祛瘀化痰法对哮喘大鼠血管内皮细胞黏附分子及白介素１２表达的影响

贺　明　杨建民　张　静

【摘要】 目的 研究蠲哮汤对哮喘大鼠血管内皮细胞黏附分子（ICAM-1）及白介素12（IL-12）表达的影响。方法 建立由卵蛋白诱发的支气管哮喘大鼠模型；采用ELISA法检测哮喘大鼠静脉血和肺泡灌洗液(BALF)中ICAM-1、IL-12的含量。结果 模型组ICAM-1高表达，IL-12低表达，蠲哮汤能减少造模动物ICAM-1的表达，提高IL-12的表达。结论 蠲哮汤能减少造模动物ICAM-1，提高IL-12的表达，而且随着药物剂量的减少，各分表达呈递增趋势，具有量效关系。

【关键词】蠲哮汤；哮喘大鼠动物；祛瘀化痰法；ICAM-1；IL-12

Effects of Juanxiao decoctionon expression of ICAM-1 and IL-12 in asthmatic rats

HE Ming，YANG Jian-min，ZHANG Jing.Guangdong Xinhai Hospital，Guangzhou 510300,China

【Abstract】 Objective To explore effects of Juanxiao decoction on expression of ICAM-1 and IL-12 in asthmatic rats.Methods Ovalbumin-inducedasthmatic rat modelwas established ; venous blood and Bronchoalveolar Lavage Fluid were collected from asthmatic rats to measure the levels ofICAM-1 and IL-12 with ELISA.Results Higher expression of ICAM-1 and lower expression of IL-12 were found in model group.Conclusion Juanxiao decoctiondecreased expression of ICAM-1 and increased expression of IL-12 in model rats，anddose-effect relationship between the Juanxiao decoction and model rats was showed.

【Key words】Juanxiao decoction; Asthmatic rat model; Removing blood stasis and dissipating phlegm; ICAM-1; IL-12

支气管哮喘是一种以嗜酸性细胞反应为主的慢性气道炎性反应，嗜酸性细胞等分泌TXA2、PGI2等炎性介质可引起支气管平滑肌收缩、微血管扩张、通透性增高和渗出物增多等一系列的炎性反应。目前认为，白细胞和内皮细胞表面的细胞黏附分子特别是ICAM-1等的相互作用是炎性反应形成的基础。细胞因子诱发黏附分子表达则对气道炎性反应的形成起决定作用，而在哮喘中IL-12缺陷导致IL-4等TH-2类细胞因子增多，诱发黏附分子表达增强而产生炎性反应。研究表明，提高IL-12水平或阻断ICAM-1的激活可以减少炎性介质的释放，减轻气道炎性反应。临床实践表明袪血化瘀法(如蠲哮汤)治疗哮喘有满意的疗效，且能改善微循环、减少TXA2等炎性介质的释放，故推测袪血化瘀方蠲哮汤可能通过提高IL-12水平、阻断ICAM-1的激活或使其处于低表达水平，抑制炎性介质的释放，从而达到治疗哮喘的目的。本文以临床经验为基础，研究蠲哮汤对哮喘大鼠血管ICAM-1及IL-12表达的影响，从子生物学水平探讨祛痰化瘀法治疗哮喘的作用机理，现报告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 动物 SPF级SD大鼠48只，体质量200~250 g，雄性，由中山医科大学动物实验中心提供(实验动物合格证号：医动字第26-98A001)，随机分为6组，包括正常对照组、哮喘模型组、蠲哮汤大、中、小剂量组、阳性药对照组各8只。

1.1.2 实验药物 蠲哮汤组成：葶苈子10 g、青皮10 g、陈皮10 g、槟榔10 g、大黄10 g、生姜10 g、牡荆子15 g、鬼箭羽15 g。中药饮片购自广州中医药大学第一附属医院，均为合格药材，将各个组成成分均研细末过100目筛，然后按比例混合，加蒸馏水煎汁浓缩到0.5 g生药/ml备用。

1.1.3 试剂 Elisa试剂盒IL-12，ELISA试剂盒由深圳晶美生物工程有限公司提供。卵白蛋白(OVA)为Sigma公司产品。

1.1.4 主要仪器 PE480热循环仪，高速冷冻离心机(SORVALLRC5C Plus)，UV1601型紫外分光光度仪(SHIMADZU)，ZF型紫外分析仪(上海嘉鹏科技有限公司)，凝胶图像分析仪(SYNGENE)。

1.2 方法

1.2.1 造模及各组干预措施 参照文献方法造模［1，2］，先以10%卵蛋白生理盐水1 ml腹腔注射，2周后将致敏大鼠放入半密闭的有机玻璃罩内，以50 kPa(1 kPa=7.5 mm Hg)恒压喷入2%卵蛋白生理盐水20 s后再在雾室中放置30 s；隔日诱喘1次共5次；以大鼠腹肌明显收缩为阳性。①正常对照组：用0.9%生理盐水1 ml腹腔注射，2周后用同样的方法雾化吸入0.9%生理盐水。分别于第3、4、5次雾化吸入0.9%生理盐水诱喘后胃内注入蒸馏水3 ml；②哮喘模型组：按上法制备哮喘动物模型，于第3、4、5次诱喘后胃内注入蒸馏水3 ml；③蠲哮汤大、中、小剂量组药物组：按上法制备哮喘动物模型，分别于第3、4、5次诱喘后胃内注入(灌胃)已煎好的中药3 ml(用药量相当于成人每千克用药量的3倍)；④阳性药对照组：按上法制备哮喘动物模型，分别于第3、4、5次诱喘后胃内注入。

1.2.2 标本采集及处理 ①末次给药后禁食12 h，在各组动物的胃内分别灌入相应的药物或生理盐水，40 min后以0.4%的戊巴比妥钠麻醉动物，剖腹抽取腹腔静脉血5 ml，4℃、3000转/min离心5~10 min，取上清液-20℃保存待检ICAM-1、IL-12。②10 ml生理盐水注入各组大鼠支气管肺组织内反复抽吸3次，将抽吸的BALF放入离心管中1000转/min离心5~10 min，取上清液-20℃保存待检ICAM-1、IL-12。按照试剂盒说明书检测血清及支气管肺泡灌洗液中ICAM-1、IL-12。

1．3 统计学方法 计量资料均以均数±标准差（x±s）表示，各组数据均用t检验。采用SPSS 10.0统计软件进行分析，以P为差异有统计学意义。

2 结果

蠲哮汤可以减少细胞黏附因子(ICAM-1)的表达，蠲哮汤药物组与正常对照组、哮喘模型组和阳性药物对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。其中蠲哮汤高中低剂量组之间减低ICAM-1表达之间也存在差异，随着剂量减低，减少ICAM-1表达的效果减低。见表1。

蠲哮汤可以增加血清及肺泡灌洗液中IL-12的表达，蠲哮汤药物组与正常对照组、哮喘模型组和阳性药物对照显著增加(P<0.05)。

注：与正常组、哮喘模型组、阳性药物对照组比较,#P<0.05；与正常对照组比较,*P<0.05

3 讨论

哮喘的气道炎性反应主要涉及嗜酸粒细胞、肥大细胞和淋巴细胞。这些炎性细胞可以合成和释放多种炎性介质并在哮喘的发病中发挥重要作用。目前认为，白细胞和内皮细胞表面的细胞黏附分子(cell adhesion molecules，CAM)的相互作用是炎性反应形成的基础。因此CAM在哮喘气道炎性反应的发生中起重要作用，且日益受到重视［4］。CAM是位于细胞膜表面的一类大分子糖蛋白，根据其结构不同可分为三类：免疫球蛋白超家族如ICAM-1、VCAM-1等，整合素超家族(VLA-4等)，选择素超家族(E-选择素等)。主要作用是介导细胞与细胞间、细胞与细胞外基质相互粘连，从而促使白细胞附壁、外渗、游走、聚集、抗原表达和淋巴细胞激活。因此对白细胞在哮喘气道炎性反应时的组织浸润、炎性介质的释放等起重要作用。

IL-12在哮喘发病中的作用尤为重要。因为IL-12不仅诱导多种细胞因子的产生，而且可以调节TH-1/TH-2细胞免疫应答的平衡来调节机体的免疫功能。实验表明IL-4可诱导TH-2类免疫应答导致气道高反应和嗜酸球增多，IL-12则能抑制TH-2免疫应答而增加TH-1免疫应答，抑制哮喘的气道高反应和炎症细胞浸润［5］。Nasser等观察到过敏性哮喘患者气道活检组织中IL-12 mRNA的表达较正常人显著降低。以上结果表明在哮喘发病中IL-12的缺陷使TH-2细胞免疫应答增强(如IL-4等增多)、TH-1细胞免疫应答减弱，结果ICAM-1表达增强，炎性反应介质释放增多。

蠲哮汤方中葶苈子、青皮、陈皮、槟榔、牡荆子泻肺除壅，俾气顺则痰降，气行则痰消；肺与大肠相表里，哮证病作，多因肺气壅滞而致腑气不通，以致浊气不降而上逆，又加重肺气壅滞，而使哮喘难以缓解，故方中伍大黄以通肺气，腑气通则肺气自降；鬼箭羽活血化瘀，且有抗过敏作用，与逐瘀除壅之大黄相配，更能增强化瘀之功。哮证发作，常为外感诱发，伍生姜既可外散表寒，又可内散水饮，且能防葶苈子、大黄苦寒伤胃之弊。全方合用，共奏泻肺除壅，祛痰化瘀，利气平喘之功。且临床显示蠲哮汤可以较好的减少哮喘患者发作的频率及减轻发作时的症状等。

本实验结果显示蠲哮汤可以提高IL-12的表达，减少ICAM-1的表达，起到了控制气道炎症及减轻气道高反应的作用，为临床应用提供了理论基础。

参考文献

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