血清学检测联合细胞学检测在高龄产妇产前诊断中的价值

【摘要】 目的：探讨血清学检测联合细胞学检测在高龄产妇产前诊断中的应用价值。方法：回顾性分析2022年4月—2023年4月深圳市第九人民医院收治的120例高龄产妇的临床资料。采用全自动时间分辨荧光免疫分析仪对产妇的血浆蛋白-A（PAPP-A）、β-人绒毛膜促性腺激素（β-hCG）、甲胎蛋白（AFP）及游离雌三醇（uE3）水平进行血清学检测，采用无创DNA进行细胞学检测。以羊膜穿刺后染色体检查结果为金标准，采用受试者操作特征（ROC）曲线评估两种检测手段对胎儿染色体异常的检测效能，并对妊娠结局进行随访。结果：120例产妇中，经染色体核型分析，胎儿染色体异常有32例。细胞学、血清学单独及联合检测胎儿染色体异常的AUC分别为0.882、0.878、0.952；敏感度分别为84.4%、81.2%、93.8%；特异度分别为92.0%、94.3%、96.6%。32例检测出胎儿染色体异常的孕妇中，30例选择引产，2例选择正常分娩，正常分娩胎儿为47，XXY和47，XYY。结论：血清学检测联合细胞学检测在高龄产妇产前诊断中具有重要价值，能有效提升诊断准确性，优化临床决策，对保障高龄产妇母婴健康具有重要意义。

【关键词】 血清学检测 细胞学检测 高龄产妇 产前诊断

The Value of Serological Test Combined with Cytological Test in Prenatal Diagnosis of Elderly Parturients/YIN Miaoxia， HU Xiaodi， ZHANG Zaohua， LIN Xiangrong. //Medical Innovation of China， 2024， 21（20）： -128

[Abstract] Objective： To explore the application value of serological test combined with cytological test in prenatal diagnosis of elderly parturients. Method： The clinical data of 120 elderly parturients admitted to the Ninth People's Hospital of Shenzhen from April 2022 to April 2023 were retrospectively analyzed. The levels of plasma protein-A （PAPP-A）， β-human chorionic gonadotrophin （β-hCG）， alpha-fetoprotein （AFP） and unconjugated estriol （uE3） in parturients were detected by fully automatic time-resolved fluoroimmunoassay instrument for serological test， and cytological test were performed by noninvasive DNA. The results of chromosome examination after amniocentesis as the gold standard， the detection efficiency of the two detection methods for fetal chromosome abnormality was evaluated by the receiver operating characteristic （ROC） curve， and the pregnancy outcome was followed up. Result： Among 120 parturients， 32 cases of fetal chromosomal abnormality were found by chromosome karyotype analysis. The AUC of cytology and serology alone and in combination were 0.882， 0.878 and 0.952， respectively， sensitivity was 84.4%， 81.2% and 93.8%， respectively， and the specificity was 92.0%， 94.3% and 96.6%， respectively. Of the 32 parturients in which fetal chromosomal abnormalities were detected， 30 chose to parturition induction and 2 chose normal delivery， with the normal delivery of the fetus 47， XXY and 47， XYY. Conclusion： Serological test combined with cytological test is of great value in the prenatal diagnosis of elderly parturients， which can effectively improve the diagnostic accuracy and optimize clinical decision-making， and is of great significance for protecting the health of mother and child in elderly parturients.

[Key words] Serological test Cytological test Elderly parturients Prenatal diagnosis

First-author's address： Department of Obstetrics， Longgang Central Hospital of Shenzhen， Shenzhen 518116， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2024.20.029

随着生育年龄的推迟，高龄产妇的数量逐年增加，高龄产妇由于激素水平、基础代谢率、免疫功能及卵巢储备的影响，其胎儿面临较高的遗传和染色体异常风险，如唐氏综合征（21-三体综合征）、爱德华兹综合征（18-三体综合征）和帕托综合征（13-三体综合征）等[1-2]。因此，高效和安全的产前诊断方法对于高龄产妇来说极其关键。传统的产前诊断技术如羊水穿刺和绒毛取样虽然诊断准确，但属于侵入性操作，存在一定的流产风险[3]。随着医学技术的发展，非侵入性产前检测逐渐流行，该技术通过分析孕妇外周血中的胎儿游离DNA来检测胎儿染色体的异常，大大降低了产前诊断的风险[4]。单独的血清学检测或细胞学检测各有优势，但也存在不足，如血清学检测的假阳性率相对较高，而细胞学检测则需要较高的技术设备和专业操作[5]。为了提高诊断的准确性和安全性，本研究通过联合这两种方法，探讨其在高龄产妇产前诊断中的综合效能。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2022年4月—2023年4月深圳市第九人民医院收治的120例高龄产妇的临床资料。（1）纳入标准：①单胎妊娠；②年龄36～40岁；③孕周11～16周。（2）排除标准：①存在器质性疾病；②精神紊乱、依从性差；③孕期存在吸烟、酗酒等不良生活方式。本研究经本院医学伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 染色体核型分析 无菌状态下抽取15 mL羊水后进行离心处理，分离并收集含有羊水细胞的细胞悬液。将收集的细胞悬液接种至无菌培养瓶中，加入4 mL羊水培养基，混合均匀后在37 ℃、5% CO2的培养箱中培养6～7 d；当细胞生长状态良好，出现许多小岛时，更换新鲜培养基（2 mL），并加入鸡血进行共培养24～48 h；当细菌生长旺盛，出现细胞克隆≥5个，并出现圆形细胞时，加入60 μL秋水仙素；倒出瓶中细胞上清液，加入EDTA-胰酶消化液，作用3～5 min，以去除细胞间连接并促进细胞脱离瓶壁；加入37 ℃、0.075 mol/L氯化钾溶液，置于37 ℃水浴箱内处理20 min，使细胞膜通透性增加，染色体得以膨胀、分离；随后加入新鲜配制的固定液，混匀后静置15 min，通过重复三次固定过程确保细胞内染色体结构稳定；弃上清液后，刮下贴壁细胞，收集至15 mL试管中吹打混匀后离心，弃上清，得到沉淀的细胞团；将细胞团滴于载玻片上制成细胞涂片，然后在65 ℃烤箱中烤过夜，使细胞涂片干燥并固定。采用Giemsa染色对烤好的玻片进行染色处理，将染色后的标本玻片放入全自动染色体扫描平台，从两个培养体系中采集图像，对每个样本计数20～30个细胞，分析其中5～7个细胞的核型。按照国际人类细胞遗传命名系统（ISCN），对染色体的数目、形态、结构等进行详细描述和记录。若发现染色体嵌合现象（即同一细胞群体中存在两种或多种不同的核型），则需加倍计数和分析细胞数，以准确反映嵌合体的存在和比例。

1.2.2 血清学检测 采集孕妇外周静脉血5 mL，不添加抗凝剂；将采血管放置在18～25 ℃环境中静置30 min，待血液自然凝固；随后以1 800 r/min的速度离心10 min，以分离血清。采用美国PerkinElmer公司生产的1235型全自动时间分辨荧光免疫分析仪进行检测。对孕早期孕妇行血浆蛋白-A（PAPP-A）与β-人绒毛膜促性腺激素（β-hCG）的二联测定，以评估胎儿罹患唐氏综合征等染色体异常的风险。对孕中期孕妇，行β-hCG、甲胎蛋白（AFP）与游离雌三醇（uE3）的检测，形成三联测定，进一步提高诊断准确性，覆盖更多类型的胎儿发育异常。

1.2.3 细胞学检测 细胞学检测采用无创DNA。采集孕妇外周血5 mL，4 ℃条件下，以1 600 r/min的速度离心10 min，分离出血浆，重复上述离心操作，去除残余细胞。抽取3 mL纯净血浆，置于离心管内，于-80 ℃低温保存。提取血浆中游离DNA，并在两端接上特定的接头，形成DNA文库。采用Illumina新一代测序技术进行测序，测序结果分析：某染色体含量（%Chr N）=某染色体唯一序列读取数/参考序列染色体N上基因组唯一序列总数，Z-score=（%Chr N检测样品- %Chr N对照组平均值）/S.D.%Chr N对照组。Z-score值≥3或≤-3，判定为非整倍体高风险标本，提示可能存在该染色体的数目异常（如三体或单体）；-3<Z-score值<3，判定为非整倍体低风险标本，表明该染色体数目大致正常，非整倍体风险较低。

1.3 观察指标

（1）以羊膜穿刺后染色体检查结果为金标准，评估血清学与细胞学两种检测方法的诊断效能。（2）妊娠结局随访：对受试者进行门诊或电话随访，记录妊娠结局及新生儿结局。

1.4 统计学处理

采用SPSS 23.0处理数据。计数资料以率（%）表示，绘制受试者操作特征（ROC）曲线进行效能检验的评估。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 染色体核型检测结果

120例羊水标本中，染色体异常有32例，异常检出率为26.67%，见表1。

2.2 诊断效能

细胞学、血清学及联合检测胎儿染色体异常的AUC分别为0.882、0.878、0.952；敏感度分别为84.4%、81.2%、93.8%；特异度分别为92.0%、94.3%、96.6%。见表2、图1。

2.3 随访结局

120例高龄产妇均完成随访，随访率为100%。32例检测出胎儿染色体异常的孕妇中，30例选择引产，2例选择正常分娩。分娩胎儿一例为47，XXY，一例为47，XYY，均足月分娩，截止产后3个月，新生儿发育正常。

3 讨论

高龄产妇面临着胎儿染色体异常概率增加、妊娠并发症风险上升、胎儿宫内生长受限与早产风险增加，以及分娩难度增加等问题[6-8]。血清标志物如PAPP-A、β-hCG、AFP及uE3的检测结合无创DNA分析，能够高效地评估胎儿潜在的染色体及遗传异常。联合应用血清学和细胞学检测的诊断策略不仅增强了临床检测结果的精确性，还通过减少侵入性程序，降低了相关的并发症风险。因此，此联合检测对于高龄产妇及其胎儿的健康管理是至关重要的，能够优化孕期监护，确保母婴健康。

本研究中，21-三体检出率为5.00%，与全球统计中高龄产妇的唐氏综合征发生率相符合[9]。唐氏综合征是最常见的染色体异常，对孕妇和家庭造成较大挑战。本研究中18-三体和13-三体检出率共3.33%，马海霞等[10]研究中高龄产妇24例染色体异常中包括7例21-三体，1例18-三体，虽低于21-三体，但仍需临床重视，尤其是在高龄产妇中[11-12]。性染色体数目异常可能导致多种发展性和生理问题，包括生殖发育异常[13]。染色体平衡异常与不平衡易位变异可能不引起智力或发育障碍，但可以导致生育问题或流产[14]。从各项指标来看，联合检测在诊断效能、敏感度、特异度方面均表现出显著优势，杜升烨等[15]研究表明，无创DNA联合血清学检测具有更高的准确度，本研究与之相符，可能是因为细胞学与血清学检测基于不同的生物标志物和检测原理。细胞学检测直接分析胎儿细胞的染色体结构与数目，适用于识别各种类型的染色体异常，包括非整倍体、大片段缺失/重复，以及某些微小结构变异[16-18]。血清学检测则是通过检测母体血清中与胎儿发育相关的生物标志物浓度，间接反映胎儿可能存在染色体异常的风险[19-20]。这两种方法在诊断信息上存在互补性，联合使用能够整合各自的优势，提高整体的诊断敏感度和特异度。血清学筛查作为一种初筛工具，可有效识别出大部分高风险孕妇，但其假阳性相对较高。对于血清学筛查高风险的孕妇，进一步采用细胞学检测进行确诊，既避免了对低风险孕妇进行不必要的侵入性操作，又确保了对真正异常病例的精确识别。反之，即使血清学筛查结果为低风险，对于高龄或其他高风险因素的孕妇，细胞学检测仍可作为补充手段，以防漏诊。本研究染色体异常的孕妇中，30例选择引产，2例选择正常分娩。是否分娩一方面取决于家长对不同类型染色体异常的了解和对其预后的认知。47，XXY和47，XYY虽属于性染色体非整倍体异常，但相对于一些严重致死或导致严重智力、身体障碍的染色体异常，其预后相对较好。47，XXY患儿通常表现为轻度到中度的学习困难、生长发育迟缓、男性特征不明显等，但多数患儿能够独立生活，部分症状可以通过早期干预和特殊教育得到改善[21]。47，XYY患儿可能出现身高偏高、学习困难、行为问题等，但总体预后也相对较佳[22]。家长在充分了解这些信息后，可能认为孩子的生活质量可以接受，从而选择继续妊娠。另一方面取决于心理承受与家庭条件。部分家长可能出于对新生命的期待、对家庭完整的渴望、对生命尊严的尊重，以及具备足够的心理准备和家庭、社会支持，愿意承担抚养具有染色体异常孩子的责任。因此本研究中有2例产妇选择分娩。

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（收稿日期：2024-05-28） （本文编辑：陈韵）