青钱柳叶化学成分及其α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

杨 勇，郭婷思，谢 敏，谭李宏，李文楚，郑 豪，黄费炳，杨玉佩，王 炜，翦雨青

（湖南中医药大学中医药民族医药国际联合实验室，湖南 长沙 410208）

青钱柳Cyclocaryapaliurus（Batal.） Iljinskaja 是胡桃科落叶乔木，是我国特有的珍稀植物之一，又名青钱李、摇钱树、甜茶树等，主要分布于我国长江中下游地区，湖南、湖北、江西、贵州等省份为主要产地，其树叶、树皮、树根均可入药，具有清热、消肿、解毒、止痛等作用［1-2］。民间常采其嫩叶制茶，其味微甜，且有养阴益肝、健脾化浊等功效。目前市面上以青钱柳叶为原料的保健品很多，主要以降血脂、降血糖为主。目前，从青钱柳叶中已发现二百多种成分，按结构类型主要分为三萜类、黄酮类、萘酮类、酚酸类、紫罗兰酮类等［3-4］。其中，达玛烷型三萜和黄酮醇类衍生物是青钱柳叶中的主要活性成分，具有降血糖、降血脂、抗炎、抗肿瘤等多种活性［5-9］。本实验主要对青钱柳叶乙醇提取物的正丁醇萃取部位进行研究，从中分离得到15 个化合物并检测其α-葡萄糖苷酶抑制活性，其中化合物1 为新四氢萘醇苷类天然产物，化合物4～5、8 ～10、14 为首次从青钱柳叶中分离得到。化合物4 ～5 为较少见的黄酮木脂素类化合物，对α-葡萄糖苷酶具有潜在的抑制活性。

1 材料

1.1 仪器 核磁共振波谱仪（BRUKER-600，德国布鲁克公司）； 超高液相色谱仪串联轨道离子阱质谱仪（Orbitrap Exploris 120）、红外光谱仪（美国Thermo Fisher Scientific 公司）； Agilent 1290/6740A 超高效液相色谱仪串联三重四级杆质谱、800TS-SN 酶标仪（美国Agilent 公司）； UV-1900i紫外光谱仪（日本岛津公司）； J-1500 圆二色光谱仪（日本分光株式会社）； AUTOPOL Ⅲ旋光仪（美国鲁道夫公司）； P1050 制备液相色谱仪（北京清博华科技有限公司）； N-1300 旋转蒸发仪（日本EYELA 公司）； 分析天平（上海菁海仪器有限公司）。XB-C18半制备色谱柱［10 mm× 250 mm，5 μm； 飞世尔沃顿（南京） 科技有限公司］； C18反相键合材料（Spherical C18Monomeric，120A）、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20 （香港GE Healthcare Bio-Sciences 公司）。

1.2 试剂 氘代试剂（美国CIL 公司）； 对硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷、阿卡波糖片、α-葡萄糖苷酶 （货号 S10137-1 g、B20003-20 mg、S10050 100U，上海源叶生物科技有限公司）； PBS 缓冲液（pH 7.2～7.4，武汉普诺赛生命科技公司）； 二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、碳酸钠（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）； 甲醇、乙腈（色谱纯，上海西格玛奥德里奇贸易有限公司）。

1.3 药材 青钱柳药材于2015 年6 月采自湖南省怀化市通道县，经湖南中医药大学中医药民族医药国际联合实验室王炜教授鉴定为正品。药材凭证标本（编号20150629） 现存放于湖南中医药大学中医药民族医药国际联合实验室。

2 提取与分离

取青钱柳干燥叶20 kg，粉碎，95%乙醇渗漉提取，减压浓缩，得到总浸膏约5.0 kg。将总浸膏用水分散，依次用石油醚、氯仿及水饱和正丁醇多次萃取，合并萃取液，减压浓缩，分别得到石油醚层（530 g）、氯仿层（2 570 g）、正丁醇层（620 g） 和水层（560 g）。

称取青钱柳氯仿浸膏980 g，经硅胶柱分离，以二氯甲烷-甲醇（1 ∶0 ～0 ∶1） 梯度洗脱，得到Fr.1～Fr.21。Fr.16 经硅胶柱分离，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇（1 ∶0 ∶0 ～0 ∶1 ∶0 ～0 ∶0 ∶1） 梯度洗脱，得到Fr.16-1 ～Fr.16-16。Fr.16-4 （3.1 g） 经Sephadex LH-20 和半制备HPLC 分离（流动相45%甲醇-水，体积流量3.0 mL/min，检测波长210、245 nm），得到化合物1 （tR＝11.2 min，12.6 mg）。Fr.16-6 （6.36 g） 经Sephadex LH-20、硅胶和半制备HPLC （流动相25% 甲醇-水，体积流量3.0 mL/min，检测波长210、245 nm） 纯化，得到化合物3 （tR＝21.5 min，6.3 mg）。

称取青钱柳正丁醇层浸膏600 g，用水分散。再称7.5 kg 大孔树脂（AB-8） 装柱，以水-甲醇（1 ∶0、7 ∶3、5 ∶5、3 ∶7、1 ∶9） 梯度洗脱，得到Fr.A～Fr.E。

Fr.D 经硅胶柱分离，以二氯甲烷-无水甲醇（1 ∶0 ～0 ∶ 1） 梯度洗脱，得Fr.D1 ～Fr.D13。Fr.D5 经Sephadex LH-20 分离，以甲醇洗脱，得到Fr.D5-1～Fr.D5-4。Fr.D5-2 经半制备HPLC （流动相45%乙腈-水，体积流量3.0 mL/min，检测波长210、245 nm） 分离，得到化合物8 （tR＝7.9 min，2.5 mg）、10 （tR＝13.3 min，7.8 mg）。Fr.D6 经Sephadex LH-20 分离，以甲醇洗脱，得到Fr.D6-1～Fr.D6-6。Fr.D6-2 经C18反相柱分离，再经半制备HPLC （流动相50%乙腈-水，体积流量3.0 mL/min，检测波长210、245 nm） 分离，得到化合物6 （tR＝26.3 min，4.1 mg）。Fr.D12 经聚酰胺（80～100 目）、C18反相柱、Sephadex LH-20 和半制备HPLC （流动相55% 甲醇-水，体积流量3.0 mL/min，检测波长210、245 nm） 分离，得到化合物4 （tR＝16.2 min，4.0 mg）、5 （tR＝18.8 min，22.9 mg）。

Fr.C 经硅胶柱分离，以二氯甲烷-无水甲醇（1 ∶0～0 ∶1） 梯度洗脱，用5%香草醛-浓硫酸作为显色剂用于TLC 检识，得Fr.C1 ～Fr.C15。Fr.C2 经Sephadex LH-20 分离，以甲醇洗脱，得到Fr.C2-1～Fr.C2-6。Fr.C2-6 经半制备HPLC （流动相35%乙腈-水，体积流量3.0 mL/min，检测波长210、245 nm） 分离，得到化合物15 （tR＝6.1 min，7.8 mg）。Fr.C9 经Sephadex LH-20 分离，以甲醇洗脱，得到Fr.C9-1 ～Fr.C9-6。Fr.C9-4 经半制备HPLC （流动相25% 乙腈-水，体积流量3.0 mL/min，检测波长210、245 nm） 分离，得到化合物7 （tR＝16.6 min，5.5 mg）。Fr.C10 经Sephadex LH-20 分离，以甲醇洗脱，得到Fr.C10-1～Fr.C10-6； Fr.C10-1 经半制备HPLC （流动相30% 乙腈-水，体积流量3.0 mL/min） 分离，得到化合物9（tR＝12.8 min，15.6 mg）、2 （tR＝14.6 min，7.9 mg）。Fr.C12 经Sephadex LH-20 分离，以甲醇洗脱，得到Fr.C12-1～Fr.C12-6。Fr.C12-3 经过硅胶柱和半制备HPLC （流动相25% 乙腈-水，体积流量3.0 mL/min，检测波长210、245 nm） 分离，得到化合物12 （tR＝8.5 min，16.2 mg）、13 （tR＝8.9 min，4.1 mg）、11 （tR＝10.1 min，3.5 mg）、14 （tR＝11.5 min，17.2 mg）。

3 酸水解、衍生和HPLC 分析

参照文献［10］ 报道方法，对化合物1 进行酸水解、衍生和HPLC 分析。HPLC 分析结果显示，化合物1 中的葡萄糖与D-葡萄糖标准品衍生物的保留时间一致，可以确定化合物1 中葡萄糖为D-构型。

4 结构鉴定

图1 化合物1 的结构式Fig.1 Structural of compound 1

在1H-NMR 谱中，显示了22 个质子信号，其中δH： 7.48 （2H，d，J＝8.7 Hz，H-2″，6″） 和6.81 （2H，d，J＝8.7 Hz，H-3″，5″） 表明AA′XX′系统存在；δH： 7.73 （1H，d，J＝16.0 Hz，H-7″） 和6.41 （1H，d，J＝16.0 Hz，H-8″） 表明存在一对反式双键；δH： 4.62 （1H，d，J＝7.9 Hz，H-1′），表明化合物1 是糖苷类化合物。在13C-NMR谱中，有25 个碳信号，结合DEPT 135°谱，显示化合物1 有2 个亚甲基、18 个次甲基和5个季碳。在1H-1H COSY 谱（图2） 中，存在2 个自旋耦合体系H-1/H2-2/H-3/H-4 和H-5/H-6/H-7/H-8，结合HMBC 谱（图2） 的H-1 到C-8/C-9/C-10 和H-4 到C-5/C-9/C-10 的关键信号，可以推断出化合物1 是四氢萘烷母核（图1）。通过对化合物1 进行酸水解、衍生和HPLC 分析，结合糖的端基质子H-1′耦合常数J＝7.9 Hz，可以确定存在β-D-葡萄糖。剩下的9 个碳 ［δC： 169.0 （C-9″），161.3 （ C-4″），147.1 （ C-7″），131.3 （ C-2″，6″），127.2 （C-1″），114.8 （C-8″），116.8 （C-3″，5″） ］，通过HMBC 谱H-7″到C-1″/C-2″，6″/C-9″和H-3″到C-4″，结合1H-1H COSY 谱中H-7″/H-8″和H-2″，6″/H-3″，5″2 个自旋耦合系统，可以确定为反式对香豆酰基基团。通过HMBC 谱H-1′到C-4 和H-6′到C-9″的2 个关键信号，可以推断上述3 个片段的连接方式。因此化合物1 的平面结构为1，3，4-三羟基四氢萘醇- ［6′- （E） -对羟基香豆酰基］ -4-β-D-吡喃葡萄糖苷。ROESY 谱中，3 个关键相关的信号H-3/H-2a、H-1/H-2b 和H-4/H-2b，可以证明H-1 和H-4 为同侧，H-1 与H-3 为异侧。如果把H-1 定为α 朝向，那么H-3 为β，H-4为α，化合物1 的构型为1S，3S，4S。如果把H-1定为β 朝向，则化合物1 的构型为1R，3R，4R（图3）。最终，通过化合物1 的实验ECD 曲线图谱与计算ECD 曲线图谱对比分析（图4），可以确定其绝对构型为1R，3R，4R。因此，化合物1 的为（1R，3R，4R） -1，3，4-三羟基四氢萘醇-［6′- （E） -对羟基香豆酰基］ -4-β-D-吡喃葡萄糖苷，命名为cyclopaloside C，并对其核磁数据进行归属（表1）。

表1 化合物1 的1H-NMR、13C-NMR 数据Tab.1 1H-NMR and 13C-NMR data of compound 1

图2 化合物1 的关键HMBC 与1H-1H COSY 相关性Fig.2 Key HMBC and 1H-1H COSY correlations of compound 1

图3 化合物1 的NOE 关键相关信号Fig.3 Key NOE correlations of compound 1

化合物2： 淡黄色无定形粉末，分子式C25H26O11，5%香草醛-浓硫酸TLC 显色为灰色，ESI-MSm/z：525.5 ［M＋Na］＋。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ：7.61 （1H，d，J＝15.9 Hz，H-7″），7.47 （2H，d，J＝8.5 Hz，H-2″，6″），7.45 （1H，d，J＝9.2 Hz，H-6），6.84 （2H，d，J＝8.7 Hz，H-3″，5″），6.81 （1H，d，J＝9.2 Hz，H-7），6.34（1H，d，J＝15.9 Hz，H-8″），5.37 （1H，t，J＝3.2 Hz，H-4），4.84 （1H，d，J＝7.7 Hz，H-1′），4.53 （1H，dd，J＝11.9，2.2 Hz，H-6a′），4.39（1H，dd，J＝11.9，6.6 Hz，H-6b′），3.66 （1H，m，H-2′），3.65 （1H，m，H-5′），3.50 （1H，m，H-3′），3.44 （1H，m，H-4′），3.04 （1H，ddd，J＝17.5，12.6，6.2 Hz，H-2a），2.52 （1H，m，H-2b），2.22 （2H，m，H-3）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ： 206.4 （C-1），33.5 （C-2），30.3 （C-3），61.3 （C-4），148.4 （C-5），128.8（C-6），119.0 （C-7），159.3 （C-8），116.2 （C-9），135.3 （C-10），104.4 （C-1′），75.2 （C-2′），77.8 （C-3′），71.7 （C-4′），75.7 （C-5′），64.4 （C-6′），127.0 （C-1″），131.2 （C-2″，C-6″），116.9 （C-3″，5″），161.4 （ C-4″），146.8（C-7″），114.9 （C-8″），168.9 （C-9″）。以上数据与文 献 ［11 ］ 基 本 一 致，故 鉴 定 为cyclopaloside A。

化合物3： 淡黄色无定形粉末，分子式C16H20O9，5%香草醛-浓硫酸TLC 显色为灰色，ESI-MSm/z：379.35 ［M ＋Na］＋。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ： 7.53 （1H，d，J＝9.1 Hz，H-6），6.88 （1H，d，J＝9.1 Hz，H-7），5.36 （1H，t，J＝3.3 Hz，H-4），4.79 （1H，d，J＝7.7 Hz，H-1′），3.90（1H，dd，J＝12.1，1.8 Hz，H-6a′），3.71 （1H，dd，J＝12.1，4.9 Hz，H-6b′），3.52 （1H，dd，J＝9.2，7.7 Hz，H-2′），3.45 （1H，t，J＝8.6 Hz，H-3′），3.39 （1H，m，H-4′），3.38 （1H，m，H-5′），3.06 （1H，ddd，J＝17.5，13.4，5.5 Hz，H-2a），2.54 （1H，td，J＝17.5，3.6 Hz，H-2b），2.25 （1H，m，H-3a），2.20 （1H，m，H-3b）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ： 206.5 （C-1），33.6 （C-2），30.3 （C-3），61.3 （C-4），148.9 （ C-5），128.5 （ C-6），119.0 （ C-7），159.1 （ C-8），116.2 （ C-9），134.7 （ C-10），104.5 （C-1′），75.4 （C-2′），77.9 （C-3′），71.3（C-4′），78.4 （C-5′），62.5 （C-6′）。以上数据与文献［12］ 基本一致，故鉴定为juglanosides E。

化合物4： 黄色粉末，分子式C24H16O9，在365 nm 的紫外灯下呈蓝色荧光，5%香草醛-浓硫酸TLC 显色为灰褐色；； HR-ESI-MSm/z： 447.072 1 ［M-H］-（计算值为447.072 2，C24H15O9-）。1H-NMR （600 MHz，DMSO-d6）δ： 7.33 （1H，s，H-6″），6.79 （1H，s，H-3″），6.72 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-2′），6.71 （1H，d，J＝8.2 Hz，H-5′），6.63 （1H，s，H-8），6.61 （1H，dd，J＝8.2，2.1 Hz，H-6′），6.07 （1H，s，H-8″），4.90 （1H，d，J＝6.3 Hz，H-2），4.08 （1H，m，H-3），2.86 （1H，dd，J＝16.3，4.8 Hz，H-4a），2.74 （1H，dd，J＝16.3，6.9 Hz，H-4b）；13C-NMR （150 MHz，DMSO-d6）δ： 81.7 （ C-2），64.8 （ C-3），25.8 （ C-4），147.8 （C-5），99.6 （C-6），152.4 （C-7），97.5（C-8），157.7 （C-9），103.2 （C-10），129.4 （C-1′），114.0 （C-2′），145.2 （C-3′），145.1 （C-4′），115.4 （C-5′），118.0 （C-6′），106.1 （C-1″），152.6 （C-2″），103.4 （C-3″），146.6 （C-4″），143.9 （C-5″），109.0 （C-6″），141.5 （C-7″），92.3 （C-8″），161.2 （C-9″）。上述数据与文献［13-14］ 报道一致，进一步通过旋光分析，并比较化合物4 的实验ECD 与计算ECD 图谱（图4），确定其绝对构型为 （2R，3S），故鉴定为vaccinin A。

化合物5： 黄色粉末，分子式C24H16O9，在365 nm 的紫外灯下呈蓝色荧光，5%香草醛-浓硫酸TLC 显色反应为灰褐色；； HR-ESI-MSm/z： 447.072 5 ［M-H］-（计算值为447.072 2，C24H15O9-）。1H-NMR （600 MHz，DMSO-d6）δ： 7.34 （1H，s，H-6″），6.75（1H，s，H-3″），6.72 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-2′），6.71 （1H，d，J＝8.2 Hz，H-5′），6.67（1H，s，H-8），6.61 （1H，dd，J＝8.2，2.1 Hz，H-6′），6.10 （1H，s，H-8″），4.89 （1H，d，J＝6.3 Hz，H-2），4.07 （1H，m，H-3），2.80 （1H，dd，J＝16.3，4.8 Hz，H-4a），2.69 （1H，dd，J＝16.3，6.9 Hz，H-4b）；13C-NMR （150 MHz，DMSO-d6）δ： 81.7 （C-2），64.8 （C-3），25.8（C-4），151.7 （C-5），99.6 （C-6），148.7 （C-7），97.2 （C-8），157.8 （C-9），103.2 （C-10），129.4 （ C-1′），114.1 （ C-2′），145.2 （ C-3′），145.1 （ C-4′），115.4 （ C-5′），118.0 （ C-6′），106.0 （ C-1″），152.6 （ C-2″），103.4 （ C-3″），146.6 （ C-4″），143.8 （ C-5″），109.0 （ C-6″）141.6 （C-7″），91.9 （C-8″），161.2 （C-9″）。结合1D 和2D NMR 谱归属了化合物的碳、氢信号，发现化合物5 和4 结构上极其相似，差别主要在于C-5 和C-7 的化学位移不同。在化合物4 的HMBC谱中，H-4 （δH2.74，2.86） 与C-5 （δC147.8）有相关信号，H-8 （δH6.63） 和C-7 （δC152.4）也存在相关信号。而在化合物5 的HMBC 谱中，H-4 （δH2.69，2.80） 与C-5 （δC151.7） 有相关信号，H-8 （δH6.67） 和C-7 （δC148.7） 也存在相关信号。通过HMBC 谱的这2 个关键的信号，以上数据与文献报道［14-16］ 基本一致，推断化合物5 的结构可能为emururin A （2R，3S） 或entmururin A （2S，3R）。最终，通过计算ECD （图4） 的方法确定化合物5 的绝对构型为2S，3R，与ent-mururin A 一致。

化合物6： 黄色无定形粉末，分子式C21H20O10，5%香草醛-浓硫酸TLC 显色为橙黄色，ESI-MSm/z： 431.0［M-H］-。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ： 7.77 （2H，d，J＝8.7 Hz，H-2′，6′），6.93（2H，d，J＝8.7 Hz，H-3′，5′），6.36 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），6.18 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），5.37 （1H，d，J＝1.7 Hz，H-1″），4.22（1H，dd，J＝3.3，1.7 Hz，H-2″），3.71 （1H，dd，J＝9.1，3.3 Hz，H-3″），3.33 （1H，overlap，H-4″），3.33 （1H，m，H-5″），0.92 （1H，d，J＝5.7 Hz，H-6″）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ： 159.1 （C-2），136.1 （C-3），179.5 （C-4），161.6 （C-5），100.2 （C-6），163.2 （C-7），95.0（C-8），158.7 （C-9），105.6 （C-10），122.6 （C-1′），131.9 （ C-2′，6′），116.5 （ C-3′，5′），161.6 （ C-4′），103.5 （ C-1″），71.9 （ C-2″），72.0 （C-3″），73.2 （C-4″），72.0 （C-5″），17.7（C-6″）。以上数据与文献［17］ 基本一致，故鉴定为山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物7： 黄色无定形粉末，分子式C21H20O11，5%香草醛-浓硫酸TLC 显色为橙黄色，ESI-MSm/z： 447.1 ［M-H ］-。1H-NMR （ 600 MHz，CD3OD）δ： 8.06 （2H，d，J＝8.8 Hz，H-2′，6′），6.89 （2H，d，J＝8.8 Hz，H-3′，5′），6.40（1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），6.20 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），5.27 （1H，d，J＝7.3 Hz，H-1″），3.69 （1H，dd，J＝11.9，2.3 Hz，H-6″a），3.53（1H，dd，J＝11.9，5.5 Hz，H-6″b），3.42 （1H，overlap，H-3″），3.42 （1H，overlap，H-2″），3.32（1H，overlap，H-4″），3.20 （1H，ddd，J＝9.7，5.5，2.3 Hz，H-5″）；13C-NMR （ 150 MHz，CD3OD）δ： 159.0 （C-2），135.4 （C-3），179.5（C-4），161.6 （C-5），99.9 （C-6），166.0 （C-7），94.7 （C-8），158.3 （C-9），105.8 （C-10），122.8 （C-1′），132.3 （C-2′，6′），116.0 （C-3′，5′），161.6 （ C-4′），104.0 （ C-1″），75.7 （ C-2″），78.4 （C-3″），71.3 （C-4″），78.0 （C-5″），62.6 （C-6″）。以上数据与文献［18］ 基本一致，故鉴定为山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物8： 黄色无定形粉末，分子式C22H20O12，5%香草醛-浓硫酸TLC 显色为橙黄色，ESI-MSm/z： 475.0 ［M-H］-。1H-NMR （600 MHz，DMSOd6）δ： 8.00 （2H，d，J＝8.8 Hz，H-2′，6′），6.87 （2H，d，J＝ 8.8 Hz，H-3′，5′），6.33（1H，brd，H-8），6.12 （1H，brd，H-6），5.45（1H，d，J＝7.5 Hz，H-1″），3.72 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-5″），3.56 （ 3H，s，H-1‴），3.36（1H，overlap，H-4″），3.28 （ 1H，overlap，H-3″），3.24 （1H，overlap，H-2″）；13C-NMR （150 MHz，DMSO-d6）δ： 156.6 （C-2），132.9 （C-3），175.3 （C-4），161.1 （C-5），99.5 （C-6），163.6（C-7），94.1 （C-8），156.6 （C-9），103.2 （C-10），120.7 （C-1′），130.8 （C-2′，6′），115.1（C-3′，5′），160.1 （C-4′），101.5 （C-1″），71.5（C-4″），75.5 （C-3″），73.9 （C-2″），75.6 （C-5″），169.0 （C-6″），51.9 （C-1‴）。以上数据与文献［19］ 基本一致，故鉴定为山柰酚-3-O-β-D-葡萄醛酸甲酯。

化合物9： 黄色无定形粉末，分子式C23H22O12，5%香草醛-浓硫酸TLC 显色为橙黄色，ESI-MSm/z： 489.1 ［M-H］-。1H-NMR （600 MHz，DMSOd6）δ： 8.02 （2H，d，J＝8.9 Hz，H-2′，6′），6.87 （2H，d，J＝ 8.9 Hz，H-3′，5′），6.44（1H，d，J＝2.1 Hz，H-8），6.22 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-6），5.43 （1H，d，J＝7.5 Hz，H-1″），4.01 （2H，q，J＝7.1 Hz，H-1‴），3.70 （1H，d，J＝9.7 Hz，H-5″），3.35 （1H，dd，J＝9.7，8.8 Hz，H-4″），3.28 （1H，dd，J＝9.0，8.8 Hz，H-3″），3.24 （1H，dd，J＝9.0，7.5 Hz，H-2″），1.08 （3H，t，J＝7.1 Hz，H-2‴）；13C-NMR （150 MHz，DMSO-d6）δ： 156.7 （C-2），133.1 （C-3），177.2 （C-4），161.2 （C-5），98.9 （C-6），164.4（C-7），93.8 （C-8），156.4 （C-9），104.0 （C-10），120.6 （C-1′），131.0 （C-2′，6′），115.1（C-3′，5′），160.2 （C-4′），101.5 （C-1″），71.5（C-4″），75.5 （C-3″），73.9 （C-2″），75.7 （C-5″），168.5 （ C-6″），60.7 （ C-1‴），13.9 （ C-2‴）。以上数据与文献［20］ 基本一致，故鉴定为山柰酚-3-O-β-D-葡萄醛酸乙酯。

化合物10： 黄色无定形粉末，分子式C25H26O12，5%香草醛-浓硫酸TLC 显色为橙黄色，ESI-MSm/z： 517.0 ［M-H］-。1H-NMR （600 MHz，DMSOd6）δ： 7.99 （2H，d，J＝8.8 Hz，H-2′，6′），6.86 （2H，d，J＝ 8.8 Hz，H-3′，5′），6.32（1H，brd，H-8），6.11 （1H，brd，H-6），5.44（1H，d，J＝7.5 Hz，H-1″），3.97 （2H，t，J＝6.4 Hz，H-1‴），3.69 （1H，d，J＝9.7 Hz，H-5″），3.36 （1H，dd，J＝9.7，8.8 Hz，H-4″），3.28 （1H，dd，J＝9.0，8.8 Hz，H-3″），3.24（1H，dd，J＝9.0，7.5 Hz，H-2″），1.41 （2H，m，H-2‴），1.16 （2H，m，H-3‴），0.74 （3H，t，J＝7.4 Hz，H-4‴）；13C-NMR （150 MHz，DMSOd6）δ： 156.6 （C-2），132.8 （C-3），176.8 （C-4），161.1 （C-5），99.5 （C-6），163.3 （C-7），94.1 （ C-8），156.1 （ C-9），103.0 （ C-10），120.6 （C-1′），130.8 （C-2′，6′），115.1 （C-3′，5′），160.2 （ C-4′），101.5 （ C-1″），71.3 （ C-4″），75.5 （C-3″），73.9 （C-2″），75.8 （C-5″），168.4 （ C-6″），64.2 （ C-1‴），29.9 （ C-2‴），18.4 （C-3‴），13.4 （C-4‴）。以上数据与文献［21］ 基本一致，故鉴定为山柰酚-3-O-β-D-葡萄醛酸丁酯。

化合物11： 黄色无定形粉末，分子式C21H20O11，5%香草醛-浓硫酸TLC 显色为橙黄色，ESI-MSm/z： 447.0 ［M-H ］-。1H-NMR （ 600 MHz，CD3OD）δ： 7.34 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-2′），7.31 （1H，dd，J＝8.3，2.0 Hz，H-6′），6.91（1H，d，J＝8.3 Hz，H-5′），6.37 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），6.20 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），5.35 （1H，d，J＝1.7 Hz，H-1″），4.22 （1H，dd，J＝3.3，1.7 Hz，H-2″），3.71 （1H，dd，J＝9.5，3.3 Hz，H-3″），3.43 （ 1H，m，H-5″），3.33 （1H，overlap，H-4″），0.92 （1H，d，J＝5.6 Hz，H-6″）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：159.3 （ C-2），136.2 （ C-3），179.6 （ C-4），163.2 （C-5），99.8 （C-6），165.8 （C-7），94.7（C-8），158.5 （C-9），105.9 （C-10），122.9 （C-1′），116.9 （C-2′），146.4 （C-3′），149.8 （C-4′），116.3 （C-5′），122.9 （C-6′），103.5 （C-1″），71.9 （C-2″），72.1 （C-3″），73.2 （C-4″），72.0 （C-5″），17.7 （C-6″）。以上数据与文献［22］ 基本一致，故鉴定为槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物12： 黄色无定形粉末，分子式C21H20O12，5%香草醛-浓硫酸TLC 显色为橙黄色，ESI-MSm/z： 463.0 ［M-H ］-。1H-NMR （ 600 MHz，CD3OD）δ： 7.71 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-2′），7.58 （1H，dd，J＝8.5，2.1 Hz，H-6′），6.87（1H，d，J＝8.5 Hz，H-5′），6.38 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），6.19 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），5.26 （1H，d，J＝7.6 Hz，H-1″），3.72 （1H，dd，J＝12.0，2.2 Hz，H-6″a），3.58 （1H，dd，J＝12.0，5.5 Hz，H-6″b），3.49 （1H，overlap，H-3″），3.43 （1H，overlap，H-2″），3.35 （1H，overlap，H-4″），3.23 （1H，ddd，J＝9.6，5.5，2.2 Hz，H-5″）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：159.0 （ C-2），135.6 （ C-3），179.5 （ C-4），163.0 （C-5），99.8 （C-6），166.0 （C-7），94.7（C-8），158.4 （C-9），105.7 （C-10），123.0 （C-1′），117.5 （C-2′），145.9 （C-3′），149.8 （C-4′），116.0 （C-5′），123.2 （C-6′），104.2 （C-1″），75.7 （C-2″），78.4 （C-3″），71.2 （C-4″），78.1 （C-5″），62.5 （C-6″）。以上数据与文献［23］ 基本一致，故鉴定为槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物13： 黄色无定形粉末，分子式C21H20O12，5%香草醛-浓硫酸TLC 显色为橙黄色，ESI-MSm/z： 463.0 ［M-H ］-。1H-NMR （ 600 MHz，CD3OD）δ： 7.85 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-2′），7.58 （1H，dd，J＝8.5，2.1 Hz，H-6′），6.87（1H，d，J＝8.5 Hz，H-5′），6.38 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），6.19 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），5.17 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-1″），3.86 （1H，d，J＝3.3 Hz，H-4″），3.83 （1H，dd，J＝9.7，7.8 Hz，H-2″），3.65 （1H，dd，J＝11.2，6.0 Hz，H-6″a），3.58 （1H，overlap，H-6″b），3.57 （1H，overlap，H-3″），3.49 （1H，m，H-5″）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ： 158.7 （C-2），135.7 （C-3），179.5 （C-4），163.0 （C-5），99.8 （C-6），166.0 （C-7），94.7 （C-8），158.4 （C-9），105.6（C-10），122.8 （C-1′），117.7 （C-2′），145.8（C-3′），149.9 （ C-4′），116.1 （ C-5′），122.9（C-6′），105.4 （C-1″），73.2 （C-2″），75.1 （C-3″），70.0 （C-4″），77.2 （C-5″），61.9 （C-6″）。以上数据与文献［24］ 基本一致，故鉴定为槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷。

化合物14： 黄色无定形粉末，分子式C25H26O13，5%香草醛-浓硫酸TLC 显色为橙黄色，ESI-MSm/z： 534.1 ［M-H ］-。1H-NMR （ 600 MHz，CD3OD）δ： 7.62 （1H，dd，J＝8.5，2.2 Hz，H-6′） 7.60 （1H，d，J＝ 2.2 Hz，H-2′），6.84（1H，d，J＝8.5 Hz，H-5′），6.40 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），6.21 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），5.29 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-1″），4.06 （2H，t，J＝6.5 Hz，H-1‴），3.74 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-5″），3.59 （1H，dd，J＝9.6，8.8 Hz，H-4″），3.53 （1H，dd，J＝9.0，7.8 Hz，H-2″），3.46（1H，dd，J＝9.0，8.8 Hz，H-3″），1.50 （2H，m，H-2‴），1.25 （2H，m，H-3‴），0.83 （3H，t，J＝ 7.4 Hz，H-4‴）；13C-NMR （ 150 MHz，CD3OD）δ： 159.1 （C-2），135.3 （C-3），179.2（C-4），163.1 （C-5），99.9 （C-6），166.1 （C-7），94.7 （C-8），158.4 （C-9），105.6 （C-10），122.8 （ C-1′），117.1 （ C-2′），146.0 （ C-3′），149.9 （ C-4′），115.9 （ C-5′），123.5 （ C-6′），104.4 （C-1″），75.3 （C-2″），77.5 （C-3″），72.7（C-4″），77.2 （C-5″），170.2 （C-6″），66.2 （C-1‴），31.5 （C-2‴），19.9 （C-3‴），13.9 （C-4‴）。以上数据与文献［25］ 基本一致，故鉴定为槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸丁酯。

化合物15： 淡黄色无定形粉末，分子式C15H12O6，5% 香草醛-浓硫酸TLC 显色为橙红色，ESI-MSm/z： 288.0 ［M-H］-。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ： 7.36 （2H，d，J＝8.5 Hz，H-2′，6′），6.83 （2H，d，J＝8.5 Hz，H-3′，5′），5.92（1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），5.88 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），4.98 （1H，d，J＝11.6 Hz，H-2），4.98 （1H，d，J＝11.6 Hz，H-3）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ： 85.0 （C-2），73.6 （C-3），198.5 （C-4），165.3 （C-5），97.3 （C-6），168.7 （C-7），96.2 （C-8），164.5 （C-9），101.8（ C-10 ），130.4 （ C-1′），129.3 （ C-2′，6′），116.1 （C-3′，5′），159.2 （C-4′）。以上数据与文献［26］ 基本一致，故鉴定为香橙素。

5 α-葡萄糖苷酶抑制活性

参照文献［27］ 报道方法，采用PNPG 法对总提取物、各萃取部位浸膏和分离得到的化合物进行α-葡萄糖苷酶抑制活性测定并计算IC50值。以阿卡波糖为阳性对照，其IC50值为 （4.36±0.11）ng/mL，受试样品以DMSO 溶解。结果显示，总提取物、石油醚部位、氯仿部位、正丁醇部位和水层浸膏的IC50值分别为（1.83±0.04）、（2.14±0.14）、（1.29±0.15）、（1.71±0.03）、（3.68±0.17）μg/mL。化合物1 的IC50值为 （29.48 ± 1.86）μmol/L，表现出较弱的抑制活性； 化合物4 ～5 对α-葡萄糖苷酶有一定程度的抑制活性，其IC50值分别为（0.50±0.07）、（0.71±0.07） μmol/L； 化合物2～3 和6～15 的IC50值均大于25 μmol/L。

6 结论

青钱柳是一种古老的物种，目前仅分布于我国南部、东南部等地区，其叶长期被制成茶饮，用于防治糖尿病等代谢性疾病。为了进一步的明确青钱柳叶降糖的物质基础，本实验对其化学成分开展研究，综合运用多种色谱方法、计算ECD 等技术，从青钱柳叶的乙醇提取物中分离并鉴定了15 个化合物，包括1 个新的三羟基四氢萘醇苷（1），6 个首次从青钱柳叶中分离得到的黄酮类化合物4 ～5、8～10、14。其中，化合物4～5 的骨架结构是黄烷-3-醇与苯丙酸杂合而成，为一对比较少见的黄酮木脂素类化合物。目前，此类化合物仅在兔眼越橘（Vacciniumashei）［11］、钝叶号角树 （Cecropia obtusifolia）［12］、刺篱木（Flacourtiaindica）［13］、尖叶饱食桑英 （Brosimumacutifolium）［14］和Ocotea diospyrifolia［28］中被发现，上述化合物的发现进一步丰富了青钱柳叶中化学成分类型。此外，为了探究青钱柳叶的降糖作用，采用PNPG 方法评价其提取物以及分离纯化得到的化合物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。结果显示，青钱柳95% 乙醇总提取物具有一定的活性，其中氯仿和正丁醇部位比总提取物抑制活性好，石油醚部位和水层比总提取物抑制活性差； 新化合物1 抑制活性相对较弱，化合物4 和5 均具有潜在的抑制活性。