黄榆痔疾洗剂制备工艺研究

【摘 要】 目的：优选黄榆痔疾洗剂的制备工艺。方法：采用HPLC法测定黄榆痔疾洗剂盐酸小檗碱的含量，以含量和干膏率为评价指标，通过正交设计考察黄榆痔疾洗剂的煎煮时间、加水量、煎煮次数，优选黄榆痔疾洗剂的最佳煎煮工艺；

同时对黄榆痔疾洗剂进行了浓缩工艺、纯化工艺和成型工艺的考察。结果：黄榆痔疾洗剂的最佳煎煮工艺为加水三次，每次加6倍水，各煎煮1 h；浓缩采用减压或常压浓缩方式，离心除杂纯化转速5000 r·min-1，成型工艺加入0.3%的苯甲酸钠获得黄榆痔疾洗剂的最佳制备工艺。结论：优选的制备工艺简单可行，具备科学性，可适用于工业化生产。

【关键词】 黄榆痔疾洗剂；制备工艺；盐酸小檗碱

【中图分类号】R283

【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2024）20-0061-06

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.20.zgmzmjyyzz202420013

Study on Preparation Technology of Huangyu Zhiji Lotion

PAN Haihua1 LI Zhiyong3 DENG Guizhu1，2* ZHANG Jianjun3 GUO Cai e1 ZHOU Guoyan1

1.Qingyuan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Qingyuan 511500，China;

2.Engineering Technology Research Center of Fresh Medicine and National Medicine of Guangdong Province，Qingyuan 511500，China;

3.Guangdong Institute of Traditional Chinese Medicine Engineering Technology，Guangzhou 510095，China

Abstract：Objective To optimize the preparation process of Huangyu Zhiji Lotion.Method The content of berberine hydrochloride in Huangyu Zhiji Lotion was determined by HPLC.Taking the content and dry paste rate as evaluation indexes，the decocting time，water addition and decocting times of Huangyu Zhiji Lotion were investigated by orthogonal design，and the best decocting process of Huangyu Zhiji Lotion was optimized.At the same time，the concentration process，purification process and molding process of Huangyu Zhiji Lotion were investigated.Result The best decocting process of Huangyu Zhiji Lotion is to add water for three times，add 6 times of water each time，and decoct for 1 hour each time;Concentrating under reduced pressure or normal pressure，centrifugal impurity removal and purification speed of 5000 r·min-1，and adding 0.3% sodium benzoate to the molding process，the best preparation technology of Huangyu Zhiji Lotion was obtained.Conclusion The optimized preparation process is simple，feasible，scientific and suitable for industrial production.

Keywords：Huangyu Zhiji Lotion；Preparation Technology；Berberine Hydrochloride

痔疮是一种发病率极高的肛肠疾病，在我国成年人中痔疮发病率高达50.10%［1］。其发病原因往往与饮食习惯改变、生活习惯不良等相关［2］，痔疮的症状一般表现为肛门瘙痒、肛门灼热疼痛等，严重的还会伴有大便出血、内痔脱垂等，严重影响患者的生活质量［3］。现代中医辨证分型将痔分为风伤肠络型、湿热下注型、气滞血瘀型、脾虚气陷型四种［4］。在近30年的我国痔疮治疗研究中，治疗方式上更倾向于我国传统的中医疗法和中草药的使用［5］。而传统的中医疗法以外治法为主，中医外治法不仅可以减少药物内服对胃肠道的不良反应，还能快速精准的直接作用于患处，常用外治疗法包括熏洗、药物贴敷等。

我院黄榆痔疾方用于痔疮属湿热下注证，原处方煎汤外洗，临床疗效较好，但存在煎煮、携带和使用不便的缺点。在中药外用制剂中，洗剂具有顺应性好，可避免频繁给药，促进药物吸收，提高生物利用度的优点，非常适合医疗机构制剂生产。因此本处方选择制备成洗剂，现对其制备、浓缩、纯化、成型工艺进行研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；XS205型1/10万电子天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；TP-114型分析天平（深圳市君达时代仪器有限公司）；RE-2000A 旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；DHG 9023A型电热恒温干燥箱（上海精宏实验设备），TG16-WS型高速台式离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）。

1.2 试药 盐酸小檗碱对照品（批号：110713-201212，纯度91.0%，中国食品药品检定研究院）；所有药材均购自广东众康药业有限公司，经郭彩娥主任中药师鉴定均符合《中华人民共和国药典》2015年版一部各项规定；黄榆痔疾洗剂成品（批准文号：粤药制字Z20220006;批号：202308081）；甲醇（色谱纯，广州化学试剂厂）；甲醇（分析纯，广州化学试剂厂）；乙腈（色谱纯，广州化学试剂厂）；磷酸（色谱纯，上海麦克林生化科技有限公司），超纯水（广州屈臣氏食品饮料有限公司）；其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 盐酸小檗碱测定方法建立

2.1.1 盐酸小檗碱色谱条件 色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.1%磷酸（40∶60） （每100 g含十二烷基磺酸钠0.1 g）；柱温25 ℃；1 mL/min流速；检测波长为345 nm，理论塔板数按盐酸小檗碱计不低于4000。

2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品适量，置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀滤过，取续滤液，即得每1 mL含248 μg的盐酸小檗碱对照品储备溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备 按处方比例，称取黄柏等十五味饮片共计285 g，加10倍量水煎煮二次，每次1 h，滤过，合并，滤液浓缩并定容至500 mL。精密吸取浓缩液2 mL，置25 mL量瓶中，加入甲醇20 mL，超声处理30 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例，称取除黄柏外的其他饮片255 g，加水煎煮二次，每次加10倍量水，煎煮1 h，滤过，合并滤液，常压浓缩并定容至500 mL量瓶中，精密吸取浓缩液2 mL，照“2.1.3”项下供试品溶液的制备方法制得阴性对照溶液。

2.1.5 专属性考察 分别精密吸取对照品、供试品及阴性对照溶液，按“2.1.1”项下高效液相色谱条件进行测定，结果发现阴性对照图谱上没有对应的盐酸小檗碱的峰，表明无干扰，如图1所示。

2.2 正交试验优选煎煮工艺 采用正交试验法，以君药黄柏中盐酸小檗碱含量和干膏得率为评价指标，对影响煎煮的加水量、煎煮时间、煎煮次数进行优选，因素水平和正交设计试验安排及结果分别见表1和表2。

2.2.1 样品的制备 按处方比例，称取黄柏、苦参和桃仁等饮片9份，每份285 g，照表2中正交试验水平方案煎煮，滤过，合并，滤液浓缩并定容至500 mL。

2.2.2 干膏得率的测定 精密吸取各样品浓缩液20 mL，置干燥恒重的蒸发皿中，照干燥失重测定法（《中国药典》2015年版四部通则0831［6］103）测定，计算干膏得率。

计算公式：干膏得率%=［W/20xV/饮片重量］×100%。

其中W为20 mL浓缩液中干浸膏重量，V为定容体积。

2.2.3 标准曲线的绘制 分别精密吸取盐酸小檗碱对照品储备溶液0.5 mL、1 mL，2 mL、3 mL和4 mL置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，精密吸取10 μL，按“2.1.1”项下高效液相色谱条件进行测定，测得峰面积。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标作图。得标淮曲线的回归方程为Y=41.114X-66.161，相关系数r=0.9999。表明盐酸小檗碱在进样量124～992 ng之间线性关系良好。

2.2.3 浓缩液盐酸小檗碱的含量测定 精密吸取“2.2.1”项下的浓缩液2 mL，参照“2.1.3”项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下高效液相色谱条件进行测定，计算各浓缩液中盐酸小檗碱的含量。

2.2.4 数据处理与工艺优选 用综合加权评分法，以干膏得率和黄柏中盐酸小檗碱含量为指标，将各指标成分的总量分别转换为评分值，干膏得率的加权系数为0.4，盐酸小檗碱含量的加权系数为0.6，将每次试验的各指标成分评分值乘以相应的加权系数后求和计算综合评分值，以综合评分值进行正交试验分析和方差分析。结果表明，由直观分析可知各因素主次影响为：煎煮次数（A）>加水量（B）>煎煮时间（C），最佳工艺组合为A3B3C3。方差分析表明，与空白组相比较，因素A（煎煮次数）对试验结果有显著的影响;因素B（加水量）、因素C（煎煮时间）对试验结果无显著的影响，考虑到缩短生产周期，以及节能降耗等综合因素，故选择煎煮工艺为：A3B1C1，即加水煎煮三次，每次加6倍量水，煎煮1 h。见表2和表3。

2.2.5 最佳煎煮工艺条件验证 按处方比例称取饮片3份，每份285 g，按照优选工艺条件煎煮，滤过，合并滤液，浓缩并定容至500 mL，并按上述方法计算干膏得率及盐酸小檗碱含量，结果表明，三次平行试验的盐酸小檗碱含量平均为1.1935 mg/ mL，平均干浸膏得率为21.03%，综合评分的平均值为95.21，与正交试验综合评分最大值之间差异不大，提示所筛选的煎煮工艺条件基本稳定。见表4。

2.3 浓缩工艺的研究 本实验对比常压浓缩和减压浓缩工艺，以盐酸小檗碱保留率为评价指标，优选浓缩工艺。称取按照验证工艺条件煎煮的煎煮液二份，每份2000 g，分别采用常压浓缩和减压浓缩（真空度-0.085 MPa）进行浓缩，各浓缩液分别浓缩至约180 g，称定重量，分别测定盐酸小糪碱的含量，计算保留率。（盐酸小檗碱保留率=浓缩液中的盐酸小檗碱含量/煎煮液中的盐酸小檗碱含量×100%。）结果发现减压浓缩工艺的盐酸小檗碱保留率略高于常压浓缩工艺，二者之间无明显差异，可根据生产设备条件，选择常压浓缩或是减压浓缩。见表5。

2.4 纯化工艺考察

2.4.1 纯化方法的选择 取相当于饮片量427.5 g的浓缩液2份，分别采用离心除杂（依据实验设备参数及实验经验，选择转速：5000 r·min-1，离心时间15 min）和滤过除杂（200目），收集上清液，再分别加入芒硝30 g，加热煮沸并保温30 min，放冷，每份均加纯化水调整至600 mL，装入200 mL口服液体药用高密度聚乙烯瓶中（n=3），放置7 d，观察药液沉淀情况并测定药液总固物含量。结果表明，采用离心除杂与滤过除杂所产生的沉淀均可摇散，但离心除杂所产生的沉淀物量明品少于滤过除杂所产生的沉淀物量，因此，结合生产设备条件，确定本品的除杂方式采用离心除杂。见表6。

2.4.2 离心除杂工艺参数的确定 按处方比例称取饮片1140 g，照前述确定的工艺条件提取、浓缩，浓缩液均分为4份，分别在转速为3000 r·min-1、5000 r·min-1的条件下进行离心，收集上清液，再分别加入芒硝20 g，加热煮沸并保温30 min，放冷，每份均加纯化水调整至400 mL，装入200 mL口服液体药用高密度聚乙烯瓶中（n=2），放置7 d，观察药液沉淀情况并测定药液总固物含量。结果表明，2种转速除杂后的样品在放置7 d后，药液所产生的沉淀均可摇散。其中转速为5000 r·min-1的除杂效果稍优于3000 r·min-1。因此，确定本品离心除杂转数为5000 r·min-1。见表7。

2.5 成型工艺

2.5.1 防腐剂及其用量的选择 为了保证制剂的质量防止微生物生长繁殖，应加适量的防腐剂，本品药液PH值在4.3左右，因此可以选择苯甲酸钠作为防腐剂，并结合抑菌效力检查法（《中国药典》2015年版四部通则1121［6］151）进行用量选择。

2.5.2 供试品的制备 按处方比例称取饮片762.5 g，照前述优选的工艺条件提取、浓缩、除杂，加热至沸并保温30 min，放冷，加入纯化水定量至1000 mL，均分为10份，每份罐封于200 mL外用液体药用高密度聚乙烯瓶，作为供试品-1，备用。另按处方比例称取饮片762.5 g，照前述优选的工艺条件提取、浓缩、除杂，滤液加入苯甲酸钠1.5 g（0.15%），加热至沸并保温30 min，放冷，加入纯化水定量至1000 mL，均分为10份，每份罐封于200 mL外用液体药用高密度聚乙烯瓶中，作为供试品-2，备用。另按处方比例称取饮片762.5 g，照前述优选的工艺条件提取、浓缩、除杂，滤液加入苯甲酸钠3 g（0.3%），加热至沸并保温30 min，放冷，再加入纯化水定量至1000 mL，均分为10份，每份罐封于200 mL外用液体药用高密度聚乙烯瓶中，作为供试品-3，备用。

2.5.3 计数方法适用性试验 照抑菌效力检查法（《中国药典》2015年版四部通则1121［6］151）项下方法检查，结果发现3份供试品试验菌的回收率均不低于70%，表明培养基的适用性检查符合规定，见表8。

2.5.4 计数与结果 照抑菌效力检查法（《中国药典》2015年版四部通则1121［6］151）项下方法检查，测定样品的抑菌效力，结果发现苯甲酸钠为制成量的0.3%时，使用剂量及抑菌效力均符合有关规定，故确定加入苯甲酸钠的用量为制成量的0.3%，见表9。

2.6 制备工艺的确定 经过上述考察得到，黄榆痔疾洗剂的最佳煎煮工艺为加水三次，每次加6倍水，各煎煮1 h； 浓缩采用减压或常压浓缩方式，离心除杂纯化转速5000 r·min-1，成型工艺加入0.3%的苯甲酸钠获得黄榆痔疾洗剂的最佳制备工艺。制备工艺流程图和样品成品图如图2和图3所示。

3 讨论

黄榆痔疾外用方由黄柏、苦参和地榆等16味中药组成。黄柏为君药，小檗碱和黄柏碱为主要活性成分［7］。小檗碱具有抗炎、抗菌的作用，能促进内源性NO释放，介导肠粘膜微血管内皮依赖性舒张反应，改善肠道局部微循环［8］。本研究使用正交试验法优选黄榆痔疾洗剂的煎煮工艺，结果表明煎煮次数对试验结果影响明显，而加水量跟煎煮时间对试验结果影响不明显。王抒等［9］通过对红花等5种饮片在相同剂量煎煮后取汁与在相同体积煎煮后取汁发现，在剂量相等、品种不同的药材中，质地疏松容积大的饮片，煎煮后取汁量不一定少，即吸水量不一定大。本次试验结果分析原因可能是方中饮片吸水性不大，每次煎煮药液都能快速达到浓度平衡，故煎煮时间加长和增加加水量对结果基本没什么影响。通过测定总固物含量来优选纯化方式，试验结果表明离心纯化优于滤过除杂，适合工业化生产。

本研究以小檗碱和总固物含量作为考察指标，该研究方法专属性好，技术成熟，结果可靠，可满足提取考察工艺的需要。本研究不足之处，中药复方制剂成分复杂，采用小檗碱作为指标专属性好，但未对其他成分进行测定，评价指标过于单一，后期仍需对其他成分进行深入研究。

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（收稿日期：2024-02-01 编辑：杜玲玉珊）

基金项目：

作者简介：潘海华（1986—），男，汉族，本科，主管中药师，研究方向为中药制剂工艺研究与质量评价。E-mail：306136555@qq.com

通信作者：邓桂珠（1990—），女，汉族，硕士，主管中药师，研究方向为中药质量控制研究。E-mail：876456340@qq.com