基于UPLC-Q-TOF-MS 和网络药理学技术的扫日劳清肺止咳胶囊质量标志物的研究

邹兆祚，上官同强，杨华杰，3，罗颖颖，3，吕尚，3，杨双玲，李雪艳，罗钰颖，饶毅（.江西中医药大学，江西 南昌 330004；.赤峰天奇制药有限责任公司，内蒙古 赤峰 04000；3.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西 南昌 330006）

咳嗽、咳痰为呼吸系统疾病的常见症状，病理表现主要以慢性气管炎症、气道高阻力为典型特征[1]。扫日劳清肺止咳胶囊（简称扫日劳胶囊）源于蒙医传统方剂七味沙参汤，由北沙参、诃子、栀子、茜草等中药组成。其作为蒙医治疗肺热病的主要方剂已沿用上千年，疗效显著，是治疗肺热、咳嗽、痰多的良药[2]。扫日劳胶囊质量研究较少，现行标准以栀子苷作为含量测定指标[3]，而单一成分的含量测定无法体现中医药整体性的特点。制定合理的质量控制标准是其产业发展的关键一步。

质量标志物（quality marker，Q-marker）是刘昌孝院士提出的中药质量控制概念，其基于药物成分的有效性、特有性、传递与溯源、可测性以及复方配伍“五原则”，现已在中药的质量控制研究中广泛应用，对中药的质量控制研究具有重要意义[4]。本实验采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱（UPLCQ-TOF-MS）技术定性分析扫日劳胶囊中的化学成分，从特有性和传递与溯源角度对其Q-marker 进行分析；并通过网络药理学技术及药效学实验筛选和验证具有镇咳、祛痰作用的化学成分，从有效性角度对其Q-marker 进行分析，以期为扫日劳胶囊的质量控制提供参考依据。

1 材料

1.1 动物SPF 级的昆明种小鼠，体质量（20±2）g，湖南斯莱克景达实验动物有限公司，生产许可证号：SCXK（湘）2019-0004，使用许可证号：SYXK（赣）2022-0002。动物均饲养于江西中医药大学实验中心，饲养环境：相对温度（24±2）℃、相对湿度（50±10）%、12 h/12 h 明暗交替。本研究经江西中医药大学实验动物伦理会审核批准（批准号：20230313022）。

1.2 试药咳特灵片（批号：4220009），广州白云山制药总厂；氯化铵（批号：K1702095），阿拉丁公司；浓氨水（批号：20210709），广东光华科技股份有限公司；碳酸氢钠（批号：20220514）、羧甲基纤维素钠（批号：F20070608），国药集团化学试剂有限公司；栀子苷（批号：110749-201919）、没食子酸（批号：110831-201906）、咖啡酸（批号：110885-201703）、绿原酸（批号：110753-201716）、东莨菪内酯（批号：110768-200504）、芦丁（批号：100080-202012）、阿魏酸（批号：110773-201614）、大叶茜草素（批号：110884-202107）对照品，中国食品药品检定研究院；法卡林二醇（批号：001826-202211）、川楝素（批号：030002-202105）对照品，江西佰草源生物科技有限公司；羟基茜草素对照品（批号：220522），成都植标化纯生物技术有限公司；法卡林醇对照品（批号：wkq22112903），四川省维克奇生物科技有限公司；乙腈、甲酸为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

本实验所用扫日劳胶囊总提物由赤峰天奇制药有限责任公司提供，批号：D22-005。

1.3 仪器AB Sciex Triple TOF®5600+高分辨飞行时间质谱仪（美国AB SCIEX 公司）；Shimadzu LC-30A超高效液相色谱仪（日本Shimadzu 公司）；MS205DU十万分之一电子天平（德国梅特勒托利多公司）；SpectraMax I3 多功能酶标仪（美谷分子仪器有限公司）；KQ-5200DE 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Mili-Q 超纯水仪（美国密理博公司）；KDW 控温电热套（山东鄄城华鲁仪器公司）；R-210旋转蒸发仪（瑞士步琦公司）。

2 方法与结果

2.1 扫日劳胶囊化学成分分析

2.1.1 色谱条件 色谱柱：ACQUITY UPLC®BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；流动相：乙腈（A）-0.1%甲酸水（B），梯度洗脱（0～3 min，95%～90%B；3～20 min，90%～80%B； 20～35 min，80%～40%B；35～40 min，40%～25%B；40～45 min，25%B）；流速：0.3 mL·min-1；进样量：3 μL；柱温：40 ℃；样品仓温度：4 ℃。

2.1.2 质谱条件 正离子模式：离子源温度（TEM）：550 ℃；气帘气压力（CUR）：30 psi；辅助气1 压力（GS1）和辅助气2 压力（GS2）：50 psi；离子喷雾电压（ISVF）：4.5 kV；碰撞能量（CE）：35 V；碰撞能量补充（CES）：15 V；去簇电压（DP）：100 V。负离子模式：TEM：550 ℃；CUR：30 psi；GS1 和GS2：50 psi；ISVF：4.5 kV；CE：-30 V；DP：-100 V。m/z范围：50～1 250 Da。数据通过Analyst®TF 1.6 工作站获取。

2.1.3 供试品溶液制备 精密称取2 g 扫日劳胶囊总提取物，依次用不同极性溶剂等体积萃取5次，减压蒸除溶剂，依次得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水提取物。精密称取上述总提取物2 g 及所得各极性提取物，精密加入70% 乙醇25 mL，称定质量，超声处理30 min，称定质量；用70% 乙醇补足减失质量，过0.22 μm滤膜，即得。

2.1.4 对照品溶液制备 精密称取对照品法卡林醇、法卡林二醇、栀子苷、大叶茜草素、羟基茜草素、没食子酸、咖啡酸、绿原酸、东莨菪内酯、芦丁、阿魏酸、川楝素适量置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度后，精密吸取1 mL 置于25 mL 量瓶中。加甲醇稀释至刻度后，制成质量浓度分别为39.32、22.16、35.92、41.52、33.16、41.48、19.24、23.28、21.84、26.08、37.92、29.68 μg·mL-1的混合对照品溶液。

2.1.5 扫日劳胶囊化学成分数据库创建和分析 参考相关研究[5-10]，利用PubChem（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）、Chemical Book（https：//www.chemical⁃book.com/ProductIndex.Aspx）数据库进行数据采集，整理扫日劳胶囊中7味药材所含的化学信息，包括化学成分、结构式、分子量等，构建扫日劳化学成分专属数据库，并将所有化合物分子式导入PeakView软件中，利用其插件XIC Manager 进行数据处理，获得不同模式下化学式对应的质荷比及色谱峰的一级（误差小于5×10-6）、二级质谱，确认推断成分。

2.1.6 扫日劳胶囊定性分析研究结果 根据化合物相对分子质量及碎片信息，扫日劳胶囊总提取物中共获得120 个化合物，见表1。其中酚酸类25 个，糖苷类8 个，环烯醚萜类6 个，鞣质类6 个，醌类26 个，香豆素类15个，聚炔类3个，木脂素类3个，黄酮类8个，三萜类9个，其他11个。

表1 扫日劳胶囊化学成分信息表Table 1 Chemical composition information of Saorilao Capsules

在不同极性提取物中，石油醚提取物中含有44 个化合物，主要含聚炔类（法卡林醇、法卡林二醇等）、醌类（大叶茜草素、羟基茜草素等）和香豆素类（欧前胡素、伞形花内酯等）成分；乙酸乙酯提取物中含有85个化合物，主要含聚炔类（法卡林醇、法卡林二醇等）、醌类（大叶茜草素、羟基茜草素等）、酚酸类（没食子酸、桂皮酸、水杨酸等）和环烯醚萜类（栀子苷、京尼平等）成分；正丁醇提取物中含有79 个化合物，主要含环烯醚萜类（栀子苷、京尼平等）、醌类（大叶茜草素、羟基茜草素等）、酚酸类（没食子酸、绿原酸、水杨酸等）和黄酮类（芦丁、槲皮素等）成分；水提取物中含有71个化合物，主要含环烯醚萜类（栀子苷、京尼平等）、酚酸类（藏红花酸、没食子酸、咖啡酸等）和糖苷类（京尼平-1-β-龙胆二糖苷等）成分。扫日劳胶囊正、负离子模式总离子流图见图1和图2。

图1 扫日劳胶囊正离子模式下总离子流图Figuer 1 The total ion flow chart of Saorilao Capsules in positive ion mode

图2 扫日劳胶囊负离子模式下总离子流图Figuer 2 The total ion flow chart of Saorilao Capsules in negative ion mode

2.2 扫日劳胶囊不同极性提取物的药效实验本研究采用氨水致小鼠咳嗽和小鼠酚红排泄实验观察镇咳和祛痰作用。咳特灵的镇咳作用确切，用于治疗咳喘和慢性支气管炎等疾病[11]。氯化铵对黏膜具有化学性刺激，能反射性的增加痰量，使痰液易于排出，具有祛痰作用。因此，选择咳特灵和氯化铵分别作为镇咳和祛痰实验的阳性药。

2.2.1 药物制备及给药 不同极性提取物的制备：精密称取扫日劳胶囊总提取物适量，溶于一定量的水中，依次用不同极性溶剂等体积萃取5次，减压蒸除溶剂，依次得到石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和水提取物。取上述提取物用一定量的水溶解，配制成剂量为1.131 g·kg-1的混悬液，备用。

预试验发现，扫日劳胶囊总提物给药剂量为1.131 g·kg-1时有明显的镇咳、祛痰作用。故确定不同极性提取物的给药剂量为1.131 g·kg-1（按总提物计算）。咳特灵的给药剂量为0.420 g·kg-1，氯化铵的给药剂量为1 g·kg-1。对照组灌胃等量生理盐水，给药体积为20 mL·kg-1。

2.2.2 镇咳作用 将小鼠随机分为对照组、咳特灵阳性组及各不同极性提取物组，每组10 只。自由进食饮水，连续给药3 d。在末次给药前16 h 禁食不禁水。采用浓氨水喷雾法[12]，严格按照文献实验步骤进行操作，记录每只小鼠在接受30 s 喷雾浓氨水后3 min内的咳嗽潜伏期及咳嗽次数。

2.2.3 祛痰作用 同“2.2.2”项下方法进行分组，自由进食饮水，连续给药3 d。在末次给药前16 h 禁食不禁水。采用小鼠气管酚红排泄实验法进行实验[12]，严格按照文献的实验步骤进行操作，根据酚红标准曲线计算出每只小鼠酚红排泄量。

2.2.4 结果 见表2。镇咳实验中，与对照组比较，咳特灵阳性组、总提取物和石油醚提取物能显著延长小鼠的咳嗽潜伏期（P＜0.05）。咳特灵阳性组、总提取物组、石油醚提取物组、乙酸乙酯提取物组及正丁醇提取物组能显著减少小鼠在3 min 内的咳嗽次数（P＜0.01 或P＜0.05），且扫日劳胶囊总提物镇咳作用有强于咳特灵的趋势。祛痰实验中，与对照组相比，氯化铵阳性组、总提取物组、乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组及水提取物组均能显著地增加小鼠的酚红排泄量（P＜0.01），且扫日劳胶囊总提物祛痰作用有强于阳性药氯化铵的趋势。对石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水4 个提取物药效结果对比发现，石油醚提取物的镇咳作用最强，正丁醇提取物的祛痰作用最强。

表2 扫日劳胶囊不同极性提取部位药效实验结果（±s，n=10）Table 2 Pharmacodynamic experimental data of different polarity fractions of Saorilao Capsules（±s，n=10）

表2 扫日劳胶囊不同极性提取部位药效实验结果（±s，n=10）Table 2 Pharmacodynamic experimental data of different polarity fractions of Saorilao Capsules（±s，n=10）

注：与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

酚红排泄量/（mg·L-1）3.38±0.87-18.70±1.48**20.62±2.37**4.85±1.85 8.15±1.12**13.02±2.26**8.84±1.38**组别对照组咳特灵阳性组氯化铵阳性组总提取物石油醚提取物乙酸乙酯提取物正丁醇提取物水提取物剂量/（g·kg-1）-0.420 1.000 1.131 1.131 1.131 1.131 1.131咳嗽潜伏期/s 20.40±4.72 29.10±4.48*-34.90±5.20*27.20±5.58*25.50±7.53 21.70±4.63 22.10±5.55 3 min咳嗽次数/次64.90±5.54 39.10±3.59**-36.80±3.57**41.10±4.44**46.10±4.35**57.10±4.50*59.40±4.76

结合液质解析结果，推测石油醚提取物中发挥镇咳作用的化学成分为聚炔类（法卡林醇、法卡林二醇等）及香豆素类（欧前胡素、伞形花内酯等）成分；正丁醇提取物中发挥祛痰作用的化学成分可能为环烯醚萜类（栀子苷、京尼平等）、酚酸类（没食子酸、绿原酸、水杨酸等）及黄酮类（芦丁、槲皮素等）成分；醌类成分（大叶茜草素、羟基茜草素等）可能同时发挥镇咳、祛痰作用。

2.3 扫日劳胶囊石油醚和正丁醇提取物的网络药理学研究据药效实验结果，扫日劳胶囊石油醚提取物镇咳作用最强，正丁醇提取物祛痰作用最强。因此，以扫日劳胶囊石油醚及正丁醇提取物中的化学成分构建“成分-靶点-疾病”网络，以筛选潜在的Qmarker。

2.3.1 化学成分及其靶点的筛选 通过Swiss ADME 数据库（http：//www.swissadme.ch/）进行成分筛选，以胃肠吸收得分为“High”、类药性至少通过3 个“YES”为条件对成分进行筛选[13]。进一步利用Swiss Target Prediction 数据库（http：//www.swisstarget prediction.ch/）进行靶点预测，以“Probability”大于0作为标准筛选成分靶点，并去除重复项。从石油醚提取物中筛选出化学成分31个，相应的靶点554个；正丁醇提取物中筛选出化学成分41个，相应的靶点537个。

2.3.2 疾病靶点的筛选 以cough（咳嗽），phlegm（痰）和hypersecretion of airway mucus（气道黏液高分泌）作为关键词，通过GeneCards 数据库（https：//www.genecards.org/）、OMIM（https：//www.omim.org/）、Drug Bank（https：//www.go.drugbank.com/）数据库检索相关靶点，汇总后删除重复值，收集到咳嗽靶点2 359个，祛痰靶点307个。

2.3.3 化学成分靶点-疾病靶点交集的获取 使用在线韦恩图制作工具（http：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venny/）获取成分靶点和疾病靶点的交集。结果得石油醚提取物成分-咳嗽交集靶点249 个，正丁醇提取物成分-祛痰交集靶点62个。见图3。

图3 扫日劳清胶囊石油醚和正丁醇提取物-疾病靶点的韦恩（Venny）图Figure 3 Venny plot of disease targets-petroleum ether extract of the Saorilao Capsules and disease targets-n-butanol extract of the Saorilao Capsules

2.3.4 成分-靶点-疾病网络的构建 使用Cytoscape 3.9.1软件，构建成分-靶点-疾病网络。见图4。度值（degree 值）代表直接相连的邻节点的数目，其值越大越可能是药物治疗疾病的关键靶点或关键成分。见表3。

图4 扫日劳胶囊石油醚提取物成分-靶点-咳嗽（A）和正丁醇提取物成分-靶点-咳痰（B）的网络图Figure 4 Network diagram of components in petroleum ether extract of Saorilao Capsules-target-cough（A）and components in n-butanol extract of Saorilao Capsules-target-expectoration（B）

表3 扫日劳胶囊的成分-靶点-疾病网络Degree 值前15 位的化学成分Table 3 Chemical components with degree value ranked top 15 from network of components of Saorilao Capsules-targets-diseases

结果显示，石油醚提取物网络中degree 值前15 位的成分主要为聚炔类（法卡林醇、法卡林二醇）、醌类（异戊酰紫草素、大叶茜草素等）和香豆素类（欧前胡素、珊瑚菜素等）等成分；正丁醇提取物网络中degree 值前15 位的成分主要为酚酸类（阿魏酸、咖啡酸等）、醌类（大叶茜草素、羟基茜草素等）等，与扫日劳胶囊不同极性提取物的药效结果一致。

作为质量标志物必须具有可测性[4]。已有研究[14-18]显示，扫日劳胶囊中含量较高的成分有法卡林醇、法卡林二醇、栀子苷、大叶茜草素、羟基茜草素、川楝素、没食子酸、左旋紫草素等。结合扫日劳胶囊不同极性提取物药效实验与网络药理学分析结果，可将法卡林醇、法卡林二醇和大叶茜草素作为扫日劳胶囊的潜在Q-marker，并进行进一步的验证研究。

2.4 扫日劳胶囊中药材提取物及单体的药效实验验证据报道[6，8]，法卡林醇和法卡林二醇来源于北沙参，大叶茜草素来源于茜草。结合上述结果，以北沙参、茜草提取物及3 个潜在的Q-marker 进行药效实验，以验证其有效性。

2.4.1 药物制备及给药 参考相关报道[19-22]设计给药剂量，北沙参提取物剂量为1.30 g·kg-1，茜草提取物剂量为1.56 g·kg-1（均按生药量计算）。大叶茜草素低、中、高剂量组为4、8、16 mg·kg-1。法卡林醇低、中、高剂量组为3、6、20 mg·kg-1。法卡林二醇低、中、高剂量组为1.5、3、10 mg·kg-1。对照组及阳性组同“2.2.1”项下。给药体积为20 mL·kg-1。

2.4.2 实验方法 同“2.2.2”项下。

2.4.3 结果 镇咳实验中，与对照组相比，茜草提取物组、大叶茜草素高剂量组和法卡林醇高剂量组均能显著延长小鼠的咳嗽潜伏期（P＜0.05）。北沙参提取物组，大叶茜草素中、高剂量组，法卡林醇高剂量组和法卡林二醇高剂量组能显著减少小鼠3 min 内的咳嗽次数（P＜0.01，P＜0.05）。法卡林醇和法卡林二醇中剂量组均能减少小鼠3 min 内的咳嗽次数，但差异无统计学意义（P＞0.05）。结果表明，北沙参提取物、大叶茜草素、法卡林醇及法卡林二醇具有一定的镇咳作用。见表4和表5。

表4 大叶茜草素对小鼠咳嗽和排痰的影响（±s，n=10）Table 4 The effect of rubimaillin on cough and phlegm ejection in mice（±s，n=10）

表4 大叶茜草素对小鼠咳嗽和排痰的影响（±s，n=10）Table 4 The effect of rubimaillin on cough and phlegm ejection in mice（±s，n=10）

注：与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

酚红排泄量/（mg·L-1）3.37±1.39-14.53±3.40**10.26±3.80**5.77±1.20 3.09±1.15 8.13±2.30**组别对照组咳特灵阳性组氯化铵阳性组茜草提取物组大叶茜草素低剂量组大叶茜草素中剂量组大叶茜草素高剂量组剂量/（mg·kg-1）-420 1 000 1 560 48 16咳嗽潜伏期/s 15.40±4.59 26.40±6.33*-24.30±4.82*15.70±5.83 22.80±5.79 24.70±5.98*3 min咳嗽次数/次46.60±3.88 30.80±3.89**-40.10±5.34 43.10±6.04 36.70±4.45**34.90±3.99**

表5 法卡林醇及法卡林二醇对小鼠咳嗽和排痰的影响（±s，n=10）Table 5 Effects of falcarinol and falcarindiol on cough and phlegm ejection in mice（±s，n=10）

表5 法卡林醇及法卡林二醇对小鼠咳嗽和排痰的影响（±s，n=10）Table 5 Effects of falcarinol and falcarindiol on cough and phlegm ejection in mice（±s，n=10）

注：与对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01

酚红排泄量/（mg·L-1）1.19±0.48-8.30±2.23**6.92±2.07**2.29±0.34 5.62±1.66**6.18±1.79**2.57±1.81 3.05±2.29 3.98±1.95组别对照组咳特灵阳性组氯化铵阳性组北沙参提取物组法卡林醇低剂量组法卡林醇中剂量组法卡林醇高剂量组法卡林二醇低剂量组法卡林二醇中剂量组法卡林二醇高剂量组剂量/（mg·kg-1）-420 1 000 1 560 36 20 1.5 3 10咳嗽潜伏期/s 7.50±3.2 13.10±4.0*-11.90±3.3 7.50±2.7 11.10±4.2 13.60±4.2*7.10±2.7 9.20±3.0 11.80±3.5 3 min咳嗽次数/次55.10±7.79 38.90±5.47**-42.80±5.29**53.20±6.98 46.20±6.24 42.90±7.03**53.40±5.70 47.10±4.80 44.20±5.40*

祛痰实验中，与对照组相比，茜草提取物、北沙参提取物、大叶茜草素高剂量和法卡林醇中、高剂量组均能显著增加小鼠的酚红排泄量（P＜0.01）。法卡林二醇各剂量组能增加小鼠的酚红排泄量，但差异无统计学意义（P＞0.05）。结果表明，北沙参提取物、茜草提取物、法卡林醇及大叶茜草素均具有一定的祛痰作用。见表4和表5。

结果表明，法卡林醇、法卡林二醇及大叶茜草素均具有镇咳、祛痰作用，符合质量标志物“五原则”中的“有效性”。初步推断法卡林醇、法卡林二醇及大叶茜草素可作为扫日劳胶囊发挥镇咳、祛痰药效的Q-marker。

3 讨论

3.1 基于质量传递与溯源的Q-marker 分析本研究从扫日劳胶囊中共鉴定出120个化学成分，其中石油醚提取物中含有44 个化合物，乙酸乙酯提取物85 个化合物，正丁醇提取物79 个化合物，水提取物71 个化合物。法卡林醇、法卡林二醇同时存在于石油醚和乙酸乙酯提取物中，大叶茜草素同时存在于石油醚、乙酸乙酯及正丁醇提取物中。可见，法卡林醇、法卡林二醇及大叶茜草素在扫日劳胶囊生产过程中，可从原药材传递到制剂中，并在制剂不同极性的提取物中被检测到，符合Q-marker 中“质量传递与溯源”原则，可作为扫日劳胶囊Q-marker 的选择参考。

3.2 基于成分特有性的Q-marker 分析特有性作为Q-marker 的五原则之一，是指同一类药材区别于其他药材的特征性成分[4]。

3.2.1 北沙参成分的特有性分析 北沙参为伞形科植物珊瑚菜GlehnialittoralisFr.Schmidt ex Miq.的干燥根[23]，含有香豆素类、聚炔类、挥发油、糖苷等多种结构类型的化学成分，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤及免疫调节等药理作用[24]，其中聚炔类[12]和糖苷类成分[25]为北沙参的主要活性成分。聚炔类成分是北沙参中含量最高的成分之一，而法卡林醇及法卡林二醇在聚炔类成分中的含量最高[12，26-27]。《香港中药材标准》第三册中将法卡林醇列为北沙参的含量测定指标[28]。因此，可将法卡林醇、法卡林二醇作为北沙参的特有性成分。

3.2.2 茜草成分的特有性分析 茜草为茜草科植物茜草RubiacordifoliaL.的干燥根和根茎[23]，含有醌类、环己肽类、多糖类等成分，其中大叶茜草素和羟基茜草素等醌类是其主要的活性成分。药理研究[8]表明，大叶茜草素和羟基茜草素生理活性较强，且含量较高。2020年版《中国药典》[23]及《香港中药材标准》第五册[28]均将大叶茜草素和羟基茜草素作为茜草的含量测定指标。因此，可将羟基茜草素和大叶茜草素作为茜草的特有性成分。

3.3 基于成分有效性的Q-marker 分析Q-marker的核心要素是有效性。研究[21，29-32]表明，法卡林醇及法卡林二醇可抑制巨噬细胞的炎症反应，并可通过下调NF-κB及其下游炎症标志物TNF-α、IL-6和COX-2发挥抗炎作用；大叶茜草素可调节NF-κB/MAPK 信号通路和抑制Th2 反应和激活M2 巨噬细胞发挥抗炎作用。本研究发现，法卡林醇、法卡林二醇及大叶茜草素能显著降低小鼠咳嗽次数；法卡林醇及大叶茜草素能显著增加小鼠的酚红排泄量，表明法卡林醇、法卡林二醇及大叶茜草素具有一定的镇咳、祛痰作用。因此，可将法卡林醇、法卡林二醇及大叶茜草素作为扫日劳胶囊Q-marker的选择参考。

3.4 基于成分可测性的Q-marker 分析扫日劳胶囊作为蒙药，相关含量测定指标成分的研究较少，现行标准中只对栀子苷进行了含量测定[3]。2020 年版《中国药典》规定茜草含量测定的指标成分为大叶茜草素和羟基茜草素[23]。《香港中药材标准》第3 册中规定北沙参含量测定的指标成分为法卡林醇[28]。张样柏[27]建立了北沙参指纹图谱方法，在北沙参指纹图谱中共检测出10个共有峰，指认了法卡林醇为特征峰，还利用液相色谱法同时测定了北沙参中法卡林醇和法卡林二醇的含量。利用上述研究方法，可对扫日劳胶囊中法卡林醇、法卡林二醇及大叶茜草素的含量进行测定，因此以上3 种成分可作为扫日劳胶囊Q-marker的选择参考。

基于Q-marker 的“传递与溯源”“特有性”“有效性”和“可测性”，法卡林醇、法卡林二醇及大叶茜草素可作为扫日劳胶囊的Q-marker。所以，本研究采用药效实验及网络药理学技术进一步预测扫日劳胶囊的Q-marker。

3.5 基于药效实验及网络药理学的扫日劳胶囊Qmarker 分析本研究发现，扫日劳胶囊不同极性提取物中，石油醚提取物的镇咳作用最强，正丁醇提取物的祛痰作用最强。基于液质解析结果，运用网络药理学构建扫日劳胶囊石油醚提取物及正丁醇提取物的“成分-靶点-疾病”网络，发现法卡林醇、法卡林二醇和大叶茜草素是扫日劳胶囊中发挥镇咳、祛痰作用的核心成分，而且此3种成分在扫日劳胶囊中的含量较高。

经药效实验进一步验证，法卡林醇高剂量组、法卡林二醇高剂量组及大叶茜草素高剂量组能显著减少小鼠咳嗽次数，具有显著的镇咳作用；法卡林醇高剂量组及大叶茜草素高剂量组能显著增加小鼠的酚红排泄量，具有显著的祛痰作用。

综上所述，法卡林醇、法卡林二醇和大叶茜草素可作为扫日劳清肺止咳胶囊发挥镇咳、祛痰作用的Q-marker，可为后续全面建立扫日劳清肺止咳胶囊质量评价方法提供较为可靠的理论依据。