辽宁中部地区鲤“红嘴病”的病原菌筛查及防治

唐治宇，徐小雅，关 丽

(辽宁省现代农业生产基地建设工程中心，辽宁 沈阳 110032)

沈阳、辽阳两市为辽宁省中部淡水鱼养殖主产区，以鲤、草、鲫等品种养殖为主。2023年4－5月，辽宁中部地区的淡水养殖池塘中暴发了一种急性传染性疾病，在发病2个月左右时间内造成大批鲤科鱼死亡，主要品种为鲤，鲫、草鱼等品种也逐渐出现该病。病因不明，因病鱼嘴发红，当地俗称“红嘴病”，死亡率高达20%，造成严重的经济损失。笔者单位接到养殖户求助电话后对该地区池塘养殖发病的鲤鱼进行现场调查采样，经中心省级水生动物疫控实验室筛查后确定为维氏气单胞菌感染。本文就此病检测及防治情况介绍如下，以期对今后鲤“红嘴病”的防治提供参考。

一、发病情况

2023年4月初至5月末，辽宁省沈阳市辽中区部分池塘养殖的鲤(建鲤、镜鲤)陆续发病，与此同时，相邻区域辽阳市灯塔地区单品种精养池塘也相继发病。发病时水温为22℃以下，发病个体在250～1 000克/尾。

二、临床病理变化

病鱼发病初期精神萎顿，游动缓慢，不到饵料台附近摄食，食欲渐绝，随后出现“溜边”“打晃”“侧倒”，陆续出现死亡，直至当地池塘水温升高到25℃以上，发病率逐渐降低，发病死亡持续2 月余。鱼一旦染病，基本无治愈，死亡率很高。本病典型症状为红嘴、红头，并伴有凸眼、烂鳃、鳍条及体表腹部充血、泄殖腔红肿现象。解剖后发现肌肉严重充血、体腔内壁有出血点，鳔外膜充血、脾充血肿大呈紫黑色，肠道内食糜少或无。

三、实验室诊断

1.病原分离培养 笔者单位疫控中心检测人员选取2 尾具有典型症状濒死状态的鲤“红嘴病”病鱼样品，以无菌操作从体表(红嘴部)、肝胰脏、肾脏、脾脏组织取样接种于脑心浸液琼脂平板上，在28℃恒温培养箱中培养28 小时，均出现一种正圆形、表面湿润、直径2毫米左右的灰白色纯培养物(编号：HZ1)。

2.生理生化鉴定 采用杭州滨和微生物试剂有限公司生产的细菌微量生化反应管，用微量移液器在每支微量管中加入25微升的被检菌液(菌液浊度为0.5 麦氏单位)，同时接种一支同化对照管作阴性对照，再放入35℃培养箱孵育24～48 小时，取出观察结果。鉴定结果显示，在进行的35项生理生化鉴定中(见表1)，除纤维二糖的结果不同之外，分离株HZ1与维氏气单胞菌模式种的其余项目结果完全相同。上述反应结果表明，菌株HZ1可能是维氏气单胞菌。

表1 分离菌株与维氏气单胞菌生理生化特征比较

3.16s rDNA 序列测定 在生化鉴定的基础上，采用DNA 提取试剂盒对该纯培养物进行DNA 提取并进行16s rDNA 扩增，在约 1 500bp 时获得扩增片段(见图1)，测序后在生物数据库(NCBI)上进行比对，结果显示分离菌株与维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)的同源性最高，序列相似性达100%(ID:cp024933.1)。因此，结合分离菌株形态、生化特性及16s rDNA 鉴定结果将其鉴定为维氏气单胞菌。

4.药敏试验 采用杭州滨和微生物试剂有限公司生产的革兰氏阴性杆菌药敏试剂盒，运用纸片扩散法定性测定革兰氏阴性杆菌在体外对氨卞西林、头孢唑啉、头孢他啶等17 种抗菌药物的敏感性。将选取的17 种药敏纸片贴于平板上，然后于26℃培养箱中培养24 小时后测量抑菌圈直径，判断菌株对抗生素的敏感性。通过药敏试验发现，本病病原菌株对头孢他啶、妥布霉素、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟、氨曲南、氧氟沙星、头孢吡肟、头孢西叮、哌拉西林等10 种药物敏感；对头孢哌酮、卡那霉素、头孢噻吩、链霉素等4 种药物中度敏感；对氨苄西林、麦迪霉素、头孢唑啉等3种药物不敏感。

四、防治措施

据相关资料报道，维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)广泛存在于淡水、海水及污泥等多种水体生态系统中，对多种水生动物具有较强感染性和致病力，对水产养殖业具有较大危害性。因此，针对本次沈阳中部地区鲤鱼池塘养殖中由于感染维氏气单胞菌造成的“鲤红嘴”病，应采取“以防为主、防重于治”的原则。在治疗上可依据药物敏感性试验结果，有针对性地采用内服敏感抗菌素，同时外用消毒药物进行治疗。从此次实验结果来看，维氏气单孢菌对头孢类药物及喹诺酮类药物较敏感，可在养殖过程中用于拌饵投喂，来防治“红嘴”病，具体用量需结合生产实际。除此以外，在生产过程中，常用氟苯尼考、恩诺沙星等拌料投喂，用量为30毫克/千克,每天3 次，连用5 天。同时采用二氧化氯、溴氯海因对养殖水体进行消毒，每天1次，连续使用2天。

预防方面主要做好以下几点：一是提高池塘越冬前后管理。因东北冬季漫长，池塘越冬鲤近半年未摄食，且在高密度的环境下本身处于虚弱和应激的状态，要靠自身去恢复体质是很慢的过程，这也是此病在开春后大规模暴发的原因之一。在提高饲料品质的同时，可在饲料中添加维生素、益生菌、中草药和酶等物质，以增强鱼体的免疫力。二是培育良好水质。水质的恶化，如氨氮、亚硝酸盐等含量过高，会直接导致鱼体免疫力降低，调查发现，所有水质较好的池塘，即使发病，死亡数量也相对较少。反之水质差的池塘，发病率与死亡率都较高。因此，要重视对水质、底质的管理，对水质参数要定期监测，了解动态变化，及时调节不利于鱼生长和抗病力的因素。三是控制放养密度。在一定范围内,池塘苗种的放养量与经济效益成正比，但超过池塘的最大载鱼量，会导致水体富营养化，影响养殖动物的生长，同时增加养殖管理和水质管控难度，发病率和死亡率大幅升高，因此盲目增大苗种的放养量往往会得不偿失。