气相色谱法测定酱油中的对羟基苯甲酸酯类防腐剂

摘 要：目的：建立气相色谱法测定酱油中对羟基苯甲酸酯类防腐剂的方法。方法：样品经酸化处理后，用乙酸乙酯提取，气相色谱仪分离和定量分析。结果：8种对羟基苯甲酸酯类防腐剂在4～100 μg·mL-1线性关系良好，检出限和定量限分别在0.27～0.32 mg·kg-1和0.90～1.08 mg·kg-1；在3个加标水平下，加标回收率和精密度均符合要求。结论：该方法前处理简单、操作时间短、回收率高，适用于大批量酱油中对羟基苯甲酸酯类防腐剂的测定。

关键词：对羟基苯甲酸酯类；防腐剂；气相色谱法；酱油

Optimization of Determination of Preservatives for Parabens by Gas Chromatography

SHI Qingli， MA Yilin， ZHOU Yi， LIN Jing*

（College of Food and Quality management， Nanning University， Nanning 530200， China）

Abstract： Objective： To establish a gas chromatography method for the determination of parabens preservatives in soy sauce. Method： The samples were treated with acidification， extracted with ether， and then separated and quantitatively analyzed by gas chromatography. Result： The eight parabens had good linear relationship in the range of 4 μg·mL-1 to 100 μg·mL-1， and the limits of detection and quantification were 0.27 mg·kg-1 to 0.32 mg·kg-1 and

0.90 mg·kg-1 to 1.08 mg·kg-1， respectively; the recovery rate and precision meet the requirements at three spiked levels. Conclusion： The method has the advantages of simple pretreatment， short operation time and high recovery， and is suitable for the determination of parabens preservatives in large quantities of soy sauce.

Keywords： parabens; preservatives; gas chromatography; soy sauce

对羟基苯甲酸酯类防腐剂也称尼泊金酯，作为国家批准限量使用的食品添加剂，主要用于食品、药品和护肤品中[1]。研究表明，对羟基苯甲酸酯是一种雌激素，其活性会随着碳链的增加而增强，从而影响人体的内分泌，甚至可能与乳腺癌的发生存在联系[2-4]，因此对其进行精准检测十分必要。当前，酱油中对羟基苯甲酸酯类的测定主要参考《食品中对羟基苯甲酸酯类的测定》（GB 5009.31—2016）[5]。然而，采用国标法进行检测时，对羟基苯甲酸酯类防腐剂的加标回收率和灵敏度均不高。因此，本文建立气相色谱法测定酱油中多种对羟基苯甲酸酯类防腐剂的方法，以实现简便、准确的检测。

1 材料与方法

1.1 材料、仪器与试剂

酱油，市售。

7890B安捷伦气相色谱仪，美国安捷伦有限公司；ML204电子天平，瑞士梅特勒-托利多公司；Rotina 460R离心机，德祥科技有限公司；BUCHI/R-210旋转蒸发仪，瑞士BUCHI公司；BF-200040T氮气浓缩仪，北京八方世纪公司；Multi Reax多管式涡旋振荡器，德国Heidolph公司。

无水乙醚、无水乙醇、盐酸、氯化钠、无水硫酸钠、碳酸氢钠、浓硫酸和碳酸钠（均为分析纯），南宁汇鑫化玻仪器有限公司；对羟基苯甲酸甲酯（99.89%）、羟基苯甲酸乙酯（99.82%）、对羟基苯甲酸丙酯（99.34%）、对羟基苯甲酸丁酯（99.60%）、对羟基苯甲酸异丙酯（99.80%）和对羟基苯甲酸异丁酯（99.35%），德国Dr.Ehrenstrofer GmbH公司；对羟基苯甲酸异丙酯（99.80%）、羟基苯甲酸苄酯（99.30%）和对羟基苯甲酸正庚酯（99.80%），曼哈格BePure公司。

1.2 实验方法

1.2.1 标准溶液的配制

对羟基苯甲酸酯类标准原液（1 mg·mL-1）：准确称取0.05 g各标准物质于50.0 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释、定容到刻度线，摇匀。

对羟基苯甲酸酯类标准中间液（200 μg·mL-1）：取10.0 mL标准原液于50 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释、定容到刻度线，摇匀。

对羟基苯甲酸酯标准工作溶液：分别取一定量对羟基苯甲酸酯标准中间液于10.0 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释并定容至刻度线，配制成浓度分别为4、10、20、50 μg·mL-1和100 μg·mL-1的标准工作溶液。

1.2.2 样品前处理

称取5 g某厂家酱油试样（精确到0.001 g）于50 mL塑料离心管中，加入5 mL水、1 mL 10%硫酸溶液、10 mL乙酸乙酯，在涡旋器上涡旋10 min。以4 600 r·min-1离心5 min，准确量取5 mL上清液转移至15 mL塑料离心管中，用氮气浓缩仪在40 ℃下氮吹至干，加入2 mL无水乙醇溶解残留物和400 mg无水硫酸钠，涡旋5 min，再离心5 min，过0.22 μm的有机滤膜，溶液待测。

1.2.3 气相色谱条件

色谱柱：弱极性石英毛细管柱（60 m×0.25 mm，0.25 μm），柱固定液为苯基-甲基聚硅氧烷（5∶95，V/V）；进样口温度：220 ℃；进样量：1 μL；分流比：10∶1；检测器：氢火焰离子化检测器，温度为260 ℃；载气：氮气，纯度为99.99%，流量为

2.0 mL·min-1，尾吹流量为25 mL·min-1；氢气，流量为30 mL·min-1；空气，流量为300 mL·min-1。柱箱升温程序：在80 ℃保持1 min，以10.0 ℃·min-1升至120 ℃，然后以10.0 ℃·min-1升至120 ℃，再以20.0 ℃·min-1升至170 ℃，以12.0 ℃·min-1升至220 ℃保持1 min，以10.0 ℃·min-1升至250 ℃保持6 min。

2 结果与分析

2.1 色谱分析

参考1.2.3色谱条件将对羟基苯甲酸酯类对照混合溶液进行检测分析，对照品混合溶液中物质均完全分离，8种防腐剂（对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸苄酯和对羟基苯甲酸正庚酯）峰高、峰形均表现良好。

2.2 标准曲线

按照1.2.1的方法配制标准系列溶液，分别以峰面积和浓度为纵横轴，绘制标准曲线。结果显示，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸异丁酯、对羟基苯甲酸苄酯和对羟基苯甲酸正庚酯的标准曲线方程分别为Y=1.008 80X-0.407 69、Y=1.060 70X-0.486 63、Y=1.119 79X-0.424 02、Y=1.125 84X-0.553 36、Y=1.094 42X-0.770 20、Y=1.119 18X-0.443 41、Y=0.852 745X-0.706 31和Y=1.017 81X-0.453 71，相关系数均超过0.998。8种防腐剂在4～100 μg·mL-1内呈现良好的线性关系。

2.3 检出限与定量限

分别以3倍、10倍信噪比计算检出限、定量限，结果如表1所示。测得检出限在0.27～0.32 mg·kg-1，定量限在0.90～1.08 mg·kg-1。GB 5009.31—2016中规定，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯的方法检出限为0.6 mg·kg-1，定量限为2.0 mg·kg-1。本方法的检出限、定量限结果均低于该限值。

2.4 回收率和精密度

国标法和本方法样品前处理的氮吹过程分别取10 mL和5 mL待测样，为确保两种方法待测液的浓度一致，国标法在10、20、100 mg·kg-1的3个水平下进行加标，而本方法则在20、40、200 mg·kg-1的3个水平下进行加标，每个水平平行测定6次，两种方法的加标回收实验结果见表2。国标法的加标回收率在66.80%～74.86%，相对标准偏差（Relative Standard Deviation，RSD）在0.36%～4.30%。本方法的加标回收率在90.26%～98.25%，RSD在0.21%～1.77%，优于国标方法。

3 结论

本文建立了检测酱油中对羟基苯甲酸酯类防腐剂的方法。本方法线性良好，前处理简便，可检测的防腐剂种类较多，检出限、定量限、加标回收率和精密度结果均优于GB 5009.31—2016中方法。该方法简化了酱油中对羟基苯甲酸酯类防腐剂的检验检测流程，可为未来的食品监管工作提供更为便捷的技术支持。

参考文献

[1]吕稳，张静雅，胡贝，等.气相色谱-质谱法测定化妆品中苯甲酸酯类和对羟基苯甲酸酯类16种防腐剂[J].日用化学工业（中英文），2023，53（2）：239-244.

[2]SHARFALDDIN A，DAVAASUREN B，EMWAS A H，et al.Single crystal， Hirshfeld surface and theoretical analysis of methyl 4-hydroxybenzoate， a common cosmetic， drug and food preservative：experiment versus theory[J].PloS one，2020，15（10）：e0239200.

[3]魏一婷，吴媛，丁琳，等.高效液相色谱-串联质谱法测定调味品中7种对羟基苯甲酸酯类防腐剂及其水平调查[J].分析科学学报，2023，39（5）：612-617.

[4]张祝燕.工作场所空气中乙醚的溶剂解析-气相色谱法[J].造纸装备及材料，2021，50（2）：106-108.

[5]国家卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准 食品中对羟基苯甲酸酯类的测定：GB 5009.31—2016[S].北京：中国标准出版社，2016.