东莞地区人群PHACTR1基因多态性与冠心病的相关性

连新龙

(东莞市寮步医院,广东 东莞 523000)

中国的流行病学报告显示,2020年因心血管疾病死亡的人数约400万[1]。随着社会经济发展和生活习性改变,心血管疾病的危险因素,如高血压、血脂异常、肥胖和糖尿病等在我国人群中的患病率均明显增加[2-3]。而冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)是导致心源性猝死的主要疾病,包括心肌梗死、心绞痛和冠状动脉硬化。如何减少CHD危险因素,降低其发病率和死亡率,已成为重大公共卫生问题。近年来,由生物标志物引领的个体诊断及治疗逐渐兴起,研究显示,基因检测后进行干预,可以明显降低心脏病的发病率[4]。磷酸酶和肌动蛋白调节因子1(PHACTR1)基因位于染色体6p24位点,是PHACTR1-4家族的一种,可以通过增加低密度脂蛋白的氧化促进动脉粥样硬化(AS)的发生与发展[5]。AS是CHD发病的关键原因,因此PHACTR1基因可能与CHD发病相关。因此,本研究探讨PHACTR1基因位点多态性与东莞地区人群中冠心病易感性的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料:研究经过东莞市寮步医院医学伦理委员会同意,选取东莞地区的CHD患者50例为CHD组,同时选取50例在年龄、性别与之相匹配的正常患者作为对照组,两组患者均为居住于东莞市10年以上人群,采集年龄、性别、体重、吸烟史、既往病史等相关信息。其中CHD组患者纳入标准为:①行冠状动脉造影术介入检查结果明确诊断为CHD患者,②入选患者为东莞市地区汉族人,且彼此间无血缘关系,CHD组患者中有男34例,女16例,平均年龄(63.28±8.94)岁。对照组患者的纳入标准为:①同期健康体检排除CHD的患者,其中男28例,女22例,年龄(57.37±10.12)岁。

1.2方法

1.2.1CHD诊断方法:入选冠心病患者均以冠状动脉血管造影(CAG)结果为诊断标准。方法:经桡动脉或股动脉途径,采用5F公用导管行选择性左、右脉状动脉造影。结果显示,左冠状动脉至少行4个及4个以上的体位投影,右冠状动脉至少行2个以上的体位投影,以明确判断冠状动脉狭窄程度。CHD诊断标准:造影示左主干、左前降支、左回旋支或右冠状动脉至少有1支管腔直径狭窄≥50%。

1.2.2PHACTR1基因多态性检测:于CAG 前抽取所有受试者的外周静脉血5 ml,采用蛋白酶K处理,使用常规苯酚氯仿法提取基因组DNA。对PHACTR1基因rs1223397位点、rs2026458位点、rs475543位点、rs693758位点、rs9349379位点和rs9472419位点的DNA片段进行PCR扩增。PCR产物经过2%琼脂糖凝胶电泳后,割取大小一致的目的条带,最后使用DP214-03回收试剂盒纯化回收。在进行Sanger测序实验后,使用测序仪(3730xl)进行测序,测序结果使用DNA Sequencing analysis软件和Sequencher 5.1软件包进行分析和对比。

1.3观察指标:分别收集所有研究对象的年龄、性别、体重指数(BMI)、吸烟史、既往病史等相关信息。同时,所有研究对象还于清晨空腹采集外周血,运用全自动生化仪测定低密度脂蛋白(LDL)、糖化血红蛋白(HbA1c)等相关指标。同时收集对所有研究对象的外周静脉血样本提取样本DNA,选择rs1223397位点、rs2026458位点、rs475543位点、rs693758位点、rs9349379位点和rs9472419位点,运用检测技术检测6号染色体上常见单核普酸多态(SNPs)位点进行检测及基因分型。

1.4统计学分析:本研究涉及的所有数据采用SPSS 24.0统计软件进行处理。采用χ2、t检验或秩和检验。

2 结果

2.1基线资料比较:对两组的基线资料进行比较,见表1。发现CHD组的和对照组之间的性别和BMI等方面比较,差异无统计学意义(P>0.05)。而CHD组患者的年龄分布较大,吸烟史、LDL和HbA1c等方面进行比较,CHD组患者显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。

表1 两组一般资料比较

2.2基因型比较:对PHACTR1基因的多态性进行检测后发现,在东莞地区人群中,PHACTR1基因rs1223397位点存在CC/GC/GG三种基因型、rs2026458位点存在CC/CT/TT三种基因型、rs475543位点存在AA/AG/GG三种基因型、rs693758位点存在AA/AG/GG三种基因型、rs9349379存在AA/GA/GG三种基因型、rs9472419存在CC/CT/TT三种基因型,具体分布频率见表2。两组间PHACTR1基因rs1223397位点、rs2026458位点、rs475543位点、rs693758位点、rs9349379位点和rs9472419位点的基因型进行比较,发现差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 两组PHACTR1基因不同位点基因型频率比较(n,n=50)

3 讨论

PHACTR1基因共包含20个外显子和19个内含子,可以编码蛋白磷酸酶1(PP1)和细胞质内的肌动蛋白构成的结合蛋白,具有遗传多态性[6]。PHACTR1基因编码蛋白在心脏和脑的内皮细胞,特别是动脉内皮细胞中高度表达,在内皮小管生成、运动和凋亡的调节过程中发挥重要作用[7-8]。PHACTR1蛋白由接近500个氨基酸组成,能够有效抑制PP1的功能[9]。PP1受抑制后,可以限制一氧化氮合酶的去磷酸化过程,从而影响一氧化氮在内皮细胞中的合成,而一氧化氮在心脏保护中起多种作用,如扩张血管、抑制血小板、抗氧化、抗凝血和抗血栓等[10]。因此,PHACTR1基因在保护心脏中起重要作用。JARRAY等的研究也证实,PHACTR1 表达的下调会诱导AS过程中的关键成分激活,如氧化低密度脂蛋白受体、凝血酶、凝血酶受体1等促炎蛋白,同时,还可以诱导氨基脲敏感胺氧化酶(SSAO)和TGF-β诱导基因h3(βIG-H3)等AS生物标记物的出现,证实了PHACTR1蛋白在AS发病机制中的关键作用[11]。

2009年,KATHIRESAN等首次报道PHACTR1基因多态性与冠心病的发生有关[12]。国内学者Zhang等[13]也进行了一项全基因组关联研究,发现PHACTR1基因rs2026458位点与颈动脉和主动脉弓钙化密切相关,而rs9349379位点无明显相关性。BEAUDOIN等的研究也证实,PHACTR1基因rs9349379位点的多态性与CHD和心肌梗死有关[14]。众所周知,种群内部遗传变异也可能导致等位基因出现频率差异和连锁不平衡结构,VARGAS等的研究也证明,不同种族间,PHACTR1基因不同位点的多态性与CHD之间的相关性具有差异[15]。

综上所述,东莞地区汉族人群PHACTR1基因rs1223397位点、rs2026458位点、rs475543位点、rs693758位点、rs9349379位点和rs9472419位点的多态性可能与CHD的发生无明显相关性。但本研究是一项单中心小样本研究,同时存在幸存者偏差,因CHD死亡的患者未能入组,因此,存在一定的局限性。但本研究可以作为今后多中心、大样本、长时间随访研究的基础,为其提供一定的参考。