,滴加链亲和素一过氧化物酶溶液。DAB显色,苏木精复染。用已知阳性组织切片为阳性对照,用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.2.2 结果判定 显微镜下观察细胞核见棕黄色颗粒为Ki-67阳性细胞。阳性病例判断:每张切片随机观察5个高倍视野,每个视野计数100个肿瘤细胞。阴性(-):无棕黄色染色或染色阳性细胞数小于10%;轻度阳性(+):阳性细胞数10%～25%;中等阳性(++):阳性细胞数 25%～50%;强阳性(+++):阳性细胞数大于或等于50%。以阳性细胞数大于或等于10%为阳性病例。

1.3 化疗疗效评估 目前肿瘤、淋巴结及结外软组织化疗反应的病理判定国内及国际上尚无明确的统一标准,本研究综合国际研究中常采用的 chevallier分级、Hisher等分级[3]及中华人民共和国卫生部主编的《乳腺癌诊治规范》中对化疗后的病理学特征进行的描述和分级,将病理缓解率分为3度。(1)化疗反应Ⅰ度(病理无变化pSD):轻度组织反应,化疗有效但不敏感,反应区域不足切片的1/3,浸润癌成分较多,可见较多的残存活的癌细胞,淋巴结转移率高;(2)化疗反应Ⅱ度(病理部分缓解pPR):中度组织反应,化疗显效为中度敏感,化疗反应约为切片的1/2,可以见到浸润癌成分,有淋巴结转移;(3)化疗反应Ⅲ度(病理完全缓解pCR):重度组织反应,化疗特效,患者对化疗非常敏感,组织切片中可见到导管内癌的成分,见不到浸润成分淋巴结转移率极低。总有效率(OR)=pCR+pPR。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件进行χ2检验,以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 NAC疗效观察 45例乳腺癌患者,病理组织学反应评价:pCR为6.67%(3/45),pPR为64.44%(29/45),pSD为28.89%(13/45),无疾病进展患者。保乳术 3例,保乳率为6.67%。

2.2 NAC对Ki-67的影响 NAC前Ki-67平均阳性表达率为80.00%(36/45),化疗后降低到44.44%(20/45),与化疗前相比,Ki-67的阳性表达率显著降低,差异有统计学意义(P=0.001)。

2.3 Ki-67的表达与病理学反应的关系 NAC后pCR+pPR者达32例(71.11%),其中化疗前Ki-67阳性表达的NAC后Ⅱ度+Ⅲ度病理学反应占90.63%(29/32),而Ki-67阴性表达的Ⅱ度+Ⅲ度的化疗反应的病理学反应仅占9.38%(3/32),两者比较差异有统计学意义(P=0.017),说明Ki-67阳性表达的乳腺癌患者对化疗疗效优于阴性表达的患者。

3 讨 论

目前通常用临床疗效来评价各种指标在NAC中的预测价值,但临床反应率作为一个预后指标分辨率不高,因为大多数患者均有效,仅少部分无效者生存率差。在NSABP-B18研究中,仅37%的临床完全缓解病例为pCR,而33%的pCR为临床部分缓解,一致性较差,其临床评价常难以准确表达病灶的真实情况。二者之间的相关性是有限的,甚至临床缓解预测预后似乎并没有作用[4]。并有学者研究发现,肿瘤病理学反应被认为是比临床反应更有力的预后因子[5]。但仍有部分乳腺癌患者对该方案不甚敏感,而乳腺癌Ki-67的高表达提示肿瘤的高侵袭性,并与预后不良有关,且与NAC疗效存在相关性,对其研究有重要意义。

目前应用最多的Ki-67是一种核抗原,在细胞周期的G1,S,G2,M期细胞核表达,能很好地反映肿瘤增生活性,是检测肿瘤细胞增殖活性最可靠的指标之一[6]。国外一些研究通过Ki-67来评价肿瘤细胞增殖分数PF,从而判断细胞增殖在NAC缓解及生存上的影响。王少华等[7]报道156例LABC的多中心随机试验,比较 EC方案 NAC前后 ER、HER-2、p53、Ki-67等指标与预后的相关性,发现Ki-67是临床反应最好的指标,Ki-67表达下降与肿瘤缓解相关,Ki-67表达下降者生存率高。本研究结果显示:NAC前 Ki-67平均阳性表达率为80.00%(36/45),化疗后降低到45.45%(20/44),化疗前Ki-67表达高,反映肿瘤增殖越活跃,而化疗后其阳性表达率显著降低,前后变化差异有统计学意义(P=0.001),提示NAC能显著抑制肿瘤细胞的增殖以及肿瘤细胞对化疗药物的敏感。

本研究采用ET方案(或NP方案),NAC病理学缓解有效率为71.11%,上述实验得出的结论表明,Ki-67表达情况与化疗后病理学对药物的反应密切相关,Ki-67阳性患者其化疗Ⅱ度+Ⅲ度病理反应的90.63%要高于阴性表达者的9.38%,差异有统计学意义(P=0.017)。化疗后标本肿瘤实质病理学多表现呈退行性改变,细胞坏死多为片,间质纤维组织不同程度增生,有肉芽组织伸人癌巢内,退变的癌巢周围有多量的泡沫细胞、淋巴细胞及浆细胞浸润。本研究结果提示Ki-67阳性患者对化疗药物越敏感,瘤内活的癌细胞越少,病理组织反应越明显,其预后越好。有研究发现Ki-67阳性与阴性表达者cPR分别为40%和20%(P=0.02),高表达与cPR具有显著相关性,说明肿瘤细胞增殖活性高者对化疗更敏感[7]。本研究结果与上述报道相似,基于这样的数据,提示NAC可能使原本预后较差的Ki-67阳性表达组患者更加受益。

综上所述,乳腺癌NAC方案的选择应以获得更高的pCR为目标,获得pCR的患者才能最终获得生存优势。本研究结果提示,Ki-67可作为乳腺癌化疗敏感性的指标,预测NAC的病理学缓解率,为患者个体化治疗提供依据及为判断预后有重要的意义。

[1] 周鑫,孙治君.乳腺癌中基因表达对化疗疗效的预测[J].重庆医学,2005,34(3):453.

[2] Moreno A,Escobedo A,Benito E,et al.Pathologic changes related to CMF primary chemotherapy in breast cancer:pathological evaluation of response predicts clinical outcome[J].Breast Cancer Res T reat,2002,75(2):119.

[3] Fisher ER,Wang J,Bryant J,et al.Pathobiology of preoperative chemothempy:findings from the National Surgical Adjuvant Breast and Bowel(NSABP)protocolB-18[J].Cancer,2002,95(4):681.

[4] Jay R·Harris.乳腺病学[M].王永胜,于金明,叶林 译.济南:山东科学技术出版社,2006:849.

[5] There D,Ceccarelli C,Migaldi M,et al.Cell proliferation in breast cancer is a major determinant of clinical outcome in node-positive but not in node-negative patients[J].Appl Immunohistochem Mol Morphol,2006,14(3):314.

[6] 黄平,莫军扬,任占平.乳腺癌组织中 MCM5和Ki-67的表达及临床意义[J].中国实用外科杂志,2009,29(3):164.

[7] 王少华,于泽平,李宁,等.乳腺癌新辅助化疗的现状和展望[J].医学研究生学报,2008,21(9):986.