头孢哌酮-舒巴坦联合中药对泛耐药鲍曼不动杆菌的抗菌活性研究

杨建安 杨小军 金桂林

（江西中医药大学附属医院 南昌 330006）

鲍曼不动杆菌（Acinetobacter Baumannii,Aba）属于革兰氏阴性菌，是常见的院内感染致病菌，可导致多种组织器官感染[1]。该病菌具有较强的繁殖能力，当机体免疫功能较差时其感染概率更大[2]。头孢类、喹诺酮类、氨基糖苷类及碳青霉烯类抗生素常用于抑制该病菌的繁殖。目前，Aba 会随着治疗的进行产生耐药性[3]。泛耐药鲍曼不动杆菌（Pan-Drug Resistant Acinetobacter Baumannii,PDR-AB）是指对头孢菌素类、碳青霉烯类、β-内酰胺酶抑制剂、氟喹诺酮类、氨基糖苷类中的三类及以上药物产生耐药性的菌株[4]。舒巴坦与第三代头孢菌素（头孢哌酮）联合是治疗Aba 感染的主要方案之一，临床针对PDR-AB 的治疗也多以此方案为基础。但PDR-AB对头孢哌酮-舒巴坦的耐药率也呈逐渐增加趋势[5]。在抗感染方面，传统中药具有耐药性小、抗菌谱广、时限长、疗效好及副作用小的优点[6]。有学者进行中西药联合的体外验证实验发现联合用药可以降低用药剂量，改善抑菌效果[7]。曾有研究报道舒巴坦联合中药有效控制了Aba 感染[8]。基于此，本研究探究头孢哌酮-舒巴坦联合中药对PDR-AB 抑菌活性的影响，为临床提供依据。现报道如下：

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 菌株来源 收集2020 年2 月至2022 年2 月在医院进行治疗的感染患者的尿液、痰液、血液、脑脊液标本，对其进行菌株鉴定，从中随机抽取80 株PDR-AB 进行药敏实验。

1.1.2 实验所用中药 乌梅、醋五味子、罗汉果、黄连、五倍子、连翘6 种中药（购自江苏江阴天江药业有限公司）。

1.2 实验方法 将合格样本按《全国临床检验操作规程》[9]进行培养及涂片革兰染色镜检。称取以上6种中药各100 g，配制成1 000 mg/ml 贮存液，若药物溶解性不好，需要适当进行加热，高压灭菌，该贮存液应尽快使用。称取2 g 头孢哌酮-舒巴坦，溶于1 L 蒸馏水中，配制成2 g/L 的储备液。菌株鉴定：将获取的菌株传至3 代，37℃培养箱中孵育过夜。依据ATB RAPID 32 GN 鉴定试剂盒操作说明对菌株进行鉴定，将符合率高于99.5%的菌株作为后续实验菌株。药物敏感试验：将生长良好的菌落用生理盐水配制成0.5 MCF，用K-B 法监测药物敏感性。均匀涂布在M-H 平皿中，于室温下干燥20 min，将药敏纸片放置在此培养基中，于培养箱中进行培养。根据黑色无反射背景区域反射光照明情况测定各药敏纸片抑菌直径，根据CLSI2015 中的标准进行判断[10]。中药药敏试验采用琼脂稀释法，具体步骤如下：（1）制备中药原液，取100 g 中药浸泡后煎煮，煮沸后改文火继续煎煮30 min，然后使用100 目筛过滤，保留第一次滤液，往药渣加入1 L 水，继续重复上述操作煎煮过滤，合并两次的滤液，用文火煎煮，浓缩为100 ml，药液浓度为1:1。将制备好的药液置于4℃冰箱保存。（2）使用MH 琼脂制备养基。（3）将无菌空白药敏纸片（杭州特种纸业有限公司，批号：GB/T1914·2017）浸泡于含药培养基中，10 min 后取出并置于60℃烤箱充分干燥，以制成药敏纸片备用。各种药物MIC 的测定：参照美国临床实验室标准化协会[11]中微量肉汤法测定药物治疗方案MIC、MIC50、MIC90。

1.3 观察指标 记录6 种中药对PDR-AB 的药敏实验结果，测定乌梅、醋五味子、罗汉果、黄连、五倍子、连翘6 种中药对PDR-AB 的抑菌活性，并比较单用中药、单用头孢哌酮-舒巴坦、中药与头孢哌酮-舒巴坦联合应用的MIC，比较各种中药与头孢哌酮-舒巴坦联用前后达到完全抑菌时的浓度。

1.4 统计学方法 采用SPSS23.0 统计学软件进行数据处理。对联用前后的MIC 及达到完全抑菌效果时的浓度组内比较进行配对t检验，以（±s）表示。本研究以α=0.05 为检验水准。

2 结果

2.1 6种中药对PDR-AB 的药敏实验结果PDR-AB 对乌梅、醋五味子、罗汉果、黄连、五倍子、连翘6 种中药均无耐药性，所选中药具有明显的抑菌活性。见表1。

表1 6 种中药对PDR-AB 的药敏实验结果[例（%）]

2.2 6种中药及头孢哌酮-舒巴坦单独用药的MIC、MIC50、MIC906 种中药及头孢哌酮-舒巴坦单独用药的MIC，其中五倍子的MIC50为5.29 mg/ml，抑菌活性高于其他中药。见表2。

2.3 6种中药联合头孢哌酮-舒巴坦用药的MIC、MIC50、MIC90乌梅、醋五味子、罗汉果、黄连、五倍子、连翘各中药联合头孢哌酮-舒巴坦用药的MIC，联用后各种药的MIC50均降低，抑菌活性高于联用前，联用后头孢哌酮-舒巴坦的MIC 为0.12～33.26 μg/ml，MIC50为0.91 μg/ml，MIC90为9.95 μg/ml。见表3。

表3 6 种中药联合头孢哌酮-舒巴坦用药后的MIC、MIC50、MIC90（mg/ml）

2.4 6种中药与头孢哌酮-舒巴坦联用前后的MIC比较 各中药单用与头孢哌酮-舒巴坦联用前后的MIC 比较，差异有统计学意义（P＜0.05），联用后各中药的MIC 均显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 6 种中药与头孢哌酮-舒巴坦联用前后的MIC 比较（mg/ml，±s）

表4 6 种中药与头孢哌酮-舒巴坦联用前后的MIC 比较（mg/ml，±s）

联用中药种类乌梅醋五味子罗汉果黄连五倍子连翘单用联用t P 1.18±0.31 0.65±0.41 9.223 0.000 0.98±0.34 0.35±0.31 12.247 0.000 1.55±0.21 1.12±0.31 10.272 0.000 1.31±0.29 0.77±0.36 10.448 0.000 0.56±0.31 0.28±0.02 8.062 0.000 1.41±0.31 0.87±0.36 10.167 0.000

2.5 各中药与头孢哌酮-舒巴坦联用前后达到完全抑菌时的浓度 各中药单用与头孢哌酮-舒巴坦联用前后的达到完全抑菌时的浓度比较，差异有统计学意义（P＜0.05），联用后各中药达到完全抑菌所需浓度均降低（P＜0.05），且五倍子联用后达到完全抑菌时的浓度低于其他中药。见表5。

表5 各中药与头孢哌酮-舒巴坦联用前后达到完全抑菌时的浓度（mg/ml，±s）

表5 各中药与头孢哌酮-舒巴坦联用前后达到完全抑菌时的浓度（mg/ml，±s）

联用中药种类乌梅醋五味子罗汉果黄连五倍子连翘单用联用t P 65.55±1.22 15.45±1.39 242.291 0.000 62.11±1.33 15.23±1.14 239.370 0.000 62.11±2.37 33.98±1.54 89.019 0.000 61.22±1.65 33.46±1.26 119.597 0.000 15.64±1.31 4.11±1.23 57.391 0.000 60.89±0.98 35.66±1.09 153.955 0.000

3 讨论

PDR-AB 是医院内的主要病菌，该病菌对β-内酰胺类、喹诺酮类的耐药性越来越严重[12]。此类病菌的出现增加了医院诊疗难度，影响患者的生活质量。近年来针对新药抗菌活性的研究较多，且联合用药方案的使用效果逐渐被临床认可。在我国，头孢哌酮-舒巴坦是临床上利用率较高的复方制剂，其具有显著的抗PDR-AB 活性。中药的抗菌作用逐渐被临床认可，以往在研究重要的作用时常针对常见菌株进行研究[13]，本研究在以往研究的基础上探究头孢哌酮-舒巴坦联合中药对PDR-AB 的抗菌活性的影响。

中药对细菌酶系的感染作用已被临床证实，主要体现在中药能够抑制细菌的繁殖过程，阻止细菌中某些成分的生成，达到减少细菌繁殖的目的。本研究结果显示，PDR-AB 对乌梅、醋五味子、罗汉果、黄连、五倍子、连翘6 种中药均无耐药性，提示所选中药具有明显的抑菌活性。目前，有关中西药结合治疗PDR-AB 的研究处于起步阶段[14]。本研究通过K-B法测定五倍子、乌梅、醋五味子、连翘、黄连、罗汉果等6 种中药的抗菌能力，测定其单独及与头孢哌酮- 舒巴坦联用的MIC、MIC50、MIC90值结果显示，联用后各中药的MIC 值均显著降低，各中药单用与头孢哌酮-舒巴坦联用前后达到完全抑菌时的浓度有显著差异，且五倍子联用后达到完全抑菌时的浓度显著低于其他中药。提示五倍子联合头孢哌酮-舒巴坦的抑菌效果最为显著。头孢哌酮-舒巴坦抑菌效果已被临床认可，但该药大剂量应用时存在胃肠道反应或出现肝功能异常的风险[15]。考虑与中药联合可互补长短，使患者最大程度受益。头孢哌酮-舒巴坦与中药发挥抑菌作用时没有拮抗作用的发生，这也为治疗方案的选择提供了依据。以往研究表明五倍子抑菌作用具有广谱性及有效性，且还能抑制多重耐药菌株的产生[16～17]。分析原因为该中药中鞣质的含量较多，该成分可与细菌蛋白质结合成复合物发挥杀菌作用。中药制剂通过系数进入人体循环，利用活血化瘀、疏经通络来对脏器功能进行调整，达到治疗目的。中药制剂可以调节受到感染的肺脏等脏器功能，改善交感神经兴奋性，并能够调节机体应激反应。结合本研究结果得出，头孢哌酮-舒巴坦联合中药制剂具有重要的临床意义。

中药中发挥作用的往往是部分特殊成分，五倍子中具有挥发油、木脂素、生物碱等成分，上述成分不一定具备抑菌作用，但可以改善菌株的抗药性[18]。不同中药的抑菌成分不同，除五倍子外，其他中药联合应用效果不佳可能也与其中的杂质、鞣质成分影响了自身抗菌能力有关[19]。目前医院内的细菌耐药情况非常严峻，本研究基于以往临床经验，探究了几类中药对PDR-AB 的抑制作用。本研究发现选取的6 种中药可以很好地抑制PDR-AB 生长繁殖，中药制剂可以改善机体内β-内酰胺酶的稳定性与结合性，具有较好抗菌效果，将中药制剂与头孢哌酮-舒巴坦联合应用，其与头孢哌酮-舒巴坦结合后可以显著改善药物抑制细菌活性的作用，有效控制细菌广泛传播，提高用药安全性。且联合用药方案能够减少抗菌药的剂量，进而一定程度减少药物不良反应，改善耐药性。因此，中药可作为常规抗菌药物的补充，优化治疗方案[20]。

本研究结果为抑制PDR-AB 提供了新的思路，但也存在不足之处，例如未对头孢哌酮-舒巴坦与6 种中药联合作用进行时间-杀菌曲线的分析，此外，没有针对各组治疗后不良反应和并发症进行分析，今后还需进行深入探讨，以期动态监测中西药联合的“协同”和“相加”作用，充实验证本研究结果。

综上所述，头孢哌酮-舒巴坦与五倍子联用对PDR-AB 具有明显的抑菌作用，可为临床提供参考。