胃癌组织中KISS-1和基质金属蛋白酶-9蛋白的表达*

张延新,刘喜民,陈奎生,杜华贞,张云汉

1)漯河医学高等专科学校病理学教研室漯河 462002 2)漯河医学高等专科学校组织胚胎学教研室漯河 462002 3)郑州大学基础医学院病理学教研室;河南省肿瘤病理重点实验室郑州 450052

#通讯作者,男,1964年8月生,博士,教授,研究方向:肿瘤病理,E-mail:chenksh2002@yahoo.com.cn

胃癌是消化道最常见的恶性肿瘤,病死率高。研究[1]表明,胃癌的生物学行为与某些分子指标有关。作者运用免疫组织化学SP法检测了胃癌组织中肿瘤转移抑制基因KISS-1与基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)蛋白的表达,探讨2者在胃癌发生发展及浸润转移中的作用。

1 材料与方法

1.1 标本来源 45例胃癌组织标本来自漯河医学高等专科学校附属医院及郑州大学第一附属医院2005年9月至 2007年 9月的存档蜡块,均经病理学复查确诊。45例中男 34例,女 11例,年龄 36～78岁。胃癌诊断和分级参照全国胃癌协作组病理组规定标准。45例胃癌标本中,按浸润深度分为浅肌层组(14例)、深肌层组(15例)及外膜组(16例);按有无淋巴结转移分为转移组(22例)和无转移组(23例)。所有患者术前均未接受化疗、放疗及免疫治疗。45例均为胃腺癌,每例标本分别取无坏死癌灶及远离癌灶的手术残端组织(正常组织),全部标本均经40 g/L多聚甲醛固定,石蜡包埋,4μm厚连续切片备用。

1.2 2种组织中KISS-1和MMP-9蛋白检测 羊抗人KISS-1单克隆抗体购自美国DAKO公司,兔抗人MMP-9多克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司。采用SP法,KISS-1一抗工作浓度为1: 200,MMP-9为即用型工作液,DAB显色,苏木素复染。染色步骤严格按说明书进行,以PBS代替一抗作为阴性对照,分别用已知结肠和肝脏阳性切片作为KISS-1和MMP-9的阳性对照。结果判定:KISS-1和MMP-9阳性信号定位于胞质,呈棕黄色颗粒,显色强时为棕褐色。计数不少于 5个高倍视野或1 000个细胞,计算阳性细胞百分率。参照文献[2-3],根据染色强度及阳性细胞百分率综合计分。阳性细胞百分率＜10%为 1分,10%～为 2分,＞50%为3分;按染色强度:阴性为0分,淡黄色染色为 1分,中度黄色染色为 2分,棕褐色染色为 3分。以 2者之积计总分,总分 ＜3分为阴性,≥3分为阳性。

1.3 统计学处理 采用SPSS 12.0进行统计学处理。2种组织KISS-1和MMP-9蛋白阳性率的比较采用配对 χ2检验,不同病理特征的胃癌组织中KISS-1和MMP-9蛋白阳性率的比较采用χ2检验,对胃癌组织中KISS-1和MMP-9蛋白表达的关系行Pearson关联性分析,检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 2种组织中KISS-1及MMP-9蛋白的表达正常胃黏膜和胃癌组织中KISS-1及MMP-9蛋白的表达见图1和表1、2。可知,胃癌组织中KISS-1蛋白的表达低于正常胃黏膜,MMP-9蛋白的表达高于正常胃黏膜。不同病理特征的胃癌组织中KISS-1及MMP-9蛋白的表达见表3。

图1 正常胃黏膜(A)及胃癌组织(B)中K ISS-1和MM P-9蛋白的表达(SP,×400)1:KISS-1蛋白;2:MMP-9蛋白。

表1 正常胃黏膜及胃癌组织中K ISS-1蛋白的表达 例

表2 正常胃黏膜及胃癌组织中MM P-9蛋白的表达

表3 不同病理特征的胃癌组织中K ISS-1和MMP-9蛋白的表达

2.2 胃癌组织中KISS-1蛋白与MMP-9蛋白表达的关联性分析 见表4。

表4 K ISS-1蛋白与MM P-9蛋白表达的关联性分析 例

3 讨论

KISS-1基因是Lee等于1996年发现的肿瘤转移抑制基因,与多种肿瘤的浸润转移密切相关,部分学者[4]认为 KISS-1同时参与肿瘤的发生发展过程。Kostadima等[5]从272例乳癌组织中提取KISS-1 mRNA,结果显示在有转移的乳癌组织中KISS-1表达沉默。该研究结果显示,KISS-1蛋白在胃癌组织中的表达低于正常胃黏膜;在浸润浅肌层、深肌层和外膜层胃癌组织中,KISS-1蛋白阳性表达率呈降低趋势;有淋巴结转移的胃癌组织中阳性表达率较无淋巴结转移组降低,表明KISS-1参与胃癌的发生发展及浸润转移过程,可能是KISS-1通过信号传导通路促使细胞内第二信使 1,2-二酰甘油和 1,4,5-三磷酸肌醇产生增多,增加细胞内钙离子水平,进而抑制肿瘤细胞的增生,诱导肿瘤细胞分化和凋亡,同时诱导肿瘤细胞过度黏附而使其移动能力受抑[6]。

MMP-9是MMPs家族中重要的一员,被激活之后形成Ⅳ型胶原酶,降解、破坏靠近肿瘤表面的细胞外基质,从而促进肿瘤细胞向周围组织浸润和转移[7-8]。该研究结果显示,MMP-9蛋白在胃癌组织中的表达高于正常胃黏膜;在浸润浅肌层、深肌层和外膜层癌组织中MMP-9蛋白的阳性表达率呈增高趋势;有淋巴结转移的胃癌组织中其阳性表达率高于无淋巴结转移组,推测MMP-9蛋白表达升高可导致细胞外基质降解增加,进而促使胃癌浸润转移的发生。

此外,该研究结果还显示,胃癌组织中KISS-1与MMP-9蛋白的表达呈负关联,可能是KISS-1通过调节细胞质内抑制性蛋白IκBα降解胞质中p65/ p50 NF-κB蛋白,使其与MMP-9启动子的结合降低,进而减少 MMP-9的合成,导致细胞外基质降解减少、肿瘤细胞黏附能力增强及移行能力下降,进而抑制肿瘤细胞的机动性、趋化性和侵袭性[9]。

综上所述,KISS-1和MMP-9的表达和胃癌的发生发展及浸润转移有关,联合检测 2者有望用于胃癌的早期诊断和预后判断。

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