余甘子提取物及其复配物改善大鼠的功能性消化不良症状

谭岸，王智诚，袁铭，胡浩，曹庸＊，温林凤＊

（1.华南农业大学食品学院，广东省功能食品活性物重点实验室，广东省天然活性物工程技术研究中心，广东广州 510642）（2.湖南伍星生物科技有限公司，湖南娄底 417700）

余甘子是一种药食同源的果实，国内外均有栽种，在中国主要分布于云南、福建、广东、广西等地，是中国南方地区的特色经济物种[1]。研究表明，余甘子含有黄酮、酚酸、鞣质和生物碱等活性物质，具有抗氧化、降血脂、抗溃疡、护肝和护胃等生物活性功能[2,3]。山楂是一种药食兼用的植物，广泛分布于亚洲、欧洲、中北美洲及南美洲的北部，我国主要有北方山楂和云贵高原云南山楂两大产区[4]。山楂中生物活性成分主要包括多糖、有机酸类、萜类、黄酮类及其衍生物，具有抗氧化、抗炎、提高免疫力、降脂、护肝、健胃消食等功效[5-7]。茯苓是一种重要的药食同源原料，常寄生于松科植物赤松和马尾松等植物的根上，主要化学成分多糖类、三萜类、二萜类、甾醇类以及其他类化合物[8]，具有抗衰老、镇静催眠、抗炎和利尿等多种生物活性功能[9]。白术是一种菊科药用植物，包含多糖类、倍半萜类、聚乙炔类等多种生物活性物质，具有保肝、抗菌抗炎、抗肿瘤、调节胃肠功能、调节免疫系统、调节神经系统、调节脂质代谢等生物活性功能[10,11]。陈皮是药食同源的宝贵原料之一，富含黄酮类化合物、挥发油、生物碱、微量元素等多种生物活性成分，具有抑菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、促消化、祛痰、保肝、降血压和神经保护等多种作用[12]。麦芽由禾本科一年生草本植物大麦的成熟果实经发芽干燥而得，是中医临床上常用的一味消食药，含有多种酶类及生物碱类化学成分，具有抗氧化、助消化、降血糖、护肝等作用[13]。

消化不良是由消化功效减弱、内部絮乱所引发的胃肠道不适的系统性疾病[14]。《伤寒杂病论》中指出消化不良是由于长期饮食不节制、暴饮暴食而出现的气机阻滞，并时常伴有的胃脘症状[15]。功能性消化不良（Functional Dyspepsia，FD）是一种常见的功能性胃肠道疾病，涉及胃肠道的胃十二指肠区，包括胃脘痛或灼烧感、餐后饱胀或早饱等症状[16-18]。已有研究表明多种配方对功能性消化不良具有改善作用，比如陈皮、山楂、半夏、党参、炙甘草等组成的药方[19]，陈皮、当归、厚朴等药材[20]。

目前，针对余甘子以及山楂、茯苓、白术、陈皮、麦芽等复配物对功能性消化不良症状的研究鲜见报道，且不同食物基质与生物活性物质相互作用对其功效可能产生一定影响。因此，本研究通过《保健食品功能检验与评价方法（2022 年版）》中的促进消化功能检验方法构建功能性消化不良小鼠模型，探讨余甘子及4 种复配物对功能性消化不良症状的改善作用，为开发食药两用资源以及功能性促消化食品提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

余甘子、山楂、茯苓、白术、陈皮、麦芽等提取物从西安三江生物工程有限公司购买获得，其提取部位分别为果实、果实、干燥菌核、根茎、果皮、种子，均采用热水浸提法提取，再对提取液进行浓缩、喷雾干燥获得提取物粉末样品。盐酸洛哌丁胺及多潘立酮为处方药，其余试剂均为国产分析纯试剂。

1.2 动物

六周龄雄性balb/c 小鼠（18～22 g），8 组，每组8 只；SD 大鼠（120～150 g），6 组，每组8 只；均从广东斯嘉景达生物科技有限公司（生产许可证号：SCXK (粤) 2020-0052）采购获得。动物饲养在华南农业大学实验动物中心，实验动物使用许可证号：SYXK (粤) 2019-0136。

1.3 仪器与设备

UV-1750PC 型紫外可见分光光度计，日本岛津仪器公司；ME204 型电子分析天平，上海梅特勒-托利多仪器公司；游标卡尺，美耐特；恒温培养箱，上海一恒科学仪器有限公司；真空干燥箱，上海一恒科学仪器有限公司。

1.4 方法

1.4.1 小肠运动实验

适应性喂养balb/c 小鼠一周，随机将其分为8 组，每组8 只。模型对照组用盐酸洛哌丁胺进行造模[21]。每日经口给予空白组、模型组小鼠0.2 mL蒸馏水/只，其余组别按照表1 提取物灌胃，灌胃30 d。实验结束前禁食不禁水16 h，于测定当天各实验组再给予一次受试样品，空白对照组和模型对照组给予蒸馏水。30 min 后各实验组和模型对照组给予洛哌丁胺（3 mg/kg，按体质量计），空白对照组给予蒸馏水。30 min 后各组给予0.6 mL 5%炭末半固体糊，30 min后处死动物。取幽门至盲肠部的整段小肠直铺于白纸上，测量记录小肠全长和幽门到黑色半固体糊前沿的距离，并计算小肠推进率[22]，计算公式（1）为：

表1 小鼠分组Table 1 Grouping of mice in each group

式中：

T——小肠推进率，%；

L1——半固体糊推进长度，cm；

L2——小肠总长度，cm。

1.4.2 胃排空率的测定

称量全胃质量（即胃内容物+胃组织质量），0.9%生理盐水洗去胃内容物后用滤纸吸干并称量空胃质量（即胃组织质量），胃排空率计算公式（2）为：

式中：

B——胃排空率，%；

m0——全胃质量，g；

m1——空胃质量，g。

1.4.3 大鼠体质量增重、摄食量、食物利用率实验

随机将大鼠分为空白组和余甘子以及复配提取物处理组共6 组（见表2），每组8 只，实验开始时对动物的体质量进行称重，其体质量差异应不高于动物平均体质量的10%。经口受试样品30 d，实验期间，需要每周对动物的体质量和食物摄入量进行称量和记录，实验结束后需要根据此前的记录来计算体质量、体质量增重、摄食量和食物利用率[23]，计算公式（3）为：

表2 大鼠分组Table 2 Grouping of rats in each group

式中：

U——食物利用率，%；

Δm——体质量增加量，g；

m——摄食量，g。

1.4.4 胃蛋白酶指标检测

按表2 方法进行分组及给药，实验结束时对所有大鼠采取禁食不禁水24 h 的处理方式，再用水合氯醛麻醉大鼠幽门结扎方法收集3 h 内排出的胃液，测定每小时胃液量。用内径1 mm，长100 mm的毛细玻璃管吸满新鲜鸡蛋清，置于热水中凝固鸡蛋清，即得蛋白管。取胃液1 mL 放入50 mL 的三角烧瓶中，加入0.05 mol/L 盐酸溶液15 mL 摇匀，放入新鲜制作的蛋白管两根。塞好瓶口，在37 ℃恒温箱中孵育24 h，取出蛋白管，用尺测量蛋白管两端透明部分的长度（mm），以四端之值求其平均值[24,25]。计算胃蛋白酶活性和胃蛋白酶排出量，计算公式（4、5）为：

式中：

D——胃蛋白酶活性，U/mL；

——四端蛋白管透明部分长度均值，mm；

E——胃蛋白酶排出量，U/h；

A——胃蛋白酶活性；

V——每小时胃液量。

1.5 统计学方法

实验数据均以平均值±标准差（Mean±SD）表示。多组间差异采用单因素方差分析（One Way Analysis of Variance，ANOVA）分析，数据分析软件为GraphPad Prism 8.0.2。P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果与讨论

2.1 提取物结果

对余甘子、山楂、陈皮、白术、茯苓、麦芽等原料的提取结果进行分析，其得率分别为25%、25%、25%、20%、5%、3%。上述6 种提取物检测结果表明，余甘子提取物中没食子酸和多酚分别为6.14%、17.33%，山楂提取物中枸橼酸3.87%，陈皮提取物中橙皮苷和总黄酮分别为0.76%、0.18%，白术、茯苓、麦芽3 种提取物中粗多糖分别为43.38%、25.84%和32.14%，此外，其水分含量分别为2.05%、2.46%、3.15%、4.10%、3.35%和2.95%。

2.2 样品对小鼠小肠运动的影响

胃肠运动是消化机体中重要的生理功能[26]，通过测定小肠运动功能可以评价消化功能状态[25]。

余甘子和四种复方对小鼠小肠运动功能的影响如图1 所示。图1a 中，与空白组76.49%相比，模型组小肠推进率39.96%下降了47.76%，具有显著性差异（P＜0.001），表明本实验的消化不良模型构建成功；与模型组相比，余甘子（单方组）66.33%，余甘子、山楂、茯苓和陈皮（复方1）72.14%，余甘子、山楂、白术和麦芽（复方2）83.08%，余甘子、山楂、茯苓、白术和陈皮（复方3）66.92%，余甘子、山楂、茯苓、白术、麦芽和陈皮（复方4）76.11%，阳性组80.84% 显著提高小肠推进率（P＜0.05），相对于模型组分别提高了65.99%、80.53%、107.91%、67.47%、90.47%、102.30%，表明余甘子及四种复方对模型小鼠的小肠运动率具有推进作用，其中复方2最突出，余甘子单方组和复方3 最弱。

图1 余甘子和四种复方对小鼠小肠运动功能的影响Fig.1 Effects of Phyllanthus emblica L and four kinds of complexes on small intestine movement in mice

已有研究表明胃排空延迟被认为是功能性消化不良的病理生理机制[27-29]。图1b 中，与空白组44.50%相比，模型组小鼠胃排空率27.08%下降了39.15%，具有显著性差异（P＜0.01）。与模型组相比，余甘子（单方组）33.58% 未见明显差异（P＞0.05），复方1（40.79%），复方2（41.62%），复方3（45.39%），复方4（51.34%），阳性组（42.49%）显著提高小肠胃排空率（P＜0.05），相对于模型组分别提高了50.63%、53.69%、67.61%、89.59%、56.91%，表明四种复方对模型小鼠的小肠胃排空率具有促进作用，其中复方4 最突出，复方2 和复方3 最弱。

2.3 样品对大鼠体质量、体质量增重、摄食量和食物利用率的影响

本研究连续灌胃给予大鼠余甘子单方及4 种复方30 d，通过测定摄食量、体质量增量、食物利用率评价单方和复方的促消化效果。结果如表3 所示，余甘子单方组、四种复方组对大鼠体质量和摄食量均无显著影响（P≥0.05），在食物利用率指标上，除复方4 外，其他4 组均无显著影响（P≥0.05），与空白组29.52%相比，复方4 食物利用率34.05%增加了15.35%（P＜0.05）。

表3 余甘子及复配提取物对大鼠体质量、体质量增重、摄食量和食物利用率的影响Table 3 Effects of Phyllanthus emblica L and four kinds of complexes on body weight,weight gain,food intake and food utilization in rats (X±S,n=8)

2.4 样品对大鼠胃蛋白酶活性、胃蛋白酶排出量的影响

食物在胃肠中进行消化与消化酶的消化和胃肠运动有关[30]，本研究通过测定胃蛋白酶活性和胃蛋白酶排出量来对比余甘子单方组和四种复方组的促消化效果[25]，结果如图2 所示。与空白组胃蛋白酶活性130.1 U/mL 和胃蛋白酶排出量65.03 U/h 相比，余甘子、山楂、茯苓和陈皮提取物（复方1）的胃蛋白酶活性208.7 U/mL 和胃蛋白酶排出量104.3 U/h 无显著性差异（P≥0.05），余甘子单方组246.2 U/mL，余甘子、山楂、白术和麦芽（复方2）264.2 U/mL，余甘子、山楂、茯苓、白术和陈皮（复方3）227.1 U/mL，余甘子、山楂、茯苓、白术、麦芽和陈皮（复方4）269.1 U/mL 胃蛋白酶活性显著增强（P＜0.05），分别增强了89.24%、103.07%、74.56%、106.84%；余甘子单方组123.1 U/h，复方2 组132.1 U/h，复方3 组 113.6 U/h，复方4 组134.6 U/h 胃蛋白酶活性显著增强（P＜0.05），分别增强了89.30%、103.14%、74.69%、106.98%，表明余甘子单方及复方2 组、复方3 组、复方4 组均能显著增强胃蛋白酶活性。

图2 余甘子和四种复方对大鼠胃蛋白酶活性（a）、胃蛋白酶排出量（b）的影响Fig.2 Effects of Phyllanthus emblica L and four kinds of compounds on pepsin activity (a),pepsin excretion (b) in rats

3 结论

本研究根据保健食品功效学研究中的促进消化功能方法测定了小鼠小肠运动、大鼠增重、摄食量、食物利用率、胃蛋白酶测定等指标，余甘子（单方组），余甘子、山楂、茯苓和陈皮（复方1 组），余甘子、山楂、白术和麦芽（复方2 组），余甘子、山楂、茯苓、白术和陈皮（复方3 组），余甘子、山楂、茯苓、白术、麦芽和陈皮（复方4 组）显著提高了小鼠小肠推进率（P＜0.05、P＜0.01、P＜0.000 1、P＜0.05、P＜0.001），除复方1 外，其他组均显著增强了胃蛋白酶活性和大鼠胃蛋白酶排出量（P＜0.01、P＜0.01、P＜0.05、P＜0.01）。此外，复方4 组显著增加了大鼠食物利用率（P＜0.05），说明余甘子及其复配物对功能性消化不良小鼠胃肠道运动具有促进作用。本研究通过对比余甘子及其复配物的促消化效果，为相关产品的开发提供了理论依据。