上皮性卵巢癌组织中泛素与细胞周期蛋白 B1的表达*

史惠蓉,卫 玲,张瑞涛

1)郑州大学第一附属医院妇产科郑州 450052 2)甘肃省肿瘤医院妇瘤科兰州 730050

△女,1956年4月生,博士,教授,研究方向:妇科肿瘤,E-mail:huirongshi@yahoo.com.cn

卵巢癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤,目前卵巢癌发生发展的分子生物学机制仍不清楚。近年来围绕卵巢肿瘤标志物的研究[1]表明,由泛素(ubiquitin,Ub)参与组成的泛素-蛋白酶体复合通路(ubiquitin-proteasome pathway,UPP)不仅对异常蛋白质有着降解作用,而且能调控细胞周期进程,与恶性肿瘤的发生发展密切相关。细胞周期调控因子细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)的异常扩增与过表达与许多恶性肿瘤的发生发展及其预后关系密切[2-3]。作者应用免疫组织化学 SP法检测卵巢肿瘤组织中Ub和Cyclin B1的表达情况,初步探讨其与上皮性卵巢癌的关系。

1 材料与方法

1.1 标本来源 收集郑州大学第一附属医院2004年至 2007年妇产科手术切除标本 90例,患者年龄30～72岁,中位年龄 51岁。所有标本均经病理学检查确诊,术前均未行放化疗及其他治疗。其中上皮性卵巢癌 50例(浆液性囊腺癌36例,黏液性囊腺癌9例,子宫内膜样癌5例);FIGO分期:I期9例,Ⅱ期10例,Ⅲ期28例,Ⅳ期3例;分化程度:G1级15例,G2级 14例,G3级 21例;有淋巴结转移 23例,无淋巴结转移 27例。卵巢良性肿瘤组织 20例(浆液性囊腺瘤 16例,黏液性囊腺瘤 4例)。正常卵巢组织 20例,为同期因子宫肌瘤行子宫切除术同时切除的卵巢组织标本,术后病理学检查示卵巢组织无病变。

1.2 主要试剂 Ub兔抗人单克隆抗体购自福建迈新生物技术有限公司,Cyclin B1鼠抗人单克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司,均为即用型工作液。通用型SP免疫组织化学试剂盒及DAB显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 3种组织中Ub与Cyclin B1蛋白检测方法蜡块连续切片,厚 3～5μm,采用 SP免疫组织化学法检测,严格按试剂说明书进行操作。以PBS代替一抗为阴性对照,以乳癌组织石蜡切片为阳性对照。Ub阳性表达定位于细胞质和细胞核,呈棕黄色或淡棕黄色;Cyclin B1主要定位于细胞质,呈棕黄色或淡黄色。结果判定参考文献[4]。①按染色强度计分:无着色为 0分,淡棕黄色为 1分,棕黄色为 2分。②按阳性细胞所占百分比评分(用 400倍显微镜观察,取 10个视野,每个视野计数 100个细胞中的阳性细胞,计算其平均值):阳性细胞 ＜5%为 0分, 5%～为 1分,25%～为 2分,50%～为 3分,75%～为4分。以上2项评分相加,0分为(-),1～6分为(+)。

1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0进行统计学分析。不同卵巢组织中Ub及Cyclin B1阳性表达率的比较采用Fisher确切概率法及χ2检验,上皮性卵巢癌组织中Ub和Cyclin B1表达与临床病理参数的关系采用 χ2检验及校正 χ2检验,上皮性卵巢癌组织中Ub和Cyclin B1表达的关联性分析采用Pearson列联系数。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 不同卵巢组织中Ub及Cyclin B1蛋白的表达

结果见图1、表1。

图1 不同卵巢组织中Ub(A)及Cyclin B1(B)蛋白的表达(SP,×400)

表1 不同卵巢组织中Ub和Cyclin B 1蛋白阳性表达率比较 例(%)

2.2 上皮性卵巢癌组织中Ub和Cyclin B1蛋白的表达与临床病理参数的关系 结果见表 2。可知上皮性卵巢癌组织中Ub、Cyclin B1的表达与FIGO分期、分化程度和淋巴结转移有关。

表2 上皮性卵巢癌组织中Ub和Cyclin B1蛋白表达与临床病理参数的关系 例(%)

2.3 上皮性卵巢癌组织中Ub和Cyclin B1蛋白表达的关联性分析 结果见表3。

表3 上皮性卵巢癌组织中Ub和Cyclin B 1蛋白表达的关联性 例

3 讨论

Ub参与调节细胞周期进程、细胞增生与分化、蛋白质降解、DNA修复以及信号传导等多种细胞生理过程[5-6]。Cyclin B1是细胞周期G2/M期限制点的主要调控元件,与p34cdc2形成复合物,称为有丝分裂促进因子。Bazzaro等[7]研究表明,与正常卵巢组织相比,卵巢癌组织中存在Ub蛋白的蓄积,在低分化的卵巢癌组织中Ub蛋白水平升高更加明显。Takeno等[8]认为,Cyclin B1的过表达与肿瘤的发生和预后有关,同时与肿瘤的分期、大小和浸润转移有关。

该研究结果显示,上皮性卵巢癌组织中存在 Ub和Cyclin B1的过表达,提示Ub和Cyclin B1与卵巢癌关系密切。FIGO分期较晚、组织分化较差和伴有淋巴结转移的上皮性卵巢癌组织中Ub和Cyclin B1表达较高,提示Ub和Cyclin B1与卵巢癌的恶性进展和转移有关,可作为评估上皮性卵巢癌的恶性程度及预后的指标。此外,该研究结果还显示上皮性卵巢癌组织中Ub与Cyclin B1蛋白的表达有关联,提示 2者可能协同参与细胞周期调节异常,共同促进卵巢癌的恶性进展和转移。

综上所述,Ub和Cyclin B1与卵巢癌的关系密切,可能协同参与卵巢癌的恶性进展和转移,在此基础上深入研究 2者与卵巢癌发生发展的关系,有助于进一步了解卵巢癌发病的分子机制,指导临床的诊断、治疗和预后判断。

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