老年非小细胞肺癌患者EGFR、CyclinD1、CGA、CK7与临床病理特征及预后的关系

于层 徐丽娟 方超 聂奔

(青岛市中医医院(市海慈医院) 青岛大学附属青岛市海慈医院 1病理科,山东 青岛 266033;2肿瘤科)

我国癌症新发病例约占全球新发病例的23%,约占全球死亡病例的30%〔1〕。非小细胞肺癌占癌症总数的15%～20%,早期症状不典型,容易被忽视,当出现声音嘶哑、血痰、上肢水肿等典型临床症状时已处于晚期〔2〕。随着近年来肿瘤治疗技术的进步,涌现出了免疫治疗、靶向治疗、介入治疗等多种新型治疗手段,晚期非小细胞肺癌患者病情复杂,加之老年患者身体功能出现不同程度降低,准确评估预后对治疗方案的合理制定具有重要意义〔3〕。表皮生长因子受体(EGFR)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、嗜铬粒蛋白(CG)A、细胞角蛋白(CK)7是近年来研究发现的肿瘤标志物,在乳腺癌、肺癌等患者中表达特点已有部分研究报道〔4,5〕,但关于其在老年非小细胞肺癌患者预后评估中的应用价值仍未见研究报道。本研究旨在探讨老年非小细胞肺癌患者EGFR、CyclinD1、CGA、CK7与临床病理特征及预后的关系。

1 对象与方法

1.1研究对象 选取2019年1月至2020年3月青岛市中医医院收治的老年非小细胞肺癌患者95例。入选标准:①年龄≥60岁,经组织病理学检查确诊为非小细胞肺癌;②治疗方案参照美国NCCN非小细胞肺癌指南进行规范化治疗;③符合手术适应证,自愿行手术治疗,出院后自愿接受跟踪随访。排除标准:①合并认知障碍、重要脏器功能异常、精神性疾病者;②同时存在其他恶性肿瘤者;③复发性非小细胞肺癌。患者平均年龄(68.52±7.39)岁;本研究经医院伦理委员会审核批准,患者签署知情同意书。

1.2EGFR、CyclinD1、CGA、CK7表达检测 收集老年非小细胞肺癌患者手术切除的肿瘤组织和癌旁正常组织标本,常规石蜡包埋后切片,免疫组化法检测EGFR、CyclinD1、CGA、CK7表达水平。具体过程:组织切片乙醇水化后用磷酸缓冲液浸洗3次,使用3%过氧化氢孵育30 min,去除内源性过氧化物酶活性,之后磷酸缓冲液浸洗3次;放入枸橼酸盐抗原修复溶液中95 ℃修复20 min,室温下冷却,加入山羊血清封闭液(10%)静置20 min。滴加鼠抗人EGFR单克隆抗体、鼠抗人CyclinD1单克隆抗体、兔抗人CGA单克隆抗体、兔抗人CK7单克隆抗体,稀释倍数均为1∶1 000,同时滴加鼠抗人β-actin单克隆抗体,稀释倍数为1∶2 000;滴加辣根过氧化物酶标记的二抗,稀释倍数1∶4 000,磷酸缓冲液洗片3次,每次3 min;二氨基联苯胺(DAB)显色、苏木素复染1 min,脱水、封片,梯度乙醇脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。

1.3免疫组化结果判读 将切片放于光学显微镜下计数,放大倍数400倍,随机计数200个细胞,计算阳性细胞比例,根据阳性细胞比例和染色强度进行评分。阳性细胞比例:0%～4%(0分)、5%～19%(1分)、20%～49%(2分)、≥50%(3分)。染色强度:无色(0分)、浅棕色(1分)、棕黄色(2分)、棕褐色(3分)。以阳性细胞比例评分与染色强度评分的乘积判定结果,阴性(0分)、弱阳性(1～2分)、中等阳性(3～4分)、强阳性(>4分),将中等阳性和强阳性记为阳性。

1.4资料收集与随访 收集患者人口学特征(性别、年龄、吸烟史),临床病理指标(组织学类型、TNM分期、淋巴结转移情况、分化程度、被膜侵犯情况、肿瘤直径)。出院后进行3年随访,采取定期来院复查、患者自感不适时随访的方式进行,通过影像学结合病理检查进行诊断,将肿瘤手术切除的残端发生病变纳入复发组,其余纳入未复发组。

1.5统计学分析 采用SPSS25.0软件进行方差分析、LSD-t检验及χ2检验。使用受试者工作特征(ROC)曲线检测EGFR、CyclinD1、CGA、CK7阳性率对老年非小细胞肺癌患者预后的评估价值。

2 结 果

2.1肿瘤组织与癌胚组织EGFR、CyclinD1、CGA、CK7阳性表达率比较 肺癌组织EGFR、CyclinD1、CGA、CK7阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.01)。见表1。

表1 肿瘤组织与癌胚组织EGFR、CyclinD1、CGA、CK7阳性表达率比较〔n(%),n=95〕

2.2不同预后患者EGFR、CyclinD1、CGA、CK7阳性率比较 95例老年非小细胞肺癌患者随访期间病情复发57例(60.00%)。复发组EGFR、CyclinD1、CGA、CK7阳性率明显高于未复发组(P<0.01)。见表2。

2.3不同临床病理特征患者EGFR、CyclinD1、CGA、CK7阳性表达率比较 EGFR、CyclinD1、CGA、CK7阳性表达率在不同性别、年龄、吸烟史、肿瘤直径患者间比较差异均无统计学意义(P>0.05);EGFR、CyclinD1、CGA、CK7阳性表达率在不同组织学类型、TNM分期、淋巴结转移、分化程度、被膜侵犯情况比较差异有统计学意义(P<0.01)。见表3。

2.4不同预后患者临床病理特征比较 两组性别、年龄、吸烟史、组织学类型比较差异无统计学意义(P>0.05);两组被膜侵犯、淋巴结转移、TNM分期、分化程度、肿瘤直径比较差异有统计学意义(P<0.01)。见表4。

表4 不同预后患者临床病理特征比较〔n(%)〕

2.5老年非小细胞肺癌患者预后多因素Logistic回归分析 以老年非小细胞肺癌患者预后情况为因变量(未复发=0,复发=1),被膜侵犯、淋巴结转移、TNM分期、分化程度、肿瘤直径及EGFR、CyclinD1、CGA、CK7表达情况为自变量,进行多因素Logistic回归分析显示,淋巴结转移、TNM分期、分化程度、EGFR、CyclinD1、CGA、CK7是患者预后的独立影响因素。见表5。

表5 老年非小细胞肺癌患者预后的多因素Logistic回归分析

2.6EGFR、CyclinD1、CGA、CK7对老年非小细胞肺癌患者预后的评估价值分析 EGFR、CyclinD1、CGA、CK7阳性率对患者预后均具有较高的评估价值(P<0.01);其中各指标联合检测对患者预后的评估价值最高〔曲线下面积(AUC)=0.950〕,特异度、阳性评估值均明显高于各指标单独检测。见图1、表6。

图1 EGFR、CyclinD1、CGA、CK7评估老年非小细胞肺癌患者预后的ROC曲线

表6 EGFR、CyclinD1、CGA、CK7对老年非小细胞肺癌患者预后的评估价值

3 讨 论

肺癌位居我国恶性肿瘤致死疾病的第一位,呈上升趋势〔6〕,非小细胞肺癌是原发性肺癌最常见的类型,具有恶性程度高、侵袭力强的特点,超过60%的肺癌患者就诊时已达到晚期〔7〕。EGFR属于表皮生长因子受体家族,在人体成纤维细胞、上皮细胞等细胞表面均有分布,能够调节细胞增殖、分化等过程〔8〕。超过50%的非小细胞肺癌患者肿瘤组织中EGFR呈不同程度高表达,EGFR基因突变率约为48%〔9〕。亦有研究显示,EGFR过表达参与肿瘤细胞的增殖、分化、转移、血管生成等过程〔10〕。CyclinD1在细胞周期调控中发挥重要作用,能够使细胞从G1期转化为S期,当其过表达时会缩短细胞周期,促进细胞增殖,导致细胞恶性转化〔11〕。CGA是一种神经肽类物质,为可溶性抗原颗粒化糖蛋白,具有亲水性,广泛存在于神经系统、肾上腺髓质系统等正常细胞中。神经内分泌肿瘤中普遍存在CGA高表达〔12〕;CGA参与调节神经内分泌系统中活性物质的储存、释放,动态监测可用于评估肿瘤预后〔13〕。CK7是一种碱性细胞角蛋白,稳定表达于上皮组织中,在肺、乳腺、胰腺等组织中也存在表达〔14〕。相关研究显示,CK7能够诱发细胞恶性病变,作为恶性病变和进展的启动因子,在恶性肿瘤组织中高表达〔15〕;CK7可诱导形成肿瘤细胞侵袭性伪足,加速细胞增殖和淋巴结转移,是不良预后的主要原因之一〔16〕。

本研究结果提示,EGFR、CyclinD1、CGA、CK7在老年非小细胞肺癌患者中高表达,且与组织学类型、TNM分期、淋巴结转移、分化程度、被膜侵犯情况密切相关。临床病理特征与患者病情严重程度密切相关,通过EGFR、CyclinD1、CGA、CK7检测可以有效评估老年非小细胞肺癌患者的病情严重程度,为指导临床治疗提供参考依据。本文老年非小细胞肺癌患者疾病复发率(60.00%)与相关研究中老年非小细胞肺癌患者3年复发率58.2%、61.75%基本一致〔17,18〕,说明患者总体预后仍不理想,需要在治疗方案选择上进一步优化。本研究结果表明,有淋巴结转移、TNM分期高、分化程度低的患者肿瘤恶性程度高,治疗难度大,预后不理想。EGFR、CyclinD1、CGA、CK7阳性率对患者预后均具有较高的评估价值,其中各指标联合检测的评估价值最高,可用于老年非小细胞肺癌患者的预后评估,为治疗方案的选择提供参考依据。