结直肠癌淋巴结微转移检测的临床意义*

于 游,王 灿,彭 力,吴 强,韩继明,李雅嘉

(重庆市急救医疗中心:1.普外科;2.病理科 400014)

结直肠癌淋巴结微转移检测的临床意义*

于 游1,王 灿1,彭 力2,吴 强1,韩继明1,李雅嘉1

(重庆市急救医疗中心:1.普外科;2.病理科 400014)

目的探讨结直肠癌淋巴结微转移与临床病理参数的关系及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法,用细胞角蛋白CK20及CEA检测53例常规病理检查无淋巴结转移的结直肠癌周围淋巴结509枚。结果53例结直肠癌患者中21例有淋巴结微转移(39.6%)。微转移与浸润深度有关,深层组织的微转移阳性率高于浅层,差异有统计学意义(P＜0.05),PT3、PT4患者阳性率明显高于PT1、PT2患者,差异有统计学意义(P＜0.05)。低分化癌微转移阳性率明显高于高分化癌,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论对常规检查淋巴结为阴性的结直肠癌,微转移检测可能对准确地确定临床分期、指导治疗、判断预后有积极临床意义。

结直肠肿瘤;淋巴结微转移;免疫组化;肿瘤分期

周围淋巴结的转移情况直接关系到肿瘤的病理分期、预后判断和术后辅助治疗方案的选择。结直肠癌淋巴结转移与否是临床最为重要的诊断治疗参考指标。然而传统组织学检查对淋巴结转移,尤其是微转移的诊断有很大的局限性。淋巴结转移诊断的遗漏直接影响着临床分期的准确性。因此淋巴结微转移检测对患者术后复发及预后的预测、合理治疗方案的选择有重要的临床意义[1-2]。本文应用免疫组织化学方法研究结直肠癌淋巴结微转移与临床病理参数的关系,以探讨微转移检测的临床意义。

1 临床资料

1.1 一般资料 2003年3月至2009年3月在本院行结直肠癌根治术的53例结直肠癌患者;其中男 31例,女 22例;年龄27～71岁,平均(57.1±11.4)岁。病理分型:高分化腺癌 9例,中分化腺癌11例,低分化腺癌33例。其中结肠癌33例,直肠癌20例。PTNM 分期:Ⅰ期19例,Ⅱ期25例,Ⅲ期9例。收集常规HE染色为阴性的淋巴结共509枚,平均每例9.6枚。

1.2 试剂及方法 CK20鼠抗、CEA鼠抗、即用型抗原修复液及SP试剂盒均购自福州迈新生物制品公司。将各蜡块连续切片4张,切片厚度为4 μ m,1张行HE染色,另3张行免疫组化SP法染色,经二甲苯脱蜡、梯度酒精脱水后,柠檬酸缓冲液微波法修复抗原;3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶的活性;加入抗体,4℃过夜;DAB显色,显微镜下观察3～10 min,阳性染色为棕色或黄色;蒸镏水冲洗,苏木素复染,0.1%盐酸分化,PBS返蓝;切片经梯度酒精脱水干燥,中性树胶封固;光镜下观察结果。每次染色均以PBS代替一抗作阴性对照,直肠癌组织作为阳性对照。结果判断以胞浆黄染或棕色为阳性。

1.3 统计学方法 所有统计学处理均采用四格表χ2检验,用SPS13.0软件完成统计学分析,以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

结直肠腺癌细胞的CK20和CEA阳性染色位于胞浆内。53例结直肠癌共 509枚淋巴结中有 21例(39.6%)共47枚淋巴结出现微转移(9.2%),其中有21例(39.6%)淋巴结共46枚(9.04%)为CEA阳性,有20例(37.7%)淋巴结共43枚(8.45%)CK20阳性。二者均为阳性者42枚(8.25%)。微转移表现为单个散在或2～3个及数个聚集小团状的癌细胞位于淋巴窦内,以边缘窦为主。微转移与癌肿浸润的深度有关,肿瘤浸润愈深,微转移愈易发生(P＜0.05)。微转移还与组织类型有密切关系,分化程度低者,微转移阳性率高(P＜0.05)。但微转移与肿瘤的部位、大小无关(P＞0.05)(表1)。本组经微转移检测有19例重新分期,其中4例Ⅰ期实属Ⅲ期,15例Ⅱ期实属Ⅲ期;重新分期率为35.85%(19/53)。

3 讨 论

虽然目前结直肠癌的治疗疗效较过去20年已有了相当大的提高,但复发和转移仍然是治疗失败的主要原因,即使在常规病理学检查未发现淋巴结转移的结直肠癌患者中年内肿瘤的复发率也可达 50%[3]。分析其原因可能是因为淋巴结、血管、骨髓中存在的微小转移灶,用传统的病理检查方法很难检出,而导致临床无法及时和正确治疗[4-5]。

传统上对淋巴结的病理学检查是通过对其具有代表性的一个切面经HE染色作普通光镜检查,这种常规方法不能查及淋巴结的大部分组织,故有可能忽略淋巴结微转移的存在。近年来,随着组织化学和分子生物学技术的发展,利用免疫组化法可以发现常规HE染色所不能发现的单个癌细胞和(或)一小簇癌细胞。由于这些微转移有发展成致命的显性转移的可能,因此微转移的检测日益为人们所重视,并已成为目前研究的热点[6-7]。Nakajo等[8]对 1 761枚常规病理检查为阴性的淋巴结应用免疫组化法检查,发现有 30枚(1.7%)发生微转移。本组对509枚阴性淋巴结行微转移检测,微转移阳性率为9.2%。微转移与浸润深度密切相关,尤其以T3以上微转移的阳性率为高。本组结果显示,微转移检测使19例结直肠癌在临床上需要重新分期,重新分期率为35.85%。因此作者认为,对PT3N0应常规作淋巴结微转移检测,这使得临床分期更具科学性。成功的肿瘤微转移的诊断取决于是否具备适当的肿瘤标记物。CK19,CK20,CEA,MUC1和CD44[9]等标志物都在上皮组织中高度表达,因此可作为消化道肿瘤的特异性标记物。由于大多数肿瘤细胞的表型复杂,而且即使同一肿瘤用不同标记物结果也有所不同。目前的趋势是用多套标记物同步进行。

有学者认为,尽管免疫组化法技术可以检测HE无法发现的肿瘤微转移灶,但它并不能提供更好的预后信息[10]。而另一方面,赞同微转移检测的学者称,淋巴结微转移检测不但有利于病情的正确分期,而且有助于预后分析,便于术后治疗方案的正确决策和制订[11]。M cGuckin等[12]报道乳癌淋巴结转移对无瘤生存具有重要意义,但与总的生存率无关。而Nakajo等[8]对67例常规病理淋巴结阴性的胃癌患者进行生存分析,结果表明有淋巴结微转移患者的5年生存率明显低于无微转移患者。Perez等[13]也报道结直肠癌有淋巴结微转移患者82%生存期低于5年。但迄今为止,尚没有一种检查能直接反映癌细胞的数量、生命力、黏附力及随后的免疫应答。本组资料因缺乏随访,未做生存分析。作者认为淋巴结内存在癌细胞毕竟是淋巴转移的第1步;淋巴结内存在微转移预示着转移的危险性增加,因此微转移检测可间接地作为预后的监测指标。

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Clinical significance of micrometastasis detection in conventional pathologic nonmetastasis lymphnodes of patients with colorectal cancer*

YU You1,WANG Can1,PENG Li2,et al.
(1.Department of General Surgery;2.Departmentof Pathology,ChongqingMedical Emergency Center,Chongqing400014,China)

ObjectiveTo study the relationship between lymphnode micrometastasis and clinicopathological parameters.MethodsImmunohistochemical method was adopted to detect CK20 and CEA in 509 lymphnodes from 53 cases of colorectal cancer,in which,conventional pathological diagnosis showed no lymph node metastasis.ResultsMicrometastasis was found in 47 lymphnodes(9.2%)of 21 cases(39.6%).The incidence of micrometastasis was correlated with the depth of invasion,and the incidence of micrometastasis in PT3 and PT4 patients was more than that in PT1 and PT2 patients(P＜0.05).The incidence of micrometastasis was also higher in the poorly differentiated cancer than that in well differentiated cancer(P＜0.05).The histologicstage of the 19(35.85%)micrometastasis patients was upstaged by the group of micrometastatic lymph nodes from stageⅠ tostageⅡin 4 cases,stageⅢin 15 cases.ConclusionMicrometastasis detection in negative lymph nodes of colorectal cancer is recommended to precisely determine the tumor stage,in order to direct cancer therapy and predict prognosis.

colorectal carcinamo;lymph node micrometastasis;IHC;neoplasm staging

R735.3;R73-37

A

1671-8348(2010)05-0547-02

重庆市卫生局科研基金资助项目(06-2-011)。

2009-06-23

2009-09-08)

◦临床研究◦