ELISA法对梅毒螺旋体感染诊断作用分析

【摘要】目的：研析在临床诊断时，对梅毒螺旋体感染实施ELISA的诊断效果。方法：选取2021年1月—2023年12月收治的70例疑似梅毒螺旋体感染患者，均行ELISA和TRUST检测，比较两种检测方法的阳性率、特异性、灵敏度、阳性预测值以及阴性预测值，并对比梅毒螺旋体感染组和非梅毒螺旋体感染组IgM、IgG与IgA水平。结果：梅毒螺旋体感染组与非梅毒螺旋体感染组IgM、IgG与IgA水平比较均存在差异（P<0.05）；TRUST法与ELISA法阳性率、特异性、灵敏度、阳性预测值以及阴性预测值比较存在差异（P<0.05）。结论：在临床诊断时，对梅毒螺旋体感染实施ELISA是有诊断价值的。

【关键词】梅毒螺旋体感染；TRUST；ELISA；特异性；灵敏度；阳性率

Analysis of the diagnostic effect of ELISA on Treponema pallidum infection

ZHAO Rudi， ZHAO Kaiping

Pucheng County Maternal and Child Health and Family Planning Service Center， Weinan， Shaanxi 715500， China

【Abstract】Objective：To investigate the diagnostic effect of ELISA on Treponema pallidum infection in clinical diagnosis.Methods：70 suspected patients with Treponema pallidum infection admitted from January 2021 to December 2023 were selected and tested by ELISA and TRUST.The positive rate，specificity，sensitivity，positive predictive value and negative predictive value between the two detection methods were compared，and the IgM，IgG and IgA levels were compared between the Treponema pallidum infection group and the non Treponema pallidum infection group.Results：There were differences in the levels of IgM，IgG and IgA between the Treponema pallidum infection group and the non Treponema pallidum infection group （P<0.05）；There were differences in the positivz71LWUhEht5715Ztplt8mg==e rate，specificity，sensitivity， positive predictive value and negative predictive value between TRUST method and ELISA method （P<0.05）.Conclusion：ELISA is valuable in clinical diagnosis of Treponema pallidum infection.

【Key Words】Treponema pallidum infection； TRUST； ELISA； Specificity； Sensitivity； Positive rate

梅毒是一种由梅毒螺旋体引起的慢性传染病，是我国最常见的性传播疾病之一[1]。梅毒患者的临床症状不仅多种多样，而且由于梅毒的生物学特征呈螺旋状，因此梅毒没有直接的诊断方法[2]。目前，在医学中广泛使用的梅毒螺旋体检测方法主要分为两类：一种是病原体测试，另一类是血清学测试[3]。病原测试是针对病原体的直接监测，现在临床应用较少，而通过检测血液中的抗体来检测感染的血清学方法现在在临床实践中被广泛使用来检测梅毒螺旋体[4]。血清检查的实验过程更容易，对普遍筛查更有用，有些实验可以自动化。实验结果更稳定、更直观，可以作为梅毒诊断实验使用。实验结果具有更大的临床意义，不仅可以作为梅毒的诊断标准，还可以用于监测疗效、复发等。但是有很多血清学测试方法（TRUST、RPR、ELISA），需要找到一种更敏感、更有效的方法。本研究研析在临床诊断时，对梅毒螺旋体感染实施ELISA的诊断效果。

1 资料与方法

1.1基本资料

选取2021年1月—2023年12月收治的70例疑似梅毒螺旋体感染患者，年龄10～75岁，平均年龄（43.26±7.55）岁，男22例，女48例，最终确诊为梅毒螺旋体感染49例，非梅毒螺旋体感染21例。

1.2、研究方法

ELISA方法：采集所有人的血液，分离血清。

（1）包被抗原：抗原稀释（抗原+包被液，稀释比例根据实际情况），加稀释液每孔1～10μg，200μL，在37℃温箱进行孵育，时间为1h，然后放到4℃冰箱16～18h。

（2）洗涤：将尽板孔中的液体倒出，尽量倒干净，然后每孔都加满洗涤buffer，室温净值3min，重复3次，3次后将反应板倒置在吸水纸上，流尽孔中的洗涤液。每孔加入200μL封闭液，在37℃温箱进行孵育，时间为1h。洗涤同（2）。加被检血清：稀释被检血清，可以进行梯度稀释，每孔200μL。同时作阴性对照。在37℃温箱进行孵育，时间为2h。洗涤同（2）。每孔加200μL的辣根过氧化物酶羊抗兔IgG，在37℃温箱进行孵育，时间为1h。洗涤同（2）。加底物：每孔加200mL邻苯二胺溶液，室温反应10～15min。每孔加50μL终止液。

观察结果：使用酶免疫检测器记录490nm的读数。

结果：反应孔颜色越深，阳性程度越强。阴性反应是无色或很淡的。根据颜色的深浅，用“+”和“-”表示。OD值也可以在450nm（ABTS为410nm）下测量。空白对照孔置零后，测量每个孔的OD值。如果样品孔的OD值比阴性对照孔的OD值大2.1倍，则为阳性。

TRUST方法：采集静脉血3mL，立即分离血清。甲苯胺应与抗原混合，观察快速血清素反应后产生的凝集块。

1.3观察指标

比较两种检测方法的阳性率、特异性、灵敏度、阳性预测值以及阴性预测值，并对比梅毒螺旋体感染患者和非梅毒螺旋体感染患者IgM、IgG与IgA水平。

1.4统计学分析

采用SPSS 24.0统计学软件进行数据分析。计数资料采用（%）表示，进行x2检验，计量资料采用（x±s）表示，进行t检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两种检测方法阳性率比较

由表1计算的数据可知，与TRUST比较，ELISA检出阳性率更高（P<0.05）。

2.2两种检测方法特异性、灵敏度、阳性预测值及阴性预测值比较。

由表2计算的数据可知，与TRUST比较，ELISA特异性、灵敏度、阳性预测值及阴性预测值更高（P<0.05）。

2.3两组IgM、IgG与IgA对比

由表3计算的数据可知，相较于非梅毒螺旋体感染组，梅毒螺旋体感染组IgM、IgG、与IgA更高（P<0.05）。

3 讨论

梅毒是一种由梅毒螺旋体感染引起的疾病，主要通过性传播、血液传播、母婴和其他密切接触传播[5]。梅毒螺旋体是梅毒的致病因素，梅毒是一种性传播疾病（STD），其特征是血管周围炎症细胞浸润、血管渗漏、内皮细胞（EC）肿胀和增殖[6]。血管和淋巴管内壁的内皮是将体液与宿主组织分开的关键屏障，也是梅毒螺旋体的主要目标[7]。梅毒可对几乎所有人体组织和器官造成损伤和衰竭，引起许多症状和体征[8]；另一方面，梅毒可潜伏多年而无临床表现，只能在血清学检测中检测出来。无临床表现的隐性梅毒具有易被自身和医生忽视的隐性特点。潜伏性传播梅毒和胎儿传播先天性梅毒是近十年来梅毒发病率快速上升的重要原因。实验室梅毒筛查对梅毒的诊断至关重要，作为产前健康检查方案的一部分，实验室梅毒检查在预防先天性梅毒方面发挥着重要作用。

梅毒螺旋体非特异性抗体的常见实验室检测包括快速血浆反应素试验（RPR）和甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）。这些测试非常敏感，适合观察治疗效果（抗体滴度可以反映疾病进展）和确定复发或再感染的存在。梅毒螺旋体特异性抗体的常见实验室检测包括梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TPELISA）和梅毒螺旋体化学发光试验（TP-CLIA）。这些试验直接使用梅毒螺旋体作为抗原来检测特异性抗体的存在，具有很强的特异性，并用于确认实验。研究显示，（1）与TRUST比较，ELISA检出阳性率更高（P<0.05）。（2）与TRUST比较，ELISA特异性、灵敏度、阳性预测值与阴性预测值更高（P<0.05）。（3）与非梅毒螺旋体感染组比较，梅毒螺旋体感染组IgM、IgG与IgA更高（P<0.05）。TRUST使用心磷脂作为抗原检测梅毒抗体，揭示了这种方法导致假阳性的局限性。梅毒螺旋内部有脂类抗原，螺旋内或螺旋外各组之间有交叉反应，再加上使用肉眼观察，漏诊率高，特异性与灵敏度低，但TRUST方法简单易用，快速，价格低，适合检测大量样品，它被用于初级筛查检测，梅毒治疗和监测其有效性。然而，TRUST在出现硬下疳4周后才被检测到，这导致了较低的一期梅毒检出率，适合于二期梅毒的诊断。也容易受到假阳性的影响，用肉眼观察，产生主观判断，影响检测结果。

ELISA通过抗原和抗体的特定免疫反应将待测物与酶结合，然后与底物产生颜色反应进行定量测量，测定的对象可能是抗原或抗体。ELISA的基础是抗原或抗体的固化和抗原或抗体的酶标志。ELISA有更高的敏感度和特异性，可以同时进行多个抗体测试。这种方法比较简单，经常用于大规模筛查。由于酶的高催化效率，间接放大了免疫反应的结果，导致测量方法灵敏度高。ELISA在抗原或抗体在细胞或亚细胞水平的定位指示，或在微克甚至纳克水平的定量测量。ELISA的特异性是由于抗体或抗原的选择性，抗原与抗体的结合主要发生在抗原的抗原决定因子与抗体的抗原结合因子之间，由于它们互补的化学结构和空间构型抗原与抗体之间的反应具有高特异性。然而，ELISA的阳性结果无法区分先前的感染和现在的感染，因此诊断梅毒螺旋仍然需要结合临床多种方法。对梅毒的血清检查很重要，但并不是诊断梅毒的唯一基础，梅毒的诊断，除了分析检测结果，更重要的基础是详细了解患者的生活史和病史以及详细的医疗检查。在全面分析后，应作出明智的决定，以避免因梅毒检测结果呈假阳性而导致的误诊。

综上所述，在临床诊断时，对梅毒螺旋体感染实施ELISA的阳性率高，有较高的灵敏度和特异性，具有临床应用价值。

参考文献

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[8] 蒲癸宏，李美析，龚睿，等.尿素解离法纠正化学发光法检测梅毒螺旋体抗体假阳性结果的效能评价[J].中华实用诊断与治疗杂志，2022，36（7）：736-739.