非小细胞肺癌术后自身抗体水平及临床意义

[摘要]"目的"探讨非小细胞肺癌（non-small"cell"lung"cancer，NSCLC）患者手术前后肿瘤相关7项自身抗体（tumor-associated"autoantibody，TAAB），包括肿瘤蛋白53（tumor"protein"53，p53）、蛋白基因产物9.5（protein"gene"product"9."5，PGP9.5）、性别决定基因家族"2（SRY-box"containing"gene"2，SOX2）、G抗原7（G"antigen"7"ATP-dependent"RNA"helicase，GAGE7）、ATP结合RNA"解螺旋酶（ATP-dependent"RNA"helicase，GBU4-5）、人黑色素瘤抗原"A1（melanoma"antigen"A1，MAGE"A1）、肿瘤/睾丸抗原（cancer/testis"antigen，CAGE）表达水平动态变化的临床意义。方法"选取2019"年1"月至2022"年8"月在宁波市医疗中心李惠利医院胸外科接受手术治疗的NSCLC患者41"例，采用酶联免疫吸附法（enzyme"linked"immunosorbent"assay，ELISA）检测患者血清7"项TAAB表达水平。结果"鳞癌组PGP9.5手术前后表达水平均明显高于腺癌组（Plt;0.05），腺癌组GAGE7手术前后表达水平均明显高于鳞癌组（Plt;0.05）。鳞癌组术后1周GBU4-5表达水平明显高于腺癌组（Z=-2.095，P=0.036）。腺癌组内，术后1周GBU4-5（P=0.027）、CAGE（P=0.042）表达水平较术前明显下降。术后6个月PGP9.5（P=0.004）、GAGE7（Plt;0.001）、GBU4-5（P=0.014）表达水平较术前明显下降。鳞癌组中，术后1周表达水平差异均无统计学意义（Pgt;0.05）。术后6个月SOX2（P=0.011）表达水平较术前明显下降。与术前比较，术后1周GBU4-5表达水平明显下降（P=0.009）。术后6个月PGP9.5（P=0.003）、GAGE7（P=0.001）、GBU4-5（P=0.013）表达水平明显下降。结论"手术干预可降低NSCLC患者7"项TAAB表达水平，手术治疗前后监测7"项TAAB有助于NSCLC患者手术疗效的评估和术后病情进展的预测。

[关键词]"非小细胞肺癌；肿瘤相关自身抗体；肺切除术；预测

[中图分类号]"R734.2""""""[文献标识码]"A""""""[DOI]"10.3969/j.issn.1673-9701.2024.23.004

Postoperative"autoantibody"levels"and"clinical"significance"in"non-small"cell"lung"cancer

WANG"Zeyi，"MU"Yinyu，"Xie"Fuyi

Laboratory"Department，"Ningbo"Medical"Center，"Li"Huili"Hospital，"Ningbo"315040，"Zhejiang，"China

[Abstract]"Objective"To"investigate"the"clinical"significance"of"dynamic"changes"in"the"expression"levels"of"tumor"associated"autoantibody"（TAAB），"including"tumor"protein"53"（p53），"protein"gene"product"9.5"（PGP9.5），"SRY-box"containing"gene"2"（SOX2），"G"antigennbsp;7"ATP-dependent"RNA"helicase"（GAGE7），"ATP-dependent"RNA"helicase"（GBU4-5），"melanoma"antigen"A1"（MAGE"A1），"cancer/testis"antigen"（CAGE）"in"non-small"cell"lung"cancer"（NSCLC）"patients"before"and"after"surgery."Methods"Forty-one"patients"with"NSCLC"who"underwent"surgical"treatment"at"the"Department"of"Thoracic"Surgery"of"Li"Huili"Hospital，"Ningbo"Medical"Center，"were"selected"from"January"2019"to"August"2022."Enzyme"linked"immunosorbent"assay"（ELISA）"was"used"to"detect"the"expression"levels"of"seven"TAAB"markers"in"the"serum"of"41"NSCLC"patients"undergoing"surgical"treatment."Results"The"expression"levels"of"PGP9.5"were"found"to"be"significantly"higher"in"the"squamous"cancer"group"than"in"the"adenocarcinoma"group"（Plt;0.05），"while"the"expression"levels"of"GAGE7"were"found"to"be"significantly"higher"in"the"adenocarcinoma"group"than"in"the"squamous"cancer"group"（Plt;0.05）."The"expression"level"of"GBU4-5"was"found"to"be"significantly"higher"in"the"squamous"carcinoma"group"than"in"the"adenocarcinoma"group"at"one"week"after"surgery"（Z=-2.095，"P=0.036）."Within"the"adenocarcinoma"group，"the"expression"levels"of"GBU4-5"（P=0.027）"and"CAGE"（P=0.042）"were"found"to"be"significantly"lower"at"one"week"after"surgery"compared"with"those"before"surgery."The"expression"levels"of"PGP9.5"（P=0.004），"GAGE7"（Plt;0.001），"and"GBU4-5"（P=0.014）"were"found"to"have"decreased"significantly"at"six"months"postoperatively"in"comparison"to"their"preoperative"levels."In"the"squamous"cancer"group，"no"statistically"significant"differences"were"observed"in"the"expression"levels"at"one"week"after"surgery."The"expression"level"of"SOX2"（P=0.011）"exhibited"a"statistically"significant"decrease"at"six"months"postoperatively"in"comparison"to"the"preoperative"levels."Similarly，"the"expression"level"of"GBU4-5"was"found"to"be"significantly"decreased"at"one"week"postoperatively"in"comparison"to"the"preoperative"levels"（P=0.009）."The"expression"levels"of"PGP9.5"（P=0.003），"GAGE7"（P=0.001），"and"GBU4-5"（P=0.013）"were"found"to"have"decreased"significantly"at"six"months"postoperatively."Conclusion"Surgical"intervention"can"reduce"the"expression"level"of"7"TAABs"in"NSCLC"patients."Monitoring"7"TAABs"before"and"after"surgical"treatment"is"helpful"to"predict"the"surgical"efficacy"and"postoperative"disease"progression"of"NSCLC"patients.

[Key"words]"Non-small"cell"lung"cancer;"Tumor-associated"autoantibodies;"Pneumonectomy;"Forecasting

随着非小细胞肺癌（non-small"cell"lung"cancer，NSCLC）早期诊断率的提高和治疗方式的发展，早期NSCLC患者的生存质量得到有效提高[1]。肺叶切除术合并系统性淋巴结清扫是目前NSCLC的主要治疗方式，术后主要通过测定肺功能、是否出现肿瘤相关并发症和复发等宏观指标判断手术疗效，导致干预过晚、治疗不及时等情况影响预后[2-4]。因此，如何对手术患者进行及时有效的疗效评估，已成为现在NSCLC治疗的关键。随着对于肿瘤细胞产生和释放的肿瘤相关抗原的研究发现，在NSCLC早期出现的过表达等异常表现能通过免疫系统的放大作用产生大量肿瘤相关自身抗体（tumor-associated"autoantibody，TAAB），并先于临床症状和影像学变化出现[5-8]。由于这些TAAB具有记忆免疫效应、半衰期长、检测方便等特点，有望成为评价手术治疗前后机体免疫功能的检测指标，实现对于手术疗效的评估和癌症进展的预测。已有研究认为肿瘤相关TAAB的产生与肿瘤患者免疫系统的高反应性和免疫监测能力相关，p53、PGP9.5、SOX2、GBU4-5、MAGE"A1、CAGE和GAGE7的联合检测在肺癌的早期诊断和晚期肺癌免疫治疗疗效预测等方面受到关注[9]。目前关于肿瘤切除前后机体内TAAB的变化情况的研究国内外报道较少。本研究旨在通过监测手术治疗前后血清肿瘤7"项TAAB的表达水平，发现其变化规律并探讨其临床意义，为临床治疗方式的选择提供一定的理论依据，并指导围术期的患者管理及术后康复方案的制定。

1""资料与方法

1.1""一般资料

回顾性收集2019"年1月至2022年8月在宁波市医疗中心李惠利医院接受手术治疗的NSCLC患者41"例。其中，男26例，女15"例，年龄46～79岁。15例患者在气管插管全身麻醉下行胸腔镜下肺叶（段）切除术+淋巴结活检术。26例患者行胸腔镜下肺叶（段）切除术+淋巴结活检术后联合辅助治疗。纳入标准：①符合美国国家综合癌症网络（National"Comprehensive"Cancer"Network，NCCN）指南[10]关于NSCLC的诊断标准；②术前7"项TAAB均为阳性；③术前未进行新辅助治疗；④接受根治性肺切除术及淋巴结清扫。排除标准：①非新发性NSCLC者；②肺转移瘤者；③TNM分期不明确者；④合并心、肝、肾等功能异常和已明确NSCLC有远处转移，不适合手术治疗者。最终随访日期截止2023"年12"月17"日。本研究已通过笔者医院伦理委员会审核批准（伦理审批号：KY2022PJ031）。

1.2""仪器与试剂

酶标仪（ST360，上海科华生物科技有限公司）；ELISA法试剂盒检测（批号：20211201，中国杭州凯保罗），实验过程严格按照试剂及仪器制造商的说明书进行。

1.3""标本处理及检测方法

采集5ml静脉血置于促凝管（浙江拱东医疗器械有限公司），以1370"g离心10"min。血清分离后8"h内检测7"项TAAB表达水平，若未能立即检测时，需将血清置于-20℃环境下冷冻保存，于1"周内检测。

1.4""统计学方法

采用SPSS"25.0统计学软件对数据进行处理分析，不符合正态分布的数据以中位数（四分位间距）[M（Q1，Q3）]表示，组间比较采用非参数检验，治疗前后比较采用配对秩和检验。以Plt;0.05为差异有统计学意义。

2""结果

2.1""NSCLC患者临床特征

术后病理结果显示，腺癌25"例（61.0%），鳞癌16"例（39.0%）。原位癌1例（2.4%），Ⅰ期29例（70.8%），Ⅱ期5例（12.2%），Ⅲ期5例（12.2%），Ⅳ期1例（2.4%）。

2.2""不同病理类型与7"项TAAB动态表达水平

鳞癌组PGP9.5术前、术后1周、术后6个月表达水平均明显高于腺癌组（Plt;0.05）。腺癌组GAGE7术前、术后1周、术后6个月表达水平均明显高于鳞癌组（Plt;0.05）。鳞癌组术后1周GBU4-5表达水平明显高于腺癌组（Z=-2.095，P=0.036）。在腺癌组中，与术前比较，术后1周GBU4-5（P=0.027）、CAGE（P=0.042）表达水平明显下降。术后6个月PGP9.5（P=0.004）、GAGE7（Plt;0.001）、GBU4-5（P=0.014）表达水平明显下降。在鳞癌组中，与术前比较，术后1周表达水平差异均无统计学意义（Pgt;0.05）。术后6个月SOX2表达水平明显下降，差异有统计学意义（P=0.011）。见表1。

2.3""NSCLC患者TAAB表达水平比较

41"例患者术前与术后1"周、术后6个月比较7项TAAB水平，与术前比较，术后1周GBU4-5表达水平明显下降（P=0.009）。术后6个月PGP9.5（P=0.003）、GAGE7（P=0.001）、GBU4-5（P=0.013）表达水平明显下降，差异有统计学意义（Plt;0.05），见表2。

3""讨论

随着早期诊断率的提高和手术方式的发展，NSCLC的发展有所控制，但肺癌的诊断率和病死率仍高居癌症相关死亡的首位，患者术后存在复发转移或出现第二原发肿瘤的风险[12-13]。本研究通过监测早期NSCLC患者手术前后血清7项TAAB表达水平，探讨其对早期NSCLC患者手术治疗反应的评估价值。

本研究鳞癌组手术前后PGP9.5的表达水平始终高于腺癌组。癌症的发生可能与过度表达的PGP9.5增加了细胞蛋白的去泛素化有关。相关研究证实，PGP9.5高表达更容易在鳞状细胞癌中出现[14-15]。这与本研究结果基本相符。本研究腺癌组手术前后血清GAGE7表达水平均高于鳞癌组。相关研究发现GAGE7在多种腺癌中高表达且与不良预后相关，但与食管鳞癌结局无相关性[16-17]。这提示GAGE7可作为肺腺癌的标志物GBU4-5有望成为NSCLC治疗靶点[18]。Zhang等[19]研究显示，GBU4-5在肺腺癌组中呈现明显高表达，与鳞癌组比较，差异有统计学意义。本研究术前GBU4-5表达水平在不同病理类型中差异无统计学意义，这与Wang等[20]的结果相一致。可能是由于NSCLC病理的异质性导致的。而在本研究中，术后1周鳞癌组GBU4-5表达水平明显高于腺癌组。这可能与不同病理类型对手术治疗的反应不同有关，也可能与患者对于手术治疗的个体性差异有关。本研究这几个指标在不同病理类型的NSCLC患者手术前后表达情况也存在明显变化，说明在不同病理类型NSCLC患者中PGP9.5、GBU4-5和GAGE7的表达对手术治疗反应存在预测价值，尤其在腺癌中评估表现良好。

李曼[5]等的研究表明，NSCLC细胞的增殖分化促进了肿瘤7项TAAB的合成和释放，因此术前血清肿瘤7项TAAB的高表达水平可能与肺癌的发生密切相关。手术治疗较好地去除了原发病灶，降低了机体免疫反应，因此术后TAAB表达水平通常下降[22]。这与本研究监测手术前后血清PGP9.5、GAGE7、GBU4-5的变化规律较为一致。但本研究血清p53、SOX2、MAGE"A1、CAGE表达水平的变化差异无统计学意义，这与靳海龙等[21]研究结果一致，原因可能是在手术治疗过程中，相关抗原的间断性入血持续，相关抗原编码基因的差异化变异导致不同构型抗原的出现影响机体的免疫应答等。此外，Tan等[23]在关于自身抗体对肿瘤患者抗PD1治疗反应的相关研究中发现，在肺腺泡状软组织肉瘤（alveolar"soft"part"sarcoma，ASPS）患者中，p53对抗PD1的治疗反应存在良好相关性。而在NSCLC患者中，治疗前后不同时间点的SIX2蛋白浓度在抗PD1无应答者表达水平明显高于应答者。也有研究表明，癌胚抗原（carcinoembryonic"antigen，"CEA）和细胞角蛋白19片段（cytokeratin"19"fragment，CYFRA21-1）对晚期NSCLC患者全身性治疗的预测表现良好[24]。而本研究通过监测术后1周和术后6个月PGP9.5、GAGE7、GBU4-5表达水平发现，这几个指标的动态变化差异有统计学意义，这可能与部分患者机体免疫功能状态逐步恢复及术后进一步的辅助治疗相关。因此，7项TAAB可作为潜在的早期NSCLC患者手术治疗疗效评估的标志物，能够为患者争取到更早、更安全治疗。由于是本研究是受试者数量相对较少的回顾性分析，患者来自同一单位，因此可能存在选择偏移。后续可采用多中心大样本量的前瞻性研究验证。

综上所述，通过监测手术前后7"项TAAB表达水平，可以判断手术治疗后病情是否进展，为治疗方案的选择和NSCLC患者预后提供有效证据，具有一定的临床应用价值。

利益冲突：所有作者均声明不存在利益冲突。

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（收稿日期：2024–01–09）

（修回日期：2024–05–31）

（上接第11页）

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（收稿日期：2023–12–01）

（修回日期：2024–06–11）