刍议活动性肺结核早期检验中半巢式全自动实时荧光定量PCR检测与涂片抗酸染色法的应用研究

咸丽

平邑县结核病防治所检验科，山东临沂 273300

肺结核是一种常见的慢性传染病，发病后多表现为咳嗽、咳痰≥2周、咳血或血痰是肺结核的主要局部症状[1]。近年来，由于医学科技的快速发展，肺结核的诊断方法日益增多，而痰培养是“金标准”，但由于该方法耗时较久，样本采集方法和操作气溶胶污染都可能对检验结果产生一定的干扰[2]。Xpert MTB/RIF检验、涂片抗酸染色法检验是活动性肺结核的常用诊断方法，Xpert MTB/RIF具有较高的检出率[3]。Xpert MTB/RIF检测周期短，自动化程度高，结核分枝杆菌灵敏度高，对活动性肺结核的早期诊断有较好的指导意义[4]。为评析Xpert MTB/RIF方法与涂片抗酸染色法在活动性肺结核早期检验中的有效性，本次研究选取2022年9月—2023年9月于平邑县结核病防治所就诊的90例疑似肺结核患者为研究对象开展调研。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择于本院就诊的90例疑似肺结核患者为研究对象，均提供半巢式全自动实时荧光定量PCR检测（Xpert MTB/RIF）、涂片抗酸染色法检验。其中，男61例，女29例；年龄28～78岁，平均（50.34±6.56）岁。研究经所医学伦理委员会批准同意（PYXJFSJY-2023-011）。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：均符合肺结核的诊断标准[5]；患者具有良好的沟通与表达能力；患者均自愿参与本次研究。排除标准：多器官功能障碍患者；合并传染性疾病患者；危重症患者；癌症患者。

1.3 方法

90例疑似肺结核患者，均提供Xpert MTB/RIF方法、涂片抗酸染色法检验。

半巢式全自动实时荧光定量PCR检测（Xpert MTB/RIF）：Xpert MTB/RIF反应盒及样品试剂（Sample Reagent, SR）均购自美国Cepheid公司。使用仪美科技生产的全自动实时荧光PCR仪（型号：GXIV-4N3-6）。在进行操作之前，将生物安全柜中的紫外线灯照射台面，时间为30 min。后启动生物安全柜，运行5 min后，检查安全柜的运行是否正常，使用乙醇浓度为75%进行台面消毒处理。准备相关材料，放置在生物安全柜中。在反应盒的侧壁和相应的处理管上标记痰液标本序号。采集痰标本放置在有螺旋盖的前处理管中，前处理管中添加相当于痰标本两倍体积的SR痰标本处理液。后将处理管的螺旋盖旋紧。生物安全柜中前处理管在涡旋振荡器上涡旋振荡。将前处理管中的痰液标本静温处置15 min，使痰液标本充分液化，静置10 min。如果出现细小块状以及未液化的标本，需要重复上述操作使其溶解。清洁台面，将反应盒移至扩增区，完成检测。

涂片抗酸染色法检验：采用乙醇脱脂处理，干燥清洁后备用。将承载痰标本的容器打开后，预防出现气溶胶以及标本外溢。将痰标本中的干酪样脓样以及可疑部分约0.05 mL在玻片的正面轻轻环状涂抹均匀，制作成痰膜。将制作完毕的痰膜静置在生物安全柜中自然干燥，后行染色处理。

1.4 观察指标

将痰培养法作为金标准，对比分析Xpert MTB/RIF检验、涂片抗酸染色法检验的阳性检出率=阳性例数/总例数×100%，阴性检出率=阴性例数/总例数×100%。

对比分析半巢式全自动实时荧光定量PCR检测（Xpert MTB/RIF）、涂片抗酸染色法检验的应用效能。灵敏度=真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）×100%。特异度=真阴性例数/（假阳性例数+真阴性例数）×100%。准确性=（真阳性例数+真阴性例数）/（假阳性例数+真阴性例数+真阳性例数+假阴性例数）×100%。阳性预测值=真阳性例数/（真阳性例数+假阳性例数）×100%。阴性预测值=真阴性例数/（假阴性例数+真阴性例数）×100%。

1.5 统计方法

使用SPSS 23.0统计学软件对数据资料处理分析，计数资料用例数（n）和率（%）表示，行χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对比分析Xpert MTB/RIF检验、涂片抗酸染色法检验的诊断结果

痰培养法显示，77例阳性（阳性率85.56%）、13例阴性（阴性率14.44%）。Xpert MTB/RIF方法检验76例阳性、14例阴性。涂片抗酸染色法检验44例阳性、46例阴性。见表1。

表1 对比分析Xpert MTB/RIF检验、涂片抗酸染色法检验的诊断结果（n）

2.2 对比分析Xpert MTB/RIF检验、涂片抗酸染色法检验的应用效能

Xpert MTB/RIF检验的灵敏度、准确度、阳性预测值以及阴性预测值均高于涂片抗酸染色法检验，差异有统计学意义（P均＜0.05）。Xpert MTB/RIF检验与涂片抗酸染色法检验特异度对比，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 对比分析Xpert MTB/RIF、涂片抗酸染色法检验的应用效能（%）

3 讨论

肺结核主要由结核分枝杆菌感染导致。肺结核的发病率逐年升高，如果得不到及时的诊治，将会对患者的生命和健康产生很大的危害[6]。对活动性肺结核患者进行痰中结核分枝杆菌的测定，对于寻找感染源、制订治疗方案及评估疗效具有十分重要的作用。

涂片抗酸染色法显微镜检验是目前临床上常用的一种方法，操作简便，但操作人员会受到一定的主观因素的影响，导致灵敏度下降。痰培养法的诊断准确率很高，但实验过程繁琐[7-8]。肺结核以痰液培养为“金标准”，其检出率很高，但其需要很久的时间，会延误患者的最佳治疗时间，并且会导致疾病的恶化，并不能区分结核分枝杆菌和非结核性分枝杆菌，会出现假阳性和假阴性的情况。而Xpert MTB/RIF以其特异性高，操作简便，快速等优点受到广大医师和患者的欢迎[9-10]。涂片抗酸染色法是最传统的一种有效的检测技术，通过“染-洗片-复染”过程，可以对分枝杆菌染色，在淡蓝色背景下，抗酸杆菌呈红色，其他细菌呈蓝色，从而增加检测的可靠性，但其检测结果容易受到外部环境的干扰，导致一些患者无法达到预期的筛查效果，容易造成漏诊和误诊[11-12]。目前，Xpert MTB/RIF已越来越多地用于活动性肺结核早期检验中，Xpert MTB/RIF基于荧光试剂，实现了对PCR全流程的实时监测，同时检测全流程的Ct值与初始复制数量之间存在着良好的直线相关性，能够有效地提升检测的准确性[13-14]。袁桢等[15]在研究中，荧光定量检验PCR诊断活动性肺结核的灵敏度100.00%及准确度98.75%均高于涂片抗酸染色法（P均＜0.05）。其研究与本次研究结果一致，本次研究中Xpert MTB/RIF检验的灵敏度97.40%、准确度96.67%高于涂片抗酸染色法检验（P均＜0.05）。提示Xpert MTB/RIF在活动性肺结核的诊断中具有较高的临床价值，可用于肺结核的早期筛选。

综上所述，活动性肺结核早期检验中半巢式全自动实时荧光定量PCR检测（Xpert MTB/RIF）的应用效能高于涂片抗酸染色法的应用研究。