酶联免疫吸附试验与甲苯胺红不加热血清试验诊断梅毒螺旋体感染的价值探究

【摘要】 目的 探究酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）与甲苯胺红不加热血清试验（tolulized red unheated serum test，TRUST）诊断梅毒螺旋体（treponema pallidum，TP）感染的临床价值。方法 选取2021年1月—2023年12月男性性病就诊者哨点监测及吸毒综合哨点监测1 800名检查者进行研究，均接受ELISA、TRUST技术检查，并接受乳胶法检查，将乳胶法检查结果作为依据，分析ELISA、TRUST技术诊断TP感染的临床价值（包括灵敏度、特异度、准确度等），并计算ELISA、TRUST技术诊断TP感染与乳胶法诊断的一致性。结果 纳入的1 800名检查者中，经乳胶法检查，77名确诊为TP感染，占比4.28%（77/1 800）。将乳胶法检查结果作为依据，ELISA、TRUST技术诊断TP感染与乳胶法检查结果符合率分别为96.00%（1 728/1 800）、92.28%（1 661/1 800）；ELISA技术诊断TP感染符合率高于TRUST检查，差异有统计学意义（χ2=22.600，P＜0.001）。ELISA技术诊断TP感染与乳胶法检查具有理想的一致性（Kappa值=0.592），TRUST技术诊断TP感染与乳胶法检查也具有理想的一致性（Kappa值=0.446）。ELISA技术诊断TP感染的特异度、准确度、阳性预测值高于TRUST技术，差异有统计学意义（P＜0.05）；2种技术检查诊断TP感染的灵敏度、阴性预测值比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 与TRUST技术比较，ELISA技术诊断TP感染与乳胶法检查符合率更高，可提高诊断特异度、准确度。

【关键词】 梅毒螺旋体感染；酶联免疫吸附试验；甲苯胺红不加热血清试验

文章编号：1672-1721（2025）03-0013-04" " "文献标志码：A" " "中国图书分类号：R446.6；R759.1

TP感染会引起梅毒，起初表现为硬下疳、淋巴结肿大，随着疾病不断发展，患者可能会出现肌肉酸痛、关节肿胀、发烧等症状，严重者会损害心脏、中枢神经系统、肾脏等多个器官，危及患者生命安全[1]。因此，临床应采取有效技术及早诊断TP感染，为临床早期治疗方案的拟定提供参考。

血清学检查具有无创、简单方便、费用低等优点，是诊断TP感染的重要手段。乳胶法检查是诊断TP感染的常见技术，但该技术中乳胶颗粒的稳定性较差，会影响结果的准确性，应用存在一定局限性[2]。TRUST技术也是常见检查方法，具有一定诊断价值，适用于大样本筛查，但灵敏度、特异度低，假阳性、假阴性率较高，应用也有局限[3]。ELISA技术具有操作简单、检查快速等优点，检查灵敏度较高，适用于小样本筛查，近年来逐渐受到临床关注[4]。基于此，本研究旨在分析ELISA、TRUST技术检查诊断TP感染的临床价值，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2021年1月—2023年12月男性性病就诊者哨点监测及吸毒综合哨点监测1 800名检查者进行研究，男性1 682名，女性118名；年龄16～84岁，平均（27.32±6.76）岁；体质量指数18.3～26.7 kg/m2，平均（21.52±1.19）kg/m2；婚姻状况，已婚1 331名，未婚352名，离异113名，丧偶或其他4名。

纳入标准：均为男性性病就诊者哨点监测及吸毒综合哨点监测者；均接受ELISA、TRUST、乳胶法技术检查；精神无异常，认知正常，意识清楚；具有较高诊断依从性，主动参与调查；检查者或家属签署同意书。

排除标准：合并其他病毒感染性疾病者；妊娠或哺乳期女性；伴肝衰竭、心力衰竭者；合并肺癌、胃癌等癌症疾病者；伴血液、免疫系统疾病者；正参与其他临床试验者。

1.2 方法

1.2.1 仪器及试剂

采用美国伯腾公司提供的ELX800型酶标仪、ELX5013BioTEK洗板机和江苏新康医疗器械有限公司提供的梅毒旋转振荡器，仪器均校准，性能良好。ELISA、TRUST检查试剂盒均购自北京万泰生物药业股份有限公司，乳胶法试剂盒购自艾博生物医药（杭州）有限公司，各个技术检测步骤均严格按照试剂盒的说明书进行。

1.2.2 标本采集

叮嘱检查者标本采集前需保持空腹状态，并采集其空腹静脉血约6 mL，进行离心处理10～15 min，速率为3 000 r/min，离心半径为15 cm，然后取上层血清，及时送检，对于无法及时送检标本，应置于4 ℃冰箱中保存，备用。

1.2.3 ELISA检查及判断方法

使用前先将样品室温平衡30 min以上，然后混匀，之后设置阴性对照、阳性对照和空白对照，同时对标本进行编号，依次进行离心、加样、温育、洗板、加酶、温育、洗板、显色、测定等操作，全部检测操作需严格根据检测试剂盒操作说明规范进行。结果判读标准：阴性对照孔A值≤0.10，阳性对照孔A值≥0.80，否则实验无效；若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍弃，若2孔或2孔以上阴性对照A值＞0.1，应重复实验；样品A值＜临界值（CUTOFF）者为阴性，样品A值≥临界值（CUTOFF）者为阳性（初试阳性应重新取样双孔复试）。

1.2.4 TRUST检查及判断方法

使用前先将样品室温平衡30 min以上，实验前需混匀，之后设置阴性、阳性对照，同时对标本进行编号、离心、加样、加抗原、反应等操作，全部检测操作需严格根据检测试剂盒操作说明规范进行。结果判读标准：阳性反应（R）可见中等或较大块的粉红色凝块；弱阳性反应（W）可见较小的明细的粉红色凝块；阴性反应（N）可见粉红色均匀的沉淀物无凝集物；定量实验以呈现明显凝集反应的最高稀释度作为该血清的凝集效价。

1.2.5 乳胶法检查及判断方法

检查前，先将所用试剂、样本恢复至室温。取出试剂，置于干净平坦的台面上，用一次性塑料吸管吸取样本后，垂直滴加1滴（约25 μL）于加样孔S中，然后加入2滴缓冲液，开始计时。等待红色条带出现，检测结果在10～20 min内判读。如果2条红色条带出现，一条位于检测区（T）内，另一条位于质控区（C），提示阳性；如果仅C区出现一条红色条带，T区无红色条带，即为阴性。

1.3 评价指标

以乳胶法检查结果作为依据，分析ELISA、TRUST技术诊断TP感染与乳胶法检查结果符合率和一致性。计算ELISA、TRUST技术诊断TP感染的效能，将真阳性、真阴性、假阳性、假阴性分别记为A、B、C、D，灵敏度=A总数/（A总数+D总数）×100%，特异度=B总数/（B总数+C总数）×100%，准确度=（A总数+B总数）/总例数×100%，阳性预测值=A总数/（A总数+C总数）×100%，阴性预测值=B总数/（B总数+D总数）×100%。

1.4 统计学方法

采用SPSS 25.0统计学软件处理数据，计数资料以百分比表示，采用χ2检验；一致性采用Kappa检验（Kappa值＞0.75为一致性极好，Kappa值在0.40～0.75为一致性一般，Kappa值＜0.40为一致性较差），检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 乳胶法检查结果

本次研究纳入的1 800名检查者中，经乳胶法检查，77名确诊为TP感染，占到4.28%（77/1 800）。

2.2 ELISA、TRUST技术诊断TP感染与乳胶法检查结果符合情况将乳胶法检查结果作为依据，ELISA、TRUST技术诊断TP感染与乳胶法检查结果符合率分别为96.00%（1 728/1 800）、92.28%（1 661/1 800）；ELISA技术诊断TP感染符合率高于TRUST检查，差异有统计学意义（χ2=22.600，P＜0.001）。ELISA技术诊断TP感染与乳胶法检查结果具有理想的一致性（Kappa值=0.592），TRUST技术诊断TP感染与乳胶法检查结果也具有理想的一致性（Kappa值=0.446）。ELISA、TRUST技术诊断TP感染结果见表1、表2。

2.3 ELISA、TRUST技术诊断TP感染的价值分析

ELISA技术诊断TP感染的特异度、准确度、阳性预测值高于TRUST技术，差异有统计学意义（P＜0.05）；2种技术检查诊断TP感染的灵敏度、阴性预测值比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表3。

3 讨论

TP感染的危害较大，传染性强，多通过性生活、血液或母婴传播，少数人通过亲吻、握手等方式被传染[5]。TP感染后患者的症状较为复杂，早期一般以硬下疳为主，随着病情的加重，患者体内病原体不断扩散，侵害多个脏器器官，危及患者生命安全[6]。TP感染早期症状多为皮肤表现，容易被忽视[7]。因此，临床应倡导及早筛查、诊断TP感染。

研究发现，个体感染TP后，体内会出现较多抗体，主要包括抗TP特异性抗体、非特异性反应素[8-9]。TRUST技术能够有效检测非特异性反应素，但该抗体在体内出现晚，多在症状出现后4周才可检出，早期TP感染检出率低，且检查神经梅毒灵敏度低，进而增加漏诊风险[10]。此外，TRUST技术中抗原主要为心磷脂类物质，结果容易受到主观因素影响，进而降低诊断价值，但该技术费用低，适用于基层医院[11]。ELISA技术具有操作简单、检测范围广等优点，在TP17、TP47酶标板孔基础上检测，使用双抗原夹心法测定TP特异性抗原、抗体，并从酶标仪上读出结果，具有客观性，避免主观因素对结果的影响，可提高TP感染检查准确率[12]。据报道，ELISA技术检查TP感染可提高诊断准确度，具有一定应用价值[13]。

本研究结果显示，将乳胶法检查结果作为依据，ELISA技术诊断TP感染的总符合率、特异度、准确度、阳性预测值高于TRUST技术，且2种技术诊断TP感染与乳胶法检查结果均具有理想的一致性。结果提示，与TRUST技术比，ELISA技术诊断TP感染可提高符合率、诊断特异度和准确度。分析原因，TRUST技术价格低廉，更容易被检查者接受，但机体一般在感染TP后4～8周出现非特异性抗体，经治疗后抗体会转为阴性，这会在一定程度上降低TRUST技术检查灵敏度，不适用于潜伏期、1期和3期患者检查。TRUST技术在麻风、类风湿关节炎等免疫系统疾病中也会出现假阳性情况，导致误诊率较高[14-15]。ELISA技术中应用的酶属于有机催化剂，滴入少量酶可达到较好的显色效果，便于医师观察，可追踪抗体和抗原位置，进而定量分析，适用于各期TP感染测定，利于提高准确度[16]。但ELISA技术也有不足，比如TP抗体消失较慢，治疗后仍可能会检出，可能会导致TP感染呈终身阳性状态，不适合判定TP感染疗效。ELISA检查也有假阳性问题，这可能与抗体、抗原出现交叉反应，进而出现非特异性吸附功能有关。

综上所述，与TRUST技术比较，ELISA技术诊断TP感染与乳胶法符合率更高，可提高诊断特异度、准确度。

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（编辑：徐亚丽）