CDK10在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义

康 东,马誉珊,冯钰迪,游颜杰

肝细胞癌(HCC)为全球最常见的恶性肿瘤之一,发病率和病死率均居高不下。研究显示,全世界每年死于HCC的人数近70万,死亡率也在逐年升高[1-2]。HCC是一种复杂的恶性疾病,涉及多种基因和多种因素。其病因、发病机制以及预后影响因素尚未完全阐明,多种基因和信号转导途径都可能与肝细胞癌的发生和发展有关[3-5]。因此,深入探寻分子标志物在早期诊断和治疗肝细胞癌方面的应用对于临床实践具有至关重要的意义[6]。细胞周期素依赖性蛋白激酶10(CDK10)是一种丝/苏氨酸相关的激酶,为CDK家族中的一员[7-9]。研究表明,CDK10在多种恶性肿瘤的发生和发展过程中都发挥着关键作用,通过调控细胞周期的G2期到M期参与肿瘤的发生和进展[10-11]。本研究通过免疫组化方法检测CDK10在HCC组织中的表达水平,分析HCC与癌旁组织中CDK10蛋白表达的差异,探讨其与临床病理参数及预后的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料:HCC石蜡组织芯片购自上海芯超生物科技有限公司,收集2007年1月至2009年11月接受治疗性外科手术经病理证实且临床资料完整的94例原发性HCC患者资料及其相应癌旁肝组织86例。94例原发性HCC组织中,女性10例,男性84例,年龄25～73岁,平均年龄53.6岁;根据国际抗癌联盟(UICC)TNM分期标准[12],TNM Ⅰ～Ⅱ期43例,TNM Ⅲ～Ⅳ期43例,缺失8例;按照病理Edmondson分级,Ⅰ～Ⅱ级66例,Ⅲ级28例。随访时间截至2013年9月,随访期内66.7%的患者死于肿瘤复发和转移。所有患者无术前放疗或化疗等相关辅助治疗史。该研究经宁夏回族自治区人民医院伦理委员会核准(2021PYZX008)。

1.2 主要试剂:Abcam公司提供了兔抗人多克隆CDK10抗体,EnVision和DAB显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 免疫组织化学染色:采用EnVision二步法对HCC石蜡切片组织进行检测,具体的步骤遵循实际说明书的规定进行操作。所有切片的阴性对照组均使用未免疫兔血清IgG代替一抗。

1.4 结果判定:CDK10免疫组化染色显示细胞质中有明显的黄色至棕黄色颗粒,为阳性细胞信号。每个切片随机选择10个高倍视野(×400),每个视野下计数100个肿瘤细胞。采用半定量(即染色强度评分结合细胞阳性率)计分标准。①染色强度评分中,0分为未染色细胞,1分为细胞染淡黄色,2分为细胞染棕黄色,3分为细胞染褐色;②细胞阳性率评分中,0分为细胞阳性率≤25%,1分为细胞阳性率在25%～50%,2分为细胞阳性率50%～75%,3分为细胞阳性率≥75%。根据染色强度评分和细胞阳性率评分的乘积结果,将其分为2组,评分结果≤3分为CDK10抗体低表达组,评分结果>3分为CDK10抗体高表达组。

1.5 统计学方法:应用SPSS 24.0统计软件,计数资料以n(%)表示;计数资料组间差异性分析采用χ2检验,若理论频数<1采用Fisher确切概率法,生存期分析采用Kaplan-Meier法;单因素与多因素分析均使用Cox比例风险回归模型。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CDK10在肝细胞癌及配对癌旁组织中的蛋白表达水平:CDK10蛋白主要分散于HCC细胞质内,呈棕黄色颗粒状。在配对癌旁组织中阳性率为59.30%,而在HCC组织中仅有32.98%的阳性率,差异具有统计学意义(P<0.05),见图1(目次后)和表1。

表1 CDK10在肝细胞癌及配对癌旁组织中的蛋白表达水平[n(%)]

2.2 CDK10蛋白表达与肝细胞癌患者临床病理特征的关系:CDK10低表达与HCC患者病理分级、肿瘤浸润深度、TNM分期、肿瘤大小、AFP有相关性(P<0.05);与年龄、性别、有无肿瘤血栓形成、有无肝硬化及一些免疫组化指标如CD34、Ki67、TP53、PDL1及CD8均无相关性(P>0.05),见表2。

表2 CDK10蛋白表达与肝细胞癌患者临床病理特征的关系[n(%)]

2.3 肝细胞癌组织中CDK10的表达水平与预后的关系:对94例HCC患者的生存时间进行Kaplan-Meier生存曲线分析,HCC组织中高表达CDK10组的HCC患者累积生存率明显高于低表达CDK10组(P<0.05)。根据Cox回归模型的单因素和多因素分析结果得出结论,在单因素分析中发现影响HCC患者预后的因素包括CDK10表达、有无肿瘤血栓形成、组织学分级、TNM分期以及肿瘤大小(P<0.05);经多因素分析发现,CDK10表达和组织学分级(P<0.05)可作为HCC患者预后的独立危险因素,见表3。

表3 肝细胞癌患者预后因素COX回归模型分析

3 讨论

HCC发生和发展是一个涉及多个基因和多种因素的复杂过程,需要综合考虑多种因素的作用。HCC发生率在我国居第3位,仅次于肺癌和胃癌[13]。HCC的早期筛查主要是通过影像学和血清学联合监测[14-16]。尽管近年来分子靶向、免疫治疗等多种手段常应用于HCC临床诊治,但总体疗效不理想[17-19]。因此寻找新型生物标志物对于改善HCC患者的整体预后有着十分重要的意义及临床应用价值。

CDK10是一种与丝/苏氨酸相关的激酶,是细胞周期蛋白依赖性激酶家族成员之一,在调控细胞周期G2期到M期的进展过程中发挥着重要作用。随着CDK家族成员的生理功能逐渐被发现,我们越来越多地认识到CDK在肿瘤的发生、发展过程中可能起着至关重要的作用。近年来的研究报道称,CDK10作为CDK家族的成员具有相似的生理功能,在许多肿瘤组织及细胞内的表达均有上调或下调,在不同的肿瘤组织和细胞中通过不同的机制调控肿瘤的发生发展。已有研究证实CDK10表达在胃癌组织中显著下调,在胃癌组织中CDK10表达水平下降与肿瘤分化程度、临床分期和患者生存时间密切相关[20]。根据本研究免疫组化结果,在HCC组织中,CDK10的表达量显著下调,明显低于癌旁组织。生存分析结果也表明CDK10高表达的患者总生存期较低表达患者显著延长,进一步提示CDK10高表达患者具有较高的生存率和较低的复发率。此外,COX单因素显示CDK10表达水平、有无肿瘤血栓形成、组织学分级、TNM分期及肿瘤大小均为HCC患者存活时间的相关影响因素。以上5个有统计学意义的单因素代入COX多因素分析显示,CDK10表达水平和组织学分级可以成为HCC患者预后预测的独立危险因素,提示CDK10表达可能是预测HCC患者预后的潜在生物标志物,在HCC发生发展过程中可能发挥着抑癌的作用。由于目前只验证了部分临床标本,本研究还未能体现CDK10在HCC中的具体分子及信号通路,有待扩大样本量在以后的研究中继续探索,以期为HCC的诊治提供更多参考。

综上所述,CDK10可能作为抑癌基因在HCC患者的肿瘤组织中呈现低表达状态,并与HCC恶性临床病理特征相关。对于CDK10的深入研究,有助于进一步阐明HCC的发病机制并完善其诊疗方案。