驱动蛋白家族成员26B在膀胱癌中的表达及与临床病理特征、预后的关系

卢保德 龙贤 黄勇平

基金项目：1.百色市科学研究与技术开发计划（编号：百科20213719）；2.右江民族医学院高层次人才科研项目（编号：R20196337）；3.右江民族医学院校级课题（编号：yy2019ky010）

作者简介：卢保德（1987.8-），男，广西隆安县人，硕士，主治医师，主要从事泌尿系肿瘤基础与临床研究

通讯作者：黄勇平（1968.5-），男，广西上林县人，本科，主任醫师，硕士生导师，主要从事膀胱癌的研究

摘要：目的  探讨驱动蛋白家族成员26B（KIF26B）在膀胱癌中的表达与临床病理特征及预后的关系。方法  从TCGA数据库下载膀胱癌RNA表达谱及临床数据，用R语言相关数据包分析KIF26B在膀胱癌中的表达水平及与临床病理、预后的关系。收集2019年5月-2021年6月在右江民族医学院附属医院接受手术治疗的60例膀胱癌及癌旁组织样本，采用qRT-PCR检测KIF26B在膀胱癌组织中的表达水平，分析KIF26B表达与临床病理特征的关系。结果  TCGA数据库中，膀胱癌组织KIF26B表达高于癌旁正常组织（P＜0.05），且KIF26B表达与膀胱癌的病理类型、肿瘤分级、T分期、AJCC分期有关（P＜0.05），与性别、年龄、肿瘤N分期、M分期无关（P＞0.05）；KIF26B高表达患者肿瘤特异性生存期和总生存期均低于KIF26B低表达者（P＜0.05）。60例膀胱癌组织中，膀胱癌组织KIF26B表达高于癌旁正常组织（P＜0.05），且KIF26B表达与膀胱癌肿瘤分级、T分期、N分期、和吸烟有关（P＜0.05），与性别、年龄、M分期无关（P＞0.05）。结论  KIF26B在膀胱癌中高表达，与膀胱癌的临床病理特征及预后相关。

关键词：膀胱癌；驱动蛋白家族成员26B；临床病理特征

中图分类号：R737.14                              文献标识码：A                                  DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.09.020

文章编号：1006-1959（2024）09-0107-05

Expression of Kinesin Family Member 26B in Bladder Cancer and its Relationship

with Clinicopathological Features and Prognosis

LU Bao-de，LONG Xian，HUANG Yong-ping

（Department of Urology，Affiliated Hospital of Youjiang University for Nationalities，Baise 533000，Guangxi，China）

Abstract：Objective  To investigate the expression of kinesin family member 26B （KIF26B） in bladder cancer and its relationship with clinicopathological features and prognosis.Methods  The RNA expression profile and clinical data of bladder cancer were downloaded from the TCGA database. The expression level of KIF26 B in bladder cancer and its relationship with clinicopathology and prognosis were analyzed by R language related data package. From May 2019 to June 2021， 60 cases of bladder cancer and adjacent tissue samples were collected from the Affiliated Hospital of Youjiang University for Nationalities. The expression level of KIF26B in bladder cancer tissues was detected by qRT-PCR， and the relationship between KIF26B expression and clinicopathological features was analyzed.Results  In TCGA database， the expression of KIF26B in bladder cancer tissues was higher than that in adjacent normal tissues（P<0.05）， and the expression of KIF26B was related to the pathological type， tumor grade， T stage and AJCC stage of bladder cancer （P<0.05）， but not to gender， age， tumor N stage and M stage（P>0.05）; the tumor-specific survival and overall survival of patients with high KIF26B expression were lower than those with low KIF26B expression （P<0.05）. In 60 cases of bladder cancer tissues， the expression of KIF26B in bladder cancer tissues was higher than that in adjacent normal tissues（P<0.05）， and the expression of KIF26B was related to tumor grade， T stage， N stage and smoking  （P<0.05）， but not to gender， age and M stage（P>0.05）.Conclusion  KIF26B is highly expressed in bladder cancer and is related to the clinicopathological features and prognosis of bladder cancer.

Key words：Bladder cancer;Kinesin family member 26B;Clinicopathological features

膀胱癌（bladder cancer）是泌尿外科常见的恶性肿瘤，具有发病率高、易复发的特点。世界范围内，膀胱癌的发病率在男性恶性肿瘤中排第4位，而死亡率排第8位[1]。在我国，膀胱癌发病率在全身恶性肿瘤中排第8位[2]。膀胱癌的治疗以手术为主，但复发率和进展率高，5年内复发患者比例占70%，而有10%～30%的患者进一步发展成为肌层浸润性尿路上皮癌，严重威胁人们的健康[3]。驱动蛋白家族成员26B（kinesin family member 26B， KIF26B）是驱动蛋白家族中的一名成员，具有ATP酶活性，在细胞生长、有丝分裂过程中发挥重要功能[4]。研究发现，KIF26B基因参与肿瘤的发生发展，被认为是乳腺癌[5]、胃癌[6]和肝细胞癌[7]的致癌基因，但KIF26B在膀胱癌中的作用报道较少。基于此，本研究通过生物信息学分析结合临床组织样本实验探讨KIF26B在膀胱癌中的表达水平，进一步分析其与膀胱癌临床病理特征及预后关系，以期为膀胱癌的诊治提供依据。

1资料与方法

1.1一般资料  从TCGA数据库中下载膀胱癌mRNA表达谱及临床数据，其中包含414例膀胱癌组织样本和19例正常组织样本，临床数据包括患者性别、年龄、病理、分期、分级、随访资料等。收集2019年5月-2021年6月在右江民族医学院附属医院接受手术治疗的60例新鲜膀胱癌组织样本，包括膀胱癌及癌旁组织，所有患者均经病理学确诊，术前均未进行过放疗或化疗。本研究获右江民族医学院附属医院伦理委员会批准并获得患者知情同意，且签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1主要试剂与仪器   Trizol（天根生化科技有限公司）；Green qPCR SuperMix 试剂盒（北京全式金生物有限公司）；引物设计合成（上海生工公司）；RNase inhibitor、dNTPs、氯仿、异丙醇、实时荧光定量PCR仪及冷冻离心机等。

1.2.2标本收集和RNA提取  新鲜肿瘤组织取材后立即放入液氮中，-80 ℃冰箱保存备用。低温保存的组织标本解冻后研磨成粉末，加入Trizol裂解组织，再加入氯仿后震荡12 000g离心15 min，将无色上清液转移至另一EP管，加入同体积异丙醇，混匀放置10 min后12 000 g离心15 min，去掉上清液，保留EP管底部白色沉淀，干燥4 min后加入DEPC H2O溶解沉淀，检测RNA浓度合格后，保留在-80 ℃冰箱备用。

1.2.3 qRT-PCR  先按照试剂盒说明书逆转录合成cDNA，-80 ℃保存。qPCR反应体系：SYBR Green I mix 5 μl，Primer-F 0.3 μl，Primer-R 0.3 μl，cDNA 0.2 μl，灭菌蒸馏水5 μl。KIF26B上游引物：5-GCTTCTCAGGCTGAAGTGTG-3，下游引物：5-GTAGGATTTTCCCAGTTTGGCGTGG-3；GAPDH上游引物：5-CCAGGTGGTCTCCTCTGA-3，下游引物：5-GCTGTAGCCAAATTCGTTGT-3。反应条件：94 ℃起始模板变性10 min，95 ℃变性5 s，60 ℃退火15 s，72 ℃延伸10 s，40个循环。用ImageJ软件进行亮度分析，GAPDH为内参照基因观察结果。

1.3统计学方法  采用R3.6.3和SPSS 23.0进行分析，计量资料以（x±s）或[M（P25，P75）]表示，采用t檢验或Mann-Whitney U检验；计数资料以[n（%）]表示，采用？字2检验。Kaplan-Meier法分析KIF26B表达与膀胱癌生存预后的关系，基于KIF26B表达的中位数为临界值，低于中位数为低表达组，高于中位数为高表达组，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1生物信息学分析KIF26B在膀胱癌中的表达与临床病理关系  在TCGA数据中，KIF26BmRNA在膀胱癌原发组织中的相对表达量为2.193（1.279，2.953），高于癌旁正常组织的0.591（0.397，1.168），差异有统计学意义（P＜0.05），见图1。KIF26B高表达组和低表达组病理类型、肿瘤分级、T分期、AJCC分期比较，差异有统计学意义（P＜0.05），而两组性别、年龄、肿瘤N分期、M分期比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

2.2临床组织样本验证KIF26B在膀胱癌中的表达与临床病理关系  膀胱癌组织中，KIF26B相对表达量为2.23（1.47，2.99），高于癌旁组织的1.56（1.35，1.77），差异有统计学意义（P＜0.05），见图2。进一步分析KIF26B与膀胱癌病理特征的关系发现，KIF26B高表达组和低表达组肿瘤分级、T分期、N分期、吸烟史比较，差异有统计学意义（P＜0.05），而两组性别、年龄、BMI、M分期比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

2.3 KIF26B在膀胱癌临床预后中的价值  基于TCGA数据库，Kaplan-Meier生存分析发现KIF26B高表达组肿瘤特异性生存期差于低表达组（HR=2.10，95%CI：1.30～3.40，P＝0.003），而KIF26B高表达组总生存期亦低于低表达组（HR=1.56，95%CI：1.08～2.25，P＝0.017），见图3。

3讨论

膀胱癌是我国泌尿外科最常见的恶性肿瘤，筛选膀胱癌早期诊断和预后的标志物对降低膀胱癌患者死亡率、改善预后具有重要意义。驱动蛋白家族是一类可与微管结合的分子马达蛋白，主要功能是参与细胞有丝分裂过程中纺锤体形成和细胞内物质运输，驱动蛋白家族许多成员与恶性肿瘤的发生发展有关，参与恶性肿瘤的增殖、侵袭、转移[8-11]。

KIF26B属于驱动蛋白家族成员之一，编码的蛋白由2108个氨基酸组成[12]。在小鼠胚胎发生模型中，KIF26B基因在小鼠四肢、面部和肾脏的发育过程中发挥着非常关键的调节作用[13]。此外，KIF26B对间充质细胞的粘附和极化有重要作用，被认为是Wnt5a/ROR信号通路的下游靶分子，其作用是调节细胞骨架，影响细胞的迁移、极化和粘附[14，15]。既往研究表明[16]，高表达KIF26B是各种癌症预后不良的一个指标，其与细胞增殖、迁移、侵袭甚至耐药密切相关。Liu Y等[17]研究发现，KIF26B在髓母细胞瘤中高表达于癌旁正常组织，其表达水平与髓母细胞瘤临床分期及预后不良有关，沉默KIF26B基因后，癌细胞增殖、迁移能力明显下降，其机制为通过激活PI3K/AKT通路促进肿瘤的恶性进展。Wang S等[18]研究发现，KIF26B在乳腺癌组织中表达上调，其高表达患者淋巴结转移、肿瘤分级等临床病理变量有关，KIF26B沉默降低了Wnt、β-连环蛋白和細胞周期相关蛋白的表达水平，同时增加了p27的表达。Chen N等[19]通过沉默KIF26B使AKT/GSK-3β介导的Wnt/β-catenin通路失活，减弱了非小细胞肺癌的恶性表型。Zhang H等[6]在胃癌中研究发现，KIF26B表达在正常胃粘膜、无转移的原发性胃癌组织、有转移的原发性胃癌组织到继发性淋巴结转移病灶组织中呈逐步上调趋势，KIF26B表达增加与肿瘤大小、淋巴结转移以及预后不良有关，认为KIF26B为一种新型癌基因，通过激活胃癌中的VEGF通路促进细胞增殖和转移。而目前关于KIF26B在膀胱癌中的作用未见相关报道。

本研究通过生物信息学分析KIF26B表达与膀胱癌的关系，结果发现KIF26B在膀胱癌中表达水平明显高于癌旁正常组织；另通过单因素分析KIF26B表达与膀胱癌临床病理的关系，结果发现KIF26B表达水平与病理类型、分级、T分期，AJCC分期有关，与患者性别、年龄、肿瘤N分期、M分期无关。膀胱癌病理类型主要包括尿路上皮癌、鳞癌和腺癌，鳞癌和腺癌等非尿路上皮癌比较少见，但恶性程度高于尿路上皮癌。本研究发现，KIF26B在非尿路上皮癌中的表达高于尿路上皮细胞癌，说明膀胱癌的病理类型恶性程度越高，KIF26B的表达越高，提示KIF26B高表达与预后不良有关。

为了对生物生物信息学结果进一步验证，本研究通过收集60例膀胱癌及癌旁组织进行试验验证，结果发现KIF26B在膀胱癌组织中表达水平高于癌旁组织，与生物信息学结果一致。同时研究发现，KIF26B表达与患者T分期、肿瘤分级相关，即KIF26B表达越高，预示着患者病理T分期和分级越高，患者预后更差，结果与TCGA数据库分析结果一致。此外，本研究还发现KIF26B表达与膀胱癌N分期、吸烟史呈正相关，而TCGA数据库研究结果未发现KIF26B表达与膀胱癌N分期有关，原因可能是纳入研究队列的病例数、人种、组织类型与TCGA数据库不同有关。进一步行生存分析发现，KIF26B高表达组肿瘤特异性生存期和总生存期差于低表达组，表明KIF26B高表达与较差的病理特征密切相关，容易导致预后不良。

综上所述，KIF26B在膀胱癌中表达升高，与患者临床病理T分期、分级密切相关，可作为膀胱癌预后不良的潜在标志物。本研究不足之处在于样本量偏小，可能存在结果偏倚，且仅进行临床样本验证，因此KIF26B在膀胱癌中的具体作用及机制仍有待下一步研究。

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收稿日期：2023-07-31；修回日期：2023-08-22

編辑/杜帆